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dna提取方法对实时荧光定量PCR检测花生过敏原Ara h 2基因的比较研究

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中国粮油学报 2023年第7期38卷 221-227页

作者：李慧敏汪洋王楠希赵冬蕾黄凯崔华郭宝元王松雪管骁上海理工大学健康科学与工程学院上海200093 国家粮食和物资储备局科学研究院北京100032

食物过敏是一个世界性的公共卫生问题,其中花生过敏最为严重。基于dna的分子生物学检测方法目前已广泛应用于花生过敏原检测,样品dna的提取质量会显著影响检测的灵敏度及准确率。本研究比较了5种dna提取方法,包括十六烷基三甲基溴化铵(c... 详细信息

食物过敏是一个世界性的公共卫生问题,其中花生过敏最为严重。基于dna的分子生物学检测方法目前已广泛应用于花生过敏原检测,样品dna的提取质量会显著影响检测的灵敏度及准确率。本研究比较了5种dna提取方法,包括十六烷基三甲基溴化铵(cetyl trimethyl ammonium bromide,CTAB)法、柱式法及3种基于磁珠纯化技术的dna快速提取法,对生花生、煮花生、炸花生、烤花生、花生酥和花生酱6种不同加工方式的花生基质样品进行dna提取,考察了不同方法获得的dna浓度、纯度指标,并采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)对花生过敏原Ara h 2基因进行了检测分析。结果表明,月桂酰肌氨酸钠(Sodium Lauroyl Sarcosine)磁珠法的适用性广、提取率高,对于6种花生基质提取的dna均能高效检出花生过敏原Ara h 2基因;对于花生质量分数为0.05%~1.00%的小麦粉二元混合物,SLS磁珠法的dna提取率总体优于CTAB法,并且能有效提取出与花生共用1条生产线的燕麦片中污染的花生dna,证实SLS磁珠法提取的实际样品dna能够满足花生过敏原检测目的。本研究为花生及其制品dna提取方法提供了参考,特别是磁珠类方法,高效快速,提取质量能够保障后续基于dna的花生过敏原分子生物学方法检测结果的准确性。

关键词：花生过敏原 dna提取 Ara h 2基因磁珠实时荧光定量PCR

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dna提取自动化工作站在法医学领域的应用

中国法医学杂志 2010年第1期25卷 40-42页

作者：张琼予丁梅王保捷庞灏贺薇中国医科大学法医学院辽宁沈阳110001

自动化工作站是指运用生化技术对生物性检材进行批量处理分析的全自动化工作平台,它可在短时间内批量进行移液,加样,混合等操作,特别适合用于大量生物性检材的PCR模板的制备。本文仅对dna提取自动化工作站的基本模式、基本方法、法医学... 详细信息

自动化工作站是指运用生化技术对生物性检材进行批量处理分析的全自动化工作平台,它可在短时间内批量进行移液,加样,混合等操作,特别适合用于大量生物性检材的PCR模板的制备。本文仅对dna提取自动化工作站的基本模式、基本方法、法医学应用等进行综述,以期使该技术在法医dna分析中得到更广泛的应用。

关键词：法医物证学自动化工作站 dna提取法医学应用

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6种食用香辛料基因组dna提取方法比较

食品科学 2021年第16期42卷 246-253页

作者：周梦月邢冉冉王楠葛毅强陈颖中国检验检疫科学研究院北京100123 中国农业大学食品科学与营养工程学院北京100083 中国农村技术开发中心北京100045

采用TIANGEN植物基因组dna提取试剂盒法、TIANGEN dnasecure新型植物基因组dna提取试剂盒法、QIAGEN DNeasy plant kit法、Nucleospin®Food kit法、改良十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide,CTAB)法和十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)-CTAB法6种方法对来自植物根、茎、叶、花蕾、果实及种子的19种常见食用香辛料的dna进行提取,并比较各方法的提取效果。结果表明,QIAGEN DNeasy plant kit法和TIANGEN植物基因组dna提取试剂盒法所得dna的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增成功率最高,但QIAGEN DNeasy plant kit法提取的dna质量浓度低,不利于后续研究。本研究建议将TIANGEN植物基因组dna提取试剂盒法作为食用香辛料基因组dna提取的优选方法,并用该方法进行市售香辛料粉的dna提取。结果显示,所有市售香辛料粉的dna质量浓度、纯度及PCR扩增效率均符合实验要求。表明TIANGEN植物基因组dna提取试剂盒法适合食用香辛料dna提取,而对于皮类及坚硬的食用香辛料应增加样品量及裂解时间。

关键词：食用香辛料 dna提取试剂盒改良十六烷基三甲基溴化铵法十二烷基硫酸钠-十六烷基三甲基溴化铵法

磁性Fe3O4@SiO2微球的制备及尿液dna的提取应用

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工业微生物 2025年第01期 26-30页

作者：吴志能邓新林王鹏李向东赵荣淞深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司东莞东阳光科研发有限公司广州康立明生物科技股份有限公司

文章采用溶剂热法制得Fe3O4纳米颗粒，并使用二水合柠檬酸钠对其进行表面改性，同时利用Stober水解法在其表面生成SiO2包覆层，得到粒径均一的超顺磁性Fe3O4@SiO2颗粒，并将其应用于尿液dna提取。实验采用场发射扫描电镜（SEM）、红外... 详细信息

文章采用溶剂热法制得Fe3O4纳米颗粒，并使用二水合柠檬酸钠对其进行表面改性，同时利用Stober水解法在其表面生成SiO2包覆层，得到粒径均一的超顺磁性Fe3O4@SiO2颗粒，并将其应用于尿液dna提取。实验采用场发射扫描电镜（SEM）、红外光谱仪（FT-IR）、振动磁强计（VSM）和电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP-OES）对微球进行表征处理，并用超微量分光光度计测定核酸量和纯度。结果表明，Fe3O4@SiO2粒径均匀，表面包覆良好，且耐腐蚀性极好；提取尿液dna，测得A260/A280达1.87，其纯度可满足后续的PCR要求。与共沉淀法得到的磁珠相比，溶剂热法具有磁珠用量少、不易沉降、提取率高以及dna提取纯度高等优点。

关键词：磁性微球溶剂热硅包覆尿液 dna提取

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用于分子生态学研究的堆肥dna提取方法

环境科学 2006年第8期27卷 1613-1617页

作者：杨朝晖肖勇曾光明刘云国邓久华湖南大学环境科学与工程学院长沙410082

分子生态学为堆肥微生物的研究提供了新的技术手段,dna的提取是该技术的基础,但由于腐殖酸类物质的污染,增加了堆肥微生物总dna的提取难度.采用了3种不同的方法(溶菌酶法、超声波破碎法和蛋白酶K-CTAB法)从堆肥中提取微生物的总dna,使... 详细信息

分子生态学为堆肥微生物的研究提供了新的技术手段,dna的提取是该技术的基础,但由于腐殖酸类物质的污染,增加了堆肥微生物总dna的提取难度.采用了3种不同的方法(溶菌酶法、超声波破碎法和蛋白酶K-CTAB法)从堆肥中提取微生物的总dna,使用核酸和蛋白质分析仪检测后表明3种提取方法获得的dna产量均较高;琼脂糖凝胶电泳结果表明其长度约为23 kb;使用细菌16S rRNA基因通用引物(27F和1 495R)对总dna进行PCR扩增,都获得了几乎全长的16S rdna序列(约1.5 kb);利用限制性内切酶(HaeⅢ和AluⅠ)对纯化后的PCR产物进行RFLP分析,结果表明3种方法提取的dna反映了比较一致的微生物多样性.虽然3种方法各有优缺点,但其提取的dna都可以用于堆肥微生物的分子生态学研究,可以根据实际需要选用某一种方法用于提取堆肥总dna.

关键词：堆肥分子生态学 16S rRNA dna提取 RFLP

速冻面米制品中金黄色葡萄球菌dna提取方法的比较分析

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中国食品学报 2017年第11期17卷 223-230页

作者：张易宋明辉白亚龙陈雯瑶史贤明施春雷中美食品安全联合研究中心上海交通大学农业与生物学院上海200240

dna的提取效率是影响食品中致病菌PCR检测的关键因素。以速冻面米制品中最易污染的金黄色葡萄球菌为研究对象,比较4种dna提取方法(CTAB法、离心柱法、氨基化纳米磁珠法、羧基化纳米磁珠法)的效率和质量,对提取的dna采用荧光定量PCR方法... 详细信息

dna的提取效率是影响食品中致病菌PCR检测的关键因素。以速冻面米制品中最易污染的金黄色葡萄球菌为研究对象,比较4种dna提取方法(CTAB法、离心柱法、氨基化纳米磁珠法、羧基化纳米磁珠法)的效率和质量,对提取的dna采用荧光定量PCR方法评价。结果表明,在三大类速冻面米制品(肉馅类、素馅类和无馅类)人工污染金黄色葡萄球菌的样品中,羧基化纳米磁珠法和氨基化羧纳米磁珠法的提取效率显著优于CTAB法和离心柱法,可推荐为速冻面米制品中金黄色葡萄球菌污染快速定量检测的dna提取方法。

关键词：金黄色葡萄球菌荧光定量PCR 速冻面米制品 dna提取

表面电性可控磁珠微流控芯片在dna提取中的应用

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分析化学 2018年第9期46卷 1372-1378页

作者：黄华斌傅奇胡佳游其华庄峙厦杨朝勇王小如厦门华厦学院检验与科学技术系厦门大学化学化工学院

制备了表面电性可控的氨基化SiO;@Fe;O;磁性复合微球,采用激光刻蚀和热压键合的方法制作了聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）材质的dna固相萃取芯片,将磁珠灌注于芯片通道中,借助永磁铁固定并控制磁珠,将磁珠芯片应用于人类全血中的基因组dna提... 详细信息

制备了表面电性可控的氨基化SiO;@Fe;O;磁性复合微球,采用激光刻蚀和热压键合的方法制作了聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）材质的dna固相萃取芯片,将磁珠灌注于芯片通道中,借助永磁铁固定并控制磁珠,将磁珠芯片应用于人类全血中的基因组dna提取,优化了提取实验条件,并对提取产物进行凝胶电泳和PCR分析。实验结果表明,磁珠微流控芯片成功地从全血中提取出纯度较高的基因组dna,提取效率约35%,提取液的凝胶电泳条带与商品化试剂盒提取的基因组dna一致,提取液可用于进一步的PCR反应。

关键词：表面电性可控磁珠微流控芯片 dna提取

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dna提取对微生物多样性测序分析的影响

中国生物工程杂志 2017年第11期37卷 12-18页

作者：安云鹤程小艳田彦捷马凯高丽娟武会娟北京市理化分析测试中心北京100089 北京市基因测序与工程技术研究中心北京100094

运用高通量测序技术分析复杂样品中微生物种群的变化情况,已经成为目前微生物研究领域的热点问题之一。而微生物的样品准备,如dna提取和16S可变区的扩增等,对于测序完成后的数据分析以及微生物原始群落组成的影响是至关重要的。采用国... 详细信息

运用高通量测序技术分析复杂样品中微生物种群的变化情况,已经成为目前微生物研究领域的热点问题之一。而微生物的样品准备,如dna提取和16S可变区的扩增等,对于测序完成后的数据分析以及微生物原始群落组成的影响是至关重要的。采用国产试剂盒(天根土壤微生物基因组提取试剂盒)和进口试剂盒(MOBIO土壤微生物基因组提取试剂盒)分别对土壤样品和羊瘤胃食糜样品进行dna提取。然后选取总dna起始量为25ng,对16S V3可变区进行PCR扩增和文库构建,最后通过数据分析比较不同试剂盒提取的dna对微生物多样性变化的影响,包括OTU数目、稀释曲线、微生物数量及物种种类等。研究发现,在相同dna模板量和PCR条件下,进口试剂盒提取的dna能够获得更多的微生物种类。

关键词： dna提取高通量测序微生物多样性分析

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浆果基因组dna提取方法比较及PCR优化

中国食品学报 2018年第6期18卷 60-67页

作者：李梅阁吴亚君杨艳歌邓婷婷王斌陈颖中国检验检疫科学研究院北京100176 南京农业大学食品科技学院南京210095

为获取高质量的浆果基因组dna,以8种浆果果实为样品,采用Macherey-Nagel Nucleo SpinR食品基因组提取试剂盒、Qiagen DNeasyR植物基因组提取试剂盒、TIANGEN植物基因组提取试剂盒、Promega WizardR食品基因组提取试剂盒、Biotecon Foodp... 详细信息

为获取高质量的浆果基因组dna,以8种浆果果实为样品,采用Macherey-Nagel Nucleo SpinR食品基因组提取试剂盒、Qiagen DNeasyR植物基因组提取试剂盒、TIANGEN植物基因组提取试剂盒、Promega WizardR食品基因组提取试剂盒、Biotecon FoodproofR转基因样品纯化试剂盒及Magen Hi Pure食品基因组提取试剂盒6种试剂盒进行dna提取效果的比较分析。结果显示,Macherey-Nagel Nucleo SpinR食品基因组提取试剂盒、TIANGEN植物基因组提取试剂盒和Magen Hi Pure食品基因组提取试剂盒所得dna质量较差,dna严重降解和污染;Qiagen DNeasyR植物基因组提取试剂盒法、Promega WizardR食品基因组提取试剂盒法和Biotecon FoodproofR转基因样品纯化试剂盒均能得到质量较好的dna,而Promega WizardR食品基因组提取试剂盒法和Biotecon FoodproofR转基因样品纯化试剂盒的dna完整性低,扩增效率低于Qiagen DNeasyR植物基因组提取试剂盒提取的dna。最终,以Qiagen DNeasyR植物基因组提取试剂盒作为浆果分子检测中模板dna提取的通用性方法。

关键词：浆果果实 dna提取试剂盒 PCR酶