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沉默LncRNA-NFATC3增强宫颈癌HeLa细胞放疗敏感性的研究

沉默LncRNA-NFATC3增强宫颈癌HeLa细胞放疗敏感性的研究

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作者：蒋笑莹南昌大学

学位级别：硕士

背景:宫颈癌是常见的女性恶性肿瘤,对女性健康构成严重威胁。尽管放疗作为宫颈癌的主要治疗方法之一,已经取得了显著的临床治疗效果,但放疗耐受仍然是部分患者治疗失败的主要原因之一。dna损伤修复是导致宫颈癌放疗敏感性降低的主要原... 详细信息

背景:宫颈癌是常见的女性恶性肿瘤,对女性健康构成严重威胁。尽管放疗作为宫颈癌的主要治疗方法之一,已经取得了显著的临床治疗效果,但放疗耐受仍然是部分患者治疗失败的主要原因之一。dna损伤修复是导致宫颈癌放疗敏感性降低的主要原因之一。因此,深入研究宫颈癌的放疗敏感机制对于宫颈癌的防治具有重要的临床意义和实践价值。长链非编码RNA(Long non-coding RNAs,LncRNAs)是一类长度超过200个核苷酸的非蛋白编码RNA,在调节癌症的生物学行为中扮演着重要角色。最近的研究表明,部分LncRNA在调节宫颈癌症放射治疗敏感性方面起着关键作用,但具体的分子机制尚不清楚。本课题组的前期测序数据发现,在宫颈癌放疗耐受组织中,LncRNA-NFATC3的表达显著增高,同时与dna损伤修复相关的m RNA的表达也上调,提示LncRNA-NFATC3参与了宫颈癌放疗耐受。因此,本研究将进一步探索LncRNA-NFATC3在宫颈癌肿瘤生物学行为中的作用,以及其在放疗敏感性调控中的具体机制。这些研究结果将有助于深入了解LncRNA在宫颈癌放疗中的作用机制,为宫颈癌的治疗提供新的思路和策略。目的:明确LncRNA-NFATC3对放射线处理的宫颈癌细胞生物学特性和放射敏感性的影响,探讨LncRNA-NFATC3通过影响dna损伤修复途径调控宫颈癌放疗敏感性的机制。方法:1.对5例宫颈癌放疗耐受患者放疗前后组织中的LncRNA和m RNA进行转录组测序分析,对这些表达差异的m RNA进行GO富集分析,以明确m RNA在肿瘤相关信号通路中的分布情况,并采用q RT-PCR对RNA-seq结果进行验证,以检测测序结果的可靠性。2.设计并合成靶向LncRAN-NFATC3的小干扰RNA并转染宫颈癌He La细胞,建立敲减LncRAN-NFATC3的细胞模型。3.应用CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell实验、流式细胞术以及Western blot实验分别检测敲减LncRAN-NFATC3基因的表达对放疗前后的宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。4.应用细胞免疫荧光技术测定放疗前后的宫颈癌细胞dna损伤标志物53BP1的损伤焦点情况。结果:1.转录组测序结果表明,宫颈癌放疗耐受组织中LncRNA-NFATC3表达上调,这一结果在q RT-PCR检测中得到验证;GO富集分析结果表明,这些上调或下调m RNA与dna复制、细胞周期、dna损伤通路密切联系,测序上调的m RNA在q RT-PCR中也得到验证;2.沉默LncRNA-NFATC3抑制了放疗后He La细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡;3.沉默LncRNA-NFATC3增加了放疗后He La细胞的53BP1损伤点。结论:1.沉默LncRNA-NFATC3抑制了放疗处理下宫颈癌细胞的增殖、侵袭转移,并促进了细胞的凋亡和dna损伤,进而增强了宫颈癌的放疗敏感性。2.dna损伤相关蛋白可能参与调控宫颈癌放疗敏感性,但其具体调控机制以及是否与LncRNA-NFATC3具有相关性仍需验证。这些结果为提高宫颈癌放疗疗效提供了一个潜在的治疗靶点。

关键词：长链非编码RNA 宫颈癌放疗敏感性增殖侵袭、迁移凋亡 DNA损伤、DNA双链断裂

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