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利用粗线期染色体和dna纤维的FISH分析水稻端粒序列(英文)

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Acta Genetica Sinica 2005年第8期32卷 832-836页

作者：李宗芸覃瑞金危危熊志勇宋运淳徐州师范大学生命科学学院徐州221116 中南民族大学化学与生命科学院武汉430074 武汉大学植物发育生物学教育部重点实验室武汉430072

利用粗线期染色体和dna纤维的荧光原位杂交(FISH)技术分析了水稻广陆矮四号(***.4)的端粒序列。粗线期染色体荧光原位杂交结果表明,大多数染色体的末端都有端粒串联重复,但信号的强度在不同染色体上是不同的。伸展dna纤维荧光原位杂交... 详细信息

利用粗线期染色体和dna纤维的荧光原位杂交(FISH)技术分析了水稻广陆矮四号(***.4)的端粒序列。粗线期染色体荧光原位杂交结果表明,大多数染色体的末端都有端粒串联重复,但信号的强度在不同染色体上是不同的。伸展dna纤维荧光原位杂交结果显示,端粒最长的线状信号长度为6.55μm,最短的为1.82μm,依据2.51kb/μm的标准,它们分别相当于16.44kb和4.56kb。端粒的平均信号长度为3.62±1.32μm,相当于9.09±3.31kb。由此可以估计,最长的、最短的和平均长度的端粒拷贝数约为2349、651和1298±473。

关键词：端粒序列 dna纤维粗线期染色体荧光原位杂交

适用于棉花荧光原位杂交的dna纤维高效制备技术

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作物学报 2009年第3期35卷 412-417页

作者：彭仁海宋国立刘方黎绍惠王春英张香娣王玉红王坤波中国农业科学院棉花研究所／农业部棉花遗传改良重点实验室河南安阳455000 安阳工学院生物与食品工程学院河南安阳455000

棉花富含酚类和多糖等高分子次生化合物,细胞质浓厚,且染色体形态小、数目多、制片困难,至今还未见棉花dna纤维制备方面的报道。本研究用"刀切引流法",在含有Triton X-100和PVP40的冰冷细胞核提取缓冲液中,用锋利的刀片切割发育一周的... 详细信息

棉花富含酚类和多糖等高分子次生化合物,细胞质浓厚,且染色体形态小、数目多、制片困难,至今还未见棉花dna纤维制备方面的报道。本研究用"刀切引流法",在含有Triton X-100和PVP40的冰冷细胞核提取缓冲液中,用锋利的刀片切割发育一周的棉花黄化子叶以释放棉花细胞核,所得细胞核干净完整杂质少,不需要研磨和巯基乙醇等处理,方便快捷无毒害,成功率达到100%。细胞核在室温下经温和碱裂解去除染色质上的蛋白质后,以前端导引裂解液铺展载玻片,即"引流法"拉伸制备dna纤维,避免了液体表面张力的影响,消除了因载玻片推抹用力不均而导致的dna纤维堆积和断裂,所制备的dna纤维平直完整、伸展程度均匀、背景清晰。用基因组和45S rdna分别标记探针进行杂交,结果表明所制备的棉花dna纤维适用于荧光原位杂交。本研究探索出一套简单、高效、快捷、无毒害的适宜于棉花荧光原位杂交的dna纤维制备技术,必将为棉花基因组研究和全基因组序列的最终完成提供强有力的技术支持。

关键词：棉花荧光原位杂交 dna纤维高效制备

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小麦根尖细胞同步化诱导和dna纤维的制备

西北植物学报 2006年第7期26卷 1326-1329页

作者：王晓娜杜伟莉张改生牛娜西北农林科技大学陕西省作物杂种优势研究与利用重点实验室陕西杨陵712100

为了简易快速地获得大量小麦（Triticum aestivumL．）中期染色体和dna纤维，以普通小麦根尖为材料，采用羟基脲（hydroxyurea，简称HU），氟乐（trifluralin）结合的双阻断法进行了染色体中期同步化诱导。结果表明，染色体有丝分裂中... 详细信息

为了简易快速地获得大量小麦（Triticum aestivumL．）中期染色体和dna纤维，以普通小麦根尖为材料，采用羟基脲（hydroxyurea，简称HU），氟乐（trifluralin）结合的双阻断法进行了染色体中期同步化诱导。结果表明，染色体有丝分裂中期指数（metaphaseindex）达70％～80％；以同材料小麦黄化苗提取小麦细胞核，成功制备出小麦dna纤维。这为研究细胞有丝分裂的调控、染色体形态结构、易位染色体检测和易位染色体片段的精确测量与定位等提供了新的技术支撑。

关键词：小麦同步化 dna纤维

枇杷dna纤维制备及Fiber-FISH技术体系的建立与应用

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枇杷DNA纤维制备及Fiber-FISH技术体系的建立与应用

作者：陈卫娅西南大学

学位级别：硕士

dna纤维荧光原位杂交(Fiber fluorescence in situ hybridization, Fiber-FISH)是一项重要的分子细胞遗传学研究技术,在染色体高分辨率物理图谱构建、基因精细定位、基因序列分析以及全基因组测序等方面具有重要的应用价值。本文利用普... 详细信息

dna纤维荧光原位杂交(Fiber fluorescence in situ hybridization, Fiber-FISH)是一项重要的分子细胞遗传学研究技术,在染色体高分辨率物理图谱构建、基因精细定位、基因序列分析以及全基因组测序等方面具有重要的应用价值。本文利用普通二倍体枇杷‘兴宁1号’为试验材料,进行了枇杷dna纤维制备技术研究,并以SSR标记序列与45S rdna为探针,开展了枇杷Fiber-FISH相关技术体系的研究并进行了初步应用,主要结果如下： (1)进行了枇杷dna纤维制备技术的摸索,包括细胞核提取方法、试验材料的选取与dna纤维伸展等技术要点。对“刀切法”与“液氮研磨法”进行细胞核提取的效果进行了比较,并对枇杷不同发育时期的黄化子叶为试验材料进行细胞核提取的效果进行了比较。采用“刀切法”相对于“液氮研磨法”进行细胞核提取效果较好,前者简便无毒,细胞核完整、无破损,且提取率为100%,后者操作复杂、有毒,且杂质多,细胞核易破损不完整,得率相对较低。通过“刀切法”进行不同发育时间的黄化子叶提取细胞核的效果比较发现,发育4d的黄化子叶提取的细胞核含有杂质,提取效果不好;发育10d的黄化子叶由于趋于老化且可能腐烂,因此不能提取得到细胞核;发育7d的黄化子叶提取细胞核效果最好,杂质少、细胞核完整,且提取率为100%。对提取的细胞核浓度进行了比较,发现取80mg的黄化子叶,加入30μl的细胞核贮存液所获得的细胞核浓度为5×106-7个/ml,适宜进行dna纤维的制备,而加入60μl的细胞核贮存液获得的细胞核浓度则过低,不适宜于dna纤维的制备。对dna纤维的伸展方法进行了比较,发现重力自然拉伸法与载玻片推动涂抹法制备的dna纤维质量相对较差,重力自然拉伸法制备的dna纤维,可能会出现dna纤维交叉、重叠且分布不均匀,而载玻片推动涂抹法则可能会导致dna纤维交叉、堆积、断裂与丢失;效果较好的是载玻片前端引流法,这种方法制备的dna纤维伸展平直、分布均匀、无交叉重叠、无断裂且较为完整。 (2)以‘大渡河枇杷’SSR标记序列SSR1与SSR2,以及45S rdna为探针分别进行了中期染色体与dna Fiber上的FISH研究,同时在原有研究基础上进行了FISH体系的优化,并结合这两种FISH结果进行了比较分析。 FISH体系优化主要针对杂交与变性、杂交后洗脱严谨度以及杂交信号检测等技术要点。SSR-FISH与Fiber-FISH流程相同,在45S rdna-FISH基础上,第一,严格控制变性温度与时间;第二,杂交后洗脱温度由37℃降为35℃,洗脱次数由3次降为2次;第三,Anti-Dig-FITC抗体浓度由2μg/ml提高至4μg/ml,且反应时间由1h增加至1.5h;另外,dna纤维衬染时,DAPI浓度由2μg/ml提高至5μg/ml,染色时间由10min增加至20min。 SSR1与SSR2在中期染色体与间期细胞核中均分别检出2个位于2条染色体且信号强弱相同即均较弱、大小类似且位置相同即均位于近着丝粒区域的杂交信号,推测可能是1对同源信号;45S rdna在中期染色体与间期细胞核中检出了4个杂交信号,其中2个较强、分布区域较大且位于染色体近端部,另2个相对较弱、分布区域较小且位于染色体近端部,推测可能为2对同源信号,并推测供目标染色体组发生了染色体与基因的重组;同时利用原子力显微镜进行杂交信号的检测,获得了清晰的扫描图片,确定了信号在中期染色体上的区域、大小及表面形貌。 SSR1、SSR2与45S rdna在dna纤维上均呈现典型的非连续念珠状杂交信号,3种探针在dna纤维上杂交信号的长度分别为15～30μm、20～35μm、30～45μm,且根据信号的非连续性与念珠状认为杂交信号是真实的。结合SSR1、SSR2与45S rdna这3种探针在枇杷体细胞中期染色体与dna纤维上的FISH研究结果,初步总结认为：①SSR1与SSR2探针可清晰准确地定位在中期染色体与dna纤维上,Fiber-FISH具有更高的分辨率,且认为所用大渡河SSR标记片段在供试‘兴宁1号’的2条染色体中可能呈现不同拷贝数的分布;②45S rdna探针也可清晰准确地定位在中期染色体与dna纤维上,认为两种FISH结果是可靠的和一致的,且45S rdna在供试材料基因组中的分布区域、位置以及拷贝数均存在明显差异。

关键词：枇杷荧光原位杂交细胞核 dna纤维 Fiber-FISH

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水稻中期染色体和dna纤维的高效制备技术

武汉植物学研究 2004年第4期22卷 364-367页

作者：彭莉莉赵丽娟宋运淳李立家武汉大学教育部植物发育生物学重点实验室武汉430072

水稻中期染色体和dna纤维制备是水稻分子细胞遗传学研究中的关键技术。目前,这两个技术还有很多不足,该研究建立了高效制备水稻中期染色体和dna纤维的方法。该方法制备的染色体,分裂相多、杂质少、背景清晰、染色体分散且形态好,水稻根... 详细信息

水稻中期染色体和dna纤维制备是水稻分子细胞遗传学研究中的关键技术。目前,这两个技术还有很多不足,该研究建立了高效制备水稻中期染色体和dna纤维的方法。该方法制备的染色体,分裂相多、杂质少、背景清晰、染色体分散且形态好,水稻根尖分生组织细胞的分裂指数高达25%。植物细胞的细胞壁是制备dna纤维的最大障碍,所以必须先提取细胞核,然后裂解细胞核释放出dna纤维。在这个研究中,还建立了一个用刀切法分离细胞核,进而用SDS裂解核膜,用载玻片拖出dna来制备水稻dna纤维的方法。该方法制备的dna纤维多呈平行的细线,背景清晰,伸展的程度均匀,适合于原位杂交。

关键词：水稻中期染色体 dna纤维高效制备

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dna纤维上的原位杂交技术

国外医学（分子生物学分册） 2000年第1期22卷 14-17页

作者：王永强刘榜李奎华中农业大学畜牧兽医学院动物分子生物学与育种实验室武汉430070

dna纤维上的荧光原位杂交(Fiber-FISH)技术是一种非常重要的分子细胞遗传学技术。对于高分辨物理图的绘制、基因组和染色体结构的研究、致病基因的定位克隆等都有很大作用,本文介绍了该技术的基本操作和应用,以及与引物原位dna合成(PRI... 详细信息

dna纤维上的荧光原位杂交(Fiber-FISH)技术是一种非常重要的分子细胞遗传学技术。对于高分辨物理图的绘制、基因组和染色体结构的研究、致病基因的定位克隆等都有很大作用,本文介绍了该技术的基本操作和应用,以及与引物原位dna合成(PRINS)等技术相结合进行更精确基因定位的潜力。

关键词： dna纤维荧光原位杂交引物原位dna 合成

dna纤维经醋酸处理后脱嘌呤的拉曼谱带分析

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分析测试学报 2001年第5期20卷 1-4页

作者：余多慰柯惟中赵含英朱景宁南京师范大学生命科学学院江苏省生物资源重点实验室江苏南京210097

鲱鱼精dna纤维经醋酸处理 ,0.5h内以B型构象为主 ,这是酸溶液溶解dna纤维的结果 ;dna纤维在醋酸中浸润17h后 ,A、B型构象都存在 ,以A型居多 ;在拉曼光谱分析中 ,由于存在醋酸脱嘌呤的干扰 ,所以主链构象仅依磷酸脱氧核糖核酸主链—OPO... 详细信息

鲱鱼精dna纤维经醋酸处理 ,0.5h内以B型构象为主 ,这是酸溶液溶解dna纤维的结果 ;dna纤维在醋酸中浸润17h后 ,A、B型构象都存在 ,以A型居多 ;在拉曼光谱分析中 ,由于存在醋酸脱嘌呤的干扰 ,所以主链构象仅依磷酸脱氧核糖核酸主链—OPO—特征模得出的结论为准 ;dna经酸处理后 ,拉曼图谱中表征N9R糖苷键的诸峰均减色明显 ,有些甚至消失 ,这表明了脱嘌呤变化 ;在该过程中 ,碱基质子化作用也极为显著 ,它与脱嘌呤变化的共同作用导致N3、N7、N9 原子两侧各键的电子云有不同程度减色 ,它们均导致了dna双链之间氢键的断裂 ,使有关特征峰表现出相应的变化 ,但醋酸处理dna并不导致dna单链的断裂。

关键词：拉曼光谱 dna纤维醋酸脱嘌呤酸处理氢键

利用精密作图和dna纤维荧光原位杂交把灯笼椒抗烟草花叶病毒属病毒L^3基因定位于含高度重复序列的类抗病基因簇的400kb区

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辣椒杂志 2008年第4期6卷 42-45页

作者： R.Tomita J.Murai Y.Miura 戴静

我们用辣椒(Capsicum annuum)栽培种(已导入了灯笼椒Capsicum chinenseL3基因)的种内F2代群体(2016株)和种间F2代群体(3391株)(由灯笼椒与Capsicum frutescence杂交产生)对灯笼椒抗烟草花叶病毒属病毒的L3基因进行定位。通过L3基因抗性... 详细信息

我们用辣椒(Capsicum annuum)栽培种(已导入了灯笼椒Capsicum chinenseL3基因)的种内F2代群体(2016株)和种间F2代群体(3391株)(由灯笼椒与Capsicum frutescence杂交产生)对灯笼椒抗烟草花叶病毒属病毒的L3基因进行定位。通过L3基因抗性紧密相关的AFLP分子标记的BAC文库的分析,揭示出番茄抗病同源基因I2的存在。通过简并PCR技术,对来自35株不同辣椒的同源基因I2的部分或全部编码序列进行克隆,且在种间组合中产生了17个遗传标记。图谱显示:L3基因位于I2同源基因标记IH1-04和BAC-end标记189D23M中间,L3基因定位于包含两个不同BAC重叠群的区内,这两个不同的BAC重叠群分别由4个和1个无性系组成。dna纤维荧光原位杂交揭示这两个重叠群被约30kb隔开。dna纤维荧光原位杂交结果和BAC无性系的Southern杂交表明在高度重复序列中富集包含L3基因位点的区。Southern杂交表明两个BAC重叠群包含多于十个的I2同源基因拷贝体。相反,对于种间F2代群体,,重组后代没有结合位点,在种内F2代群体中,该结合位点存在于两个不同的BAC重叠群内,这两个不同的BAC重叠群分别由7个和2个无性系组成。而且,两个群体间结合位点分配的不同表明在含有L基因位点的区域连锁不平衡。

关键词：抗烟草花叶病毒荧光原位杂交高度重复序列 dna纤维基因定位基因簇灯笼椒 Southern杂交

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莲藕dna纤维的制备方法

渝西学院学报（自然科学版） 2004年第4期3卷 66-67页

作者：刁英渝西学院生命科学系重庆永川402168

建立了一种高效制备莲藕伸展dna纤维的方法。

关键词：莲藕 dna纤维方法