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中华消化杂志 2004年第2期24卷 67-70页

作者：陆嵘房静远朱红音陈萦晅程中华李恩灵上海第二医科大学附属仁济医院上海市消化疾病研究所 200001

目的　分析dna甲基化酶 1(DNMT1)基因的真核表达质粒对人结肠癌细胞肿瘤相关基因的表达影响。方法　分别构建并转染含有人正义和反义DNMT1的真核表达质粒入结肠癌SW 1116细胞 ,PCR和限制性内切酶证实转染结果 ,以Western印迹法分析各组... 详细信息

目的　分析dna甲基化酶 1(DNMT1)基因的真核表达质粒对人结肠癌细胞肿瘤相关基因的表达影响。方法　分别构建并转染含有人正义和反义DNMT1的真核表达质粒入结肠癌SW 1116细胞 ,PCR和限制性内切酶证实转染结果 ,以Western印迹法分析各组细胞DNMT1蛋白的表达情况。定量PCR检测hMLH1、hMSH2及c myc、p16 INK4A 基因的表达。结果　经G4 18筛选得到稳定转染DNMT1基因的结肠癌细胞系 ,且分别在该转染有正义和反义质粒的细胞系中 ,DNMT1蛋白表达上调和下调。同时发现转染正义DNMT1的细胞中hMLH1、hMSH2及c myc的表达降低 ,而转染反义DNMT1的细胞中hMSH2的表达明显增强。各组细胞p16 INK4A基因的表达差异不明显。

关键词： dna甲基化酶1 基因重组结肠癌细胞系肿瘤相关基因基因转染 Western印迹法

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叶酸对宫颈癌细胞中miR-375及DNMT1表达的影响

叶酸对宫颈癌细胞中miR-375及DNMT1表达的影响

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作者：郭路路山西医科大学

学位级别：硕士

目的:1.研究叶酸、mi R-375对宫颈癌细胞Siha的生物学特性的影响;2.验证课题组前期叶酸对宫颈癌细胞Siha中mi R-375的表达的影响;3.研究叶酸及mi R-375对宫颈癌细胞Siha中DNMT1表达的影响。方法:1.使用含有不同浓度叶酸的培养基培养宫... 详细信息

目的:1.研究叶酸、mi R-375对宫颈癌细胞Siha的生物学特性的影响;2.验证课题组前期叶酸对宫颈癌细胞Siha中mi R-375的表达的影响;3.研究叶酸及mi R-375对宫颈癌细胞Siha中DNMT1表达的影响。方法:1.使用含有不同浓度叶酸的培养基培养宫颈癌细胞Siha,以及使用mi R-375模拟物、mi R-375抑制物转染宫颈癌细胞Siha,通过划痕实验分别观察96孔板中mi R-375inhibitor、mi R-375 mimics、对照组中细胞的侵袭迁移能力,每组6个孔,共18孔,使用Cytation5细胞成像微孔板检测系统分别采集每孔在0h、48h的图像,通过image J软件对采集到的图像进行处理分析,计算每孔在48h时的伤口愈合百分比=(最初始划痕面积-某时间点的面积)/最初始划痕面积;2.通过划痕实验分别观察96孔板中含有叶酸浓度分别为500nmol/L、250nmol/L、100nmol/L、50nmol/L、20nmol/L、0nmol/L的培养基中细胞的侵袭迁移能力,每组3个孔,共18孔,同样使用Cytation5细胞成像微孔板检测系统分别采集每孔在0h、48h的图像,通过image J软件,计算每孔在48h内的伤口愈合百分比;3.使用含有不同浓度叶酸的培养基常规方法培养宫颈癌细胞株Siha,通过实时荧光定量PCR技术检测mi R-375的表达水平,根据各组Ct值计算每个样本的2-??Ct值;4.使用mi R-375 inhibitor、mi R-375 mimics、mi R-375NC转染宫颈癌细胞,48小时后,经免疫荧光技术,使用Cytation5细胞成像微孔板检测系统计数每孔采集到的图像,计算对照组、mi R-375 inhibitor组、mi R-375 mimics组、mi R-375阴性对照组图像中红色荧光表达强度均值(每组6个孔);5.使用含有不同浓度叶酸的培养基常规方法培养宫颈癌细胞株Siha,经免疫荧光技术,使用Cytation5细胞成像微孔板检测系统采集96孔板中含有叶酸浓度分别为0nmol/L、20nmol/L、50nmol/L、100nmol/L、250nmol/L、500nmol/L的培养基中的细胞图像,并计数其中每孔中红色荧光表达强度均值。结果:*** R-375 inhibitor组、mi R-375 mimics组与对照组伤口愈合百分比的均值分别为(40.6±5.6)%,(30.4±6.3)%,(36.5±3.4)%,结果有显著的统计学差异(P100nmol/L、50nmol/L、20nmol/L、0nmol/L的培养基中宫颈癌细胞株的伤口愈合百分比均值分别为(20.9±4.7)%,(30.72±3.58)%,(32.5±2.5)%,(34.4±5.4)%,(38.2±7.2)%,(45.2±5.2)%,结果有显著的统计学差异(P100nmol/L、50nmol/L、20nmol/L、0nmol/L的叶酸的培养基培养宫颈癌细胞株Siha,计算6组样本2-??Ct的均值分别为(1.0±0),(4.5±0.1),(8.6±0.4),(16.8±1.2),(18.6±2.0),(20.3±1.7),每两组间进行比较,均有统计学意义(P1),(29462±4578),(27641±2292),(28739±2374),每两组间进行比较,结果提示除对照组与mi R-375的阴性对照组之间无统计学差异,其余任何两组间比较均有显著统计学差异(P100nmol/L、250nmol/L、500nmol/L的培养基中的细胞图像中每孔中红色荧光表达强度均值(每组3个孔),分别为25884±1134,26773±2145,28968±968,29625±1280,32114±2007,35568±666,每两组间进行比较,均有显著统计学差异(P1.使用含有不同叶酸浓度的培养基培养宫颈癌细胞Siha,以及使用mi R-375inhibitor、mi R-375 mimics染宫颈癌细胞Siha后,通过划痕实验发现叶酸及mi R-375可以抑制宫颈癌细胞Siha的增殖、迁袭能力。2.在体外培养基中,叶酸可以促进宫颈癌细胞Siha中mi R-375的表

关键词：宫颈癌叶酸微RNAs 免疫荧光 dna甲基化酶1

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血清DNMT1与TET1表达水平在肺癌早期诊断中的临床价值

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临床与病理杂志 2023年第1期43卷 1-8页

作者：叶尔那尔·哈再斯汗刘旭骏司文喆北京大学第三医院检验科北京100191 北京大学第一医院检验科北京100034

目的:检测不同类型肺癌患者与健康人血清中dna甲基化酶1(dna methylase 1,DNMT1)和甲基胞嘧啶双加氧酶(ten-eleven translocation methylcytosine dioxygenase 1,TET1)的表达水平,探讨2种酶对肺癌早期诊断的临床意义。方法:选取170例初... 详细信息

目的:检测不同类型肺癌患者与健康人血清中dna甲基化酶1(dna methylase 1,DNMT1)和甲基胞嘧啶双加氧酶(ten-eleven translocation methylcytosine dioxygenase 1,TET1)的表达水平,探讨2种酶对肺癌早期诊断的临床意义。方法:选取170例初诊为肺癌的患者血清与90例体检中心健康成年人血清,采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunoadsordent assay,ELISA)检测血清中DNMT1与TET1的表达水平。使用SPSS 26.0与Medcalc软件进行统计分析,比较健康成年人与肺癌患者血清中DNMT1与TET1表达水平的差异;比较血清DNMT1和TET1表达水平在不同临床分期、不同类型肺癌、不同性别、不同年龄段、不同吸烟史、不同癌症家族史之间的差异。结果:肺癌患者血清中的DNMT1显著高于健康成年人,而TET1的表达水平低于健康成年人,差异均有统计学意义(均P酶在肺癌患者血清中的表达水平与肺癌患者的临床病理分期有关。此外,DNMT1与TET1表达水平与不同类型肺癌的分类有关。结论:DNMT1与TET1有作为肺癌早期诊断标志物的潜在价值。

关键词： dna甲基化酶1 甲基胞嘧啶双加氧酶肺癌血清肿瘤标志物

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