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黄曲霉毒素B1与游离dna结合模式及结合强度的研究

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黄曲霉毒素B1与游离DNA结合模式及结合强度的研究

作者：范俊甫广西科技大学

学位级别：硕士

为研究黄曲霉毒素B与游离dna结合模式及结合强度,本文通过多种分析方法研究了AFB与dna的相互作用机理,通过共振光散射法计算出AFB与dna相互作用的结合饱和值,并研究了多种因素如pH、温度、离子强度及其他环境共存物对AFB-dna体系的影响... 详细信息

为研究黄曲霉毒素B与游离dna结合模式及结合强度,本文通过多种分析方法研究了AFB与dna的相互作用机理,通过共振光散射法计算出AFB与dna相互作用的结合饱和值,并研究了多种因素如pH、温度、离子强度及其他环境共存物对AFB-dna体系的影响。研究了黄曲霉毒素B与鲱鱼精dna的体外相互作用机理。dna热变性温度测定实验结果表明,dna的热变性温度T提高了约13.1℃,是由于dna双螺旋结构变得更加致密和稳定,是AFB分子嵌入到了dna分子的碱基对之间导致的。紫外-可见光谱表明,dna结构发生了变化,并形成了一种新的AFB-dna配合物,其相互作用方式为嵌入模式。荧光猝灭光谱还表明,AFB与溴化乙锭(EB)之间存在竞争性相互作用,形成了AFB-dna复合物,与EB相比可以判断其作用模式为嵌入模式。与Circular Dichroism光谱中245nm处的负峰信号增强和270nm处的正峰信号变化表明,dna碱基对之间的堆积情况发生了变化,且B-dna含量增加,也证明AFB分子是通过嵌入模式而进入到dna碱基对之间的,且275nm附近存在明显的剂量依赖性增大的负峰,表明AFB可能属于dna嵌入剂。琼脂糖凝胶电泳结果表明,dna分子携带者AFB分子向正极移动,在泳道中发蓝色光芒,说明其结合模式为嵌入。所有这些结果表明,在体外,dna与AFB的相互作用模式为嵌入模式。AFB分子与dna在体外是可以自发发生相互作用的,其作用模式为嵌插,这表明通过dna选择性结合黄曲霉毒素并采用油水分离或磁珠吸附方法分离AFB-dna体系来消除黄曲霉毒素是具有一定的可行性。根据荧光数据分析及双对数回归曲线结果表明,AFB与EB-dna的结合常数为5.58L/mol,且dna分子中EB结合的位点大约被1个AFB分子所取代,结合常数较弱;通过Scatchard方程法计算得到AFB与dna的结合常数和结合位点,也证实其结合模式为嵌入模式,与紫外滴定法计算得到结果基本上一致。热力学数据表明,AFB-dna的形成是一种无酶氧化的能够自发发生结合反应的反应,其主要驱动力是范德华力和氢键作用力。共振光散射光谱研究表明,AFB、溴化乙锭、补骨脂素和异补骨脂素与dna结合饱和值分别为15.59、2.14、0.74和0.74。AFB与的dna结合能力弱于EB,但强于PSO和ANG。对AFB与dna之间的结合强度研究为通过dna选择性结合黄曲霉毒素达到消除目的提供定量参考。通过共振散射光谱法研究影响AFB与dna相互作用的因素,生理条件pH7.40、30℃、较低离子强度、为AFB-dna体系形成的最适条件,dna BSV值达到3.17。强酸强碱条件不利于AFB-dna体系的形成,温度、阳离子对体系RLS信号强度较为敏感,葡萄糖、烟酸、氨基乙酸能够使得体系RLS信号强度增强,但却会降低dna BSV值,L-赖氨酸、甘油、尿素、葡聚糖以及复合蛋白酶会对实验造成较大的影响。在AFB-dna体系分离的过程中应尽可能设置在pH 7.40、30℃,减少分离过程中阳离子及其他杂质的存在。对AFB分子与dna结合强度及其影响因素的研究,能够为AFB-dna体系的形成及其分离过程提供了更加合适的条件。

关键词：黄曲霉毒素B1 结合模式结合强度 dna结合饱和值影响因素理论

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5种呋喃香豆素分子潜在风险分析

广东农业科学 2019年第2期46卷 113-119页

作者：范俊甫李军生李荫展王倩倩黄国霞阎柳娟广西科技大学广西糖资源绿色加工重点实验室广西柳州545006 广西高通食品科技有限公司广西柳州545100

【目的】研究5种呋喃香豆素分子与dna的相互作用,分析其潜在风险。【方法】通过共振散射光谱法(RLS)计算呋喃香豆素分子与dna的结合饱和值(dna BSV),通过dna BSV反映药物分子与dna结合能力以评价其潜在风险。【结果】大肠杆菌dna回收试... 详细信息

【目的】研究5种呋喃香豆素分子与dna的相互作用,分析其潜在风险。【方法】通过共振散射光谱法(RLS)计算呋喃香豆素分子与dna的结合饱和值(dna BSV),通过dna BSV反映药物分子与dna结合能力以评价其潜在风险。【结果】大肠杆菌dna回收试验结果表明,呋喃香豆素类分子可以或部分进入大肠杆菌细胞内,并与dna发生相互作用;呋喃香豆素RLS信号变化与溴化乙锭十分相似,其进入大肠杆菌dna的能力由强到弱依次为:异补骨脂素/补骨脂素、花椒毒酚、香柠檬烯、花椒毒素。【结论】呋喃香豆素类分子能够从体外转移到大肠杆菌内部并于其dna发生相互作用,且结合模式可能是嵌入;通过计算各自的dna BSV,推测5种呋喃香豆素类化合物潜在风险不大,但仍具有一定风险。

关键词：呋喃香豆素分子共振散射光谱法相互作用 dna结合饱和值潜在风险分析

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乙酰紫草素的潜在毒性机理研究及毒性评价

食品工业 2015年第5期36卷 174-178页

作者：李蔚仑李军生黄国霞阎柳娟王倩倩王微广西科技大学生物与化学工程学院柳州545006

为了研究乙酰紫草素的潜在毒性机理,使用双荧光探针法和共振散射光谱法,研究其与dna的相互作用。结果表明,乙酰紫草素不仅能键合进dna的小沟槽,还能和dna发生较弱的嵌入结合,产生毒性作用。试验使用结合饱和值,快速评价了乙酰紫草素的... 详细信息

为了研究乙酰紫草素的潜在毒性机理,使用双荧光探针法和共振散射光谱法,研究其与dna的相互作用。结果表明,乙酰紫草素不仅能键合进dna的小沟槽,还能和dna发生较弱的嵌入结合,产生毒性作用。试验使用结合饱和值,快速评价了乙酰紫草素的潜在毒性,求得其与dna的结合饱和值为1.6 7,与溴化乙锭,阿霉素,茜素和1-羟基蒽醌进行比较发现,其值虽远小于溴化乙锭和阿霉素,但大于茜素和1-羟基蒽醌,说明乙酰紫草素存在一定毒性。还分别考察了氯化钠,氯化钙,葡萄糖,异亮氨酸,组氨酸和维生素C这6种可能同食的环境共存物对乙酰紫草素-dna结合饱和值的影响。在环境共存物影响程度最大时,测定乙酰紫草素-dna的结合饱和值分别为1.43,1.33,1.54,1.67,1.82和1.54。

关键词：乙酰紫草素 dna 毒性机理 dna结合饱和值毒性评价

通过共振散射光谱研究蒽醌类色素的毒性机理并对其潜在毒性进行评价

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通过共振散射光谱研究蒽醌类色素的毒性机理并对其潜在毒性进行评...

作者：李姹姹广西科技大学

学位级别：硕士

为了研究蒽醌类色素的毒性机理并快速对其潜在毒性进行评价，本文引入dna嵌入理论，并通过共振散射光谱检测分析，推算出茜素、红紫素、1-羟基蒽醌等与dna的结合饱和值，进一步与溴化乙锭、阿霉素、米托蒽醌与dna的结合饱和值进行比较... 详细信息

为了研究蒽醌类色素的毒性机理并快速对其潜在毒性进行评价，本文引入dna嵌入理论，并通过共振散射光谱检测分析，推算出茜素、红紫素、1-羟基蒽醌等与dna的结合饱和值，进一步与溴化乙锭、阿霉素、米托蒽醌与dna的结合饱和值进行比较，快速评价茜素、红紫素、1-羟基蒽醌等的毒性大小，并建立相应的蒽醌类色素潜在毒性快速预警方法。通过共振散射光谱检测分析，茜素、红紫素、1-羟基蒽醌与dna结合饱和值分别为0.20、6.41、0.18，而溴化乙锭、阿霉素、米托蒽醌与dna结合饱和值分别为14.90、10.61和3.41。因此可以推断出，红紫素毒性介于阿霉素和米托蒽醌之间，茜素、1-羟基蒽醌的毒性小于米托蒽醌的毒性，而三者的毒性都远远小于溴化乙锭。通过共振散射光谱检测分析环境因素对茜素、红紫素、1-羟基蒽醌与dna的结合饱和值影响。组氨酸、葡萄糖、酸碱性条件下会减小茜素的结合饱和值，天冬氨酸、色氨酸和NaCl会增大茜素与dna的结合饱和值;葡萄糖、亮氨酸、VB12和牛血清白蛋白会减小红紫素与dna的结合饱和值，CaCl2会增大红紫素与dna的结合饱和值;叶酸、组氨酸、苏氨酸及碱性条件下会减小1-羟基蒽醌与dna的结合饱和值，NaCl、葡萄糖、牛血清白蛋白以及酸性条件下会增大1-羟基蒽醌与dna的结合饱和值。通过以上结果得出，可以通过改变环境因素来增大或是减小茜素、红紫素、1-羟基蒽醌的毒性。以溴化乙锭为参照，应用荧光分光光度法、紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳实验研究茜素、红紫素、1-羟基蒽醌与dna的相互作用关系。茜素、红紫素和1-羟基蒽醌与溴化乙锭类似，均能与dna结合，并且结合强弱顺序为溴化乙锭>红紫素>茜素>1-羟基蒽醌。同样以溴化乙锭为参照，通过抑菌试验研究茜素、红紫素和1-羟基蒽醌的抑制细菌生长能力大小，抑制细菌生长能力大小顺序为溴化乙锭>红紫素>茜素>1-羟基蒽醌。以上所得结果与本研究的方法所得结果一致，所以本研究的方法是可行可靠的。以溴化乙锭、阿霉素、米托蒽醌为参照，通过共振散射光谱检测分析茜素、红紫素、1-羟基蒽醌对大肠杆菌的作用。茜素、红紫素、1-羟基蒽醌与溴化乙锭、阿霉素、米托蒽醌一样均能与大肠杆菌基因组dna作用且能够存留在活体细胞中。通过本研究的方法能够得出几种化合物对大肠杆菌基因组dna作用最强时间，溴化乙锭、阿霉素、米托蒽醌、茜素、红紫素、1-羟基蒽醌作用最强时间分别为4.0h、5.0h、3.5h、6.5h、4.5h、4.0h。

关键词：蒽醌色素共振散射 dna结合饱和值潜在毒性

蒽醌类茜草色素潜在毒性作用机理及其评价方法的研究

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蒽醌类茜草色素潜在毒性作用机理及其评价方法的研究

作者：高颜广西科技大学

学位级别：硕士

为研究光泽汀、茜根定、蒽棕等蒽醌类天然食用色素的潜在毒性,本文首先运用荧光探针标记法、紫外-可见光谱法(UV-vis)、dna热变性实验、粘度实验、循环伏安法(CV)、共振散射光谱法(RLS)等多种试验方法研究这三种蒽醌类茜草色素分子与DN... 详细信息

为研究光泽汀、茜根定、蒽棕等蒽醌类天然食用色素的潜在毒性,本文首先运用荧光探针标记法、紫外-可见光谱法(UV-vis)、dna热变性实验、粘度实验、循环伏安法(CV)、共振散射光谱法(RLS)等多种试验方法研究这三种蒽醌类茜草色素分子与dna之间的相互作用关系;然后运用共振散射光谱法检测并推算出在pH=7.41的条件下光泽汀、茜根定、蒽棕三种药物分子与dna之间的结合饱和值;基于对共振散射光谱的研究,以阿霉素、茜素、大黄素、大黄酸等平面刚性分子的结合饱和值做比较,建立一种快速评价蒽醌类物质潜在毒性的新方法。主要研究结果如下:1.通过荧光探针标记法、紫外-可见分光光度法、dna热变性实验、粘度实验、电化学实验等试验探究这三种药品与dna的相互作用方式。其中荧光探针标记法显示这三种药物分子与dna之间存在与溴化乙锭(EB)相似的荧光猝灭现象;紫外可见光谱法(UV-vis)证实光泽汀、茜根定、蒽棕与dna之间发生了红移和减色效应;dna热变性实验证实这三种药物分子可以使dna的Tm(dna解链温度)值升高;电化学试验显示这三种物质可以和dna发生电化学反应使溴化乙锭的峰值降低。这些实验结论均证明这三种蒽醌分子与dna之间具有嵌插作用。本研究运用Stern-Volmer方程获得三种蒽醌类分子的猝灭形式并推算出其在不同温度条件下与EB-dna体系的结合常数,通过Scatchard方程法计算不同浓度的光泽汀、茜根定、蒽棕分子对EB-dna体系的n值和r值,进而直观表述其与dna的结合能力和结合强度。2.用共振散射光谱法检测并推算出在中性环境中光泽汀、茜根定、蒽棕与dna的结合饱和值分别为2、3.33、3.75。3.基于共振散射光谱法,以阿霉素、大黄酚、大黄酸、茜素等平面刚性分子的结合饱和值作比较求得三种药物分子的结合饱和值的变化率,通过比较得出此三种物质的结合饱和值低于阿霉素但高于大黄酚、大黄酸和茜素,说明这三种药物分子的潜在毒性低于阿霉素但高于大黄酚、大黄酸和茜素。

关键词：蒽醌嵌插共振散射光谱法 dna结合饱和值潜在毒性

一些呋喃香豆素调味剂分子潜在毒性机理和快速预警检测方法的研究

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一些呋喃香豆素调味剂分子潜在毒性机理和快速预警检测方法的研究

作者：王倩倩广西科技大学

学位级别：硕士

为研究花椒毒素、香柠檬烯、花椒毒酚这三种呋喃香豆素调味剂分子的潜在毒性，本文首先用共振散射光谱法检测了这三种药物分子分别与大肠杆菌作用后的大肠杆菌dna信号，证明这三种药物分子可以进入到大肠杆菌细胞内并与其dna结合;然后... 详细信息

为研究花椒毒素、香柠檬烯、花椒毒酚这三种呋喃香豆素调味剂分子的潜在毒性，本文首先用共振散射光谱法检测了这三种药物分子分别与大肠杆菌作用后的大肠杆菌dna信号，证明这三种药物分子可以进入到大肠杆菌细胞内并与其dna结合;然后运用紫外-可见分光光度法、dna热变性实验、粘度实验、琼脂糖凝胶电泳实验、共振散射光谱法研究这三种药物分子与dna的相互作用关系，通过比较这几种方法，选择出较为简便和快捷的共振散射光谱法，并用其检测和推算这三种分子与dna的结合饱和值，再参照溴化乙锭和异补骨脂素的结合饱和值，来建立一种快速评价平面呋喃香豆素分子潜在毒性的新方法;最后考察环境因素对这三种药物分子与dna相互作用的影响。主要研究结果如下：1.用共振散射光谱法研究花椒毒素、香柠檬烯、花椒毒酚进入大肠杆菌dna的能力，结果表明，这三种药品均能部分进入到大肠杆菌细胞内，并与大肠杆菌dna结合，且其进入大肠杆菌的能力相差不大，只有微小的区别，作用至8.5h时，香柠檬烯组与花椒毒酚组的信号强度几乎相同，花椒毒素组的稍次之，说明香柠檬烯与花椒毒酚进入大肠杆菌的能力比花椒毒素稍强。2.通过紫外-可见分光光度法、dna热变性实验、粘度实验、琼脂糖凝胶电泳法、共振散射光谱法来探究这三种药品与dna的相互作用的方式，其中琼脂糖凝胶电泳法表明该三种药品确实与dna发生了作用，共振散射光谱法、紫外-可见分光光度法，dna热变性实验、粘度实验的结果均表明这三种药物分子与dna之间可能存在嵌插结合。且由比较得出，这几种方法在研究花椒毒素、香柠檬烯、花椒毒酚与dna相互作用方式中，共振散射光谱法更为灵敏和快捷。3.用共振散射光谱法检测并推算出在中性环境中花椒毒素、香柠檬烯、花椒毒酚与dna的结合饱和值分别为0.18、0.18、0.24，而溴化乙锭、异补骨脂素与dna的结合饱和值分别为：14.70、0.34，由此可知，花椒毒酚的毒性稍大于花椒毒素和香柠檬烯的毒性，但这三者的毒性均略小于异补骨脂素的毒性，远小于溴化乙锭的毒性，由此来建立一种快速评价平面呋喃香豆素分子潜在毒性的新方法。4.用共振散射光谱法探究环境因素对花椒毒素、香柠檬烯、花椒毒酚与dna结合饱和值的影响，改变环境条件或因素，这三种药物分子与dna的结合能力也发生改变：酸性环境、碱性环境、葡萄糖、低浓度的Zn2+存在的环境可降低花椒毒素与dna的结合饱和值，氯化钠、谷氨酸、维生素C、L-脯氨酸可使其结合饱和值增大;葡萄糖、Zn2+可降低香柠檬烯与dna的结合饱和值，酸性环境、氯化钠、L-脯氨酸、维生素C可使其结合饱和值增大，碱性环境、苏氨酸对其结合饱和值无影响;葡萄糖、低浓度的Zn2+存在的环境可降低花椒毒酚与dna的结合饱和值，酸性环境、氯化钠、维生素C、L-脯氨酸可使其结合饱和值增大，碱性环境和苏氨酸对其结合饱和值无影响。

关键词：呋喃香豆素共振散射光谱法 dna结合饱和值潜在毒性