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情报理论与实践 2019年第11期42卷 83-86,114页

作者：汤珊红游宏梁高强程佳军杜婉莹军事科学院军事科学信息研究中心北京100142 北京大学信息管理系北京100871

为提高军队各部门数据资产管理意识,借鉴国内外成熟度相关理论思想,在重点介绍卡内基·梅隆大学提出的数据管理成熟度模型和分析军事数据管理存在问题基础上,根据军事数据管理现状和特点提出军事数据管理成熟度模型架构,分析军事数据管... 详细信息

为提高军队各部门数据资产管理意识,借鉴国内外成熟度相关理论思想,在重点介绍卡内基·梅隆大学提出的数据管理成熟度模型和分析军事数据管理存在问题基础上,根据军事数据管理现状和特点提出军事数据管理成熟度模型架构,分析军事数据管理成熟度模型应测度6个能力层面和25个能力项,最后对实施军事数据管理成熟度模型的意义进行简要概括,旨在帮助军事数据战略制定者从管理层面评估军事数据成熟度水平,促进军事数据管理和应用。

关键词：军事数据数据管理成熟度模型 dmm模型

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靶向抑制TXNRD1激活Nrf2信号通路保护骨关节炎软骨细胞外基质的研究

靶向抑制TXNRD1激活Nrf2信号通路保护骨关节炎软骨细胞外基质的研...

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作者：梁建辉南昌大学

学位级别：硕士

研究背景及目的骨关节炎(OA)是一种常见的慢性和年龄相关的退行性关节疾病。2020年OA已经成为全世界致残率最高的疾病之一,给无数家庭及社会造成巨大的负担。该病发病率高,主要好发于中老年人群,65岁以上人群患病率在50%以上。骨性关节... 详细信息

研究背景及目的骨关节炎(OA)是一种常见的慢性和年龄相关的退行性关节疾病。2020年OA已经成为全世界致残率最高的疾病之一,给无数家庭及社会造成巨大的负担。该病发病率高,主要好发于中老年人群,65岁以上人群患病率在50%以上。骨性关节炎的临床症状主要包括慢性关节疼痛和活动受限,主要是由滑膜炎、关节软骨退变、骨赘形成和软骨下骨硬化所致。尽管已经确定了一些OA的危险因素,如衰老、肥胖和代谢紊乱,但目前还没有有效的干预措施来预防骨性关节炎的进展。当前对于OA的治疗,早期主要通过关节腔内注射润滑剂或使用非甾体抗炎药及类固醇等药物缓解症状,减轻关节疼痛和抑制炎症反应,然而以上方法并不能从根本上逆转软骨退变和炎症进程,只能暂时缓解患者部分疼痛和疾病进展,而到了骨关节炎终末期,关节置换成了唯一的方法。尽管目前的药物和再生疗法有很大的前景,但仍然存在局限性。因此寻找更为安全、有效、可靠的的OA治疗措施成为目前热点和焦点。TXNRD1主要存在于组织的细胞质中,是目前研究和了解最多的同工酶。它是一种硒蛋白,依赖于NADPH从而促进硫氧还蛋白1(Trx1)的减少,它涉及细胞增殖、DNA复制、应激诱导的过早衰老和抗氧化应激。在我们的前期研究中发现TXNRD1在IL-1β刺激的小鼠初级软骨细胞和OA患者的软骨中显著上调,证明TXNRD1在关节软骨稳态和OA进展中具有重要作用。然而,在抑制TXNRD1后软骨细胞中相关基因的表达情况以及分子机制尚无研究报道。我们通过检索文献发现,抑制TXNRD1被证明可以激活Nrf2信号通路,并且过去几年的一些研究表明,一个活跃的Trx系统,特别是TXNRD1,对于抑制Nrf2的激活是很重要的。因此我们推测:抑制TXNRD1主要通过促进Nrf2的激活,从而缓解关节软骨细胞外基质的降解进而抑制OA的发展。鉴于TXNRD1在OA中具有非常关键的生物学功能,极有必要阐明TXNRD1在OA发生发展中的作用及其分子机制。研究方法(1)收集正常截肢患者软骨和OA患者软骨并利用免疫组化、Western blot和q PCR检测正常截肢患者软骨和OA患者软骨中TXNRD1的表达水平。然后利用IL-1β作用于小鼠软骨细胞来构建体外细胞OA模型,q PCR和Western blot技术用于检测TXNRD1及其细胞外基质相关基因和蛋白表达水平的变化。(2)分别利用TXNRD1的特异性抑制剂Auranofin和si RNA-TXNRD1来抑制TXNRD1,接着明确抑制TXNRD1后对细胞外基质相关蛋白和Nrf2以及HO-1表达的影响。(3)在小鼠软骨细胞中转染si-Nrf2并加入Auranofin,接着检测软骨细胞表型及其细胞外基质相关蛋白的表达水平变化,从而进一步明确其具体机制。(4)在小鼠软骨细胞中转染si-TXNRD1并加入ML385(Nrf2抑制剂),接着检测软骨细胞表型及其细胞外基质相关蛋白的表达水平变化,从而进一步明确其具体机制。(5)在dmm小鼠模型中注射Auranofin,利用番红固绿、HE染色以及免疫组化来检测小鼠软骨表面损伤程度及蛋白表达水平。研究结果与结论(1)TXNRD1的mRNA和蛋白水平在OA患者关节软骨明显上调,体外细胞学实验证明,在IL-1β作用下,TXNRD1的m RNA和蛋白表达水平上调,且蛋白表达水平呈时间梯度上升。(2)Auranofin在安全浓度范围内可以促进Nrf2和HO-1表达和软骨细胞外基质合成并且抑制细胞外基质的降解。沉默TXNRD1可以上调COL2A1,SOX9的表达水平同时下调MMP13,ADAMTS5的表达水平,从而维持软骨细胞外基质的稳态。(3)沉默Nrf2能抑制Auranofin对软骨细胞外基质的保护作用;同样,抑制Nrf2能抵消沉默TXNRD1对软骨细胞外基质的保护作用,提示抑制TXNRD1有可能是通过激活Nrf2信号通路来发挥对软骨细胞外基质的保护作用。(4)在体内注射Auranofin后能有效缓解小鼠关节软骨的破坏程度和降低Nrf2的表达,进一步证明抑制TXNRD1在OA中的作用以及在体内的机制。

关键词： TXNRD1(硫氧还蛋白还原酶1) Nrf2(核相关因子2) 骨关节炎软骨细胞 IL-1β 细胞外基质 dmm模型

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成纤维细胞生长因子18（FGF18）腺病毒包装及其在小鼠骨关节炎治疗中的作用

成纤维细胞生长因子18（FGF18）腺病毒包装及其在小鼠骨关节炎治...

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作者：李嘉怡南华大学

学位级别：硕士

目的:探究成纤维生长因子18(Fibroblast growth factor18,FGF18)对软骨细胞分化的影响,以及其对内侧半月板不稳定模型(Destabilization of the medial meniscus,dmm)小鼠骨关节炎的治疗效果,为利用FGF18治疗骨关节炎提供实验依据。方法... 详细信息

目的:探究成纤维生长因子18(Fibroblast growth factor18,FGF18)对软骨细胞分化的影响,以及其对内侧半月板不稳定模型(Destabilization of the medial meniscus,dmm)小鼠骨关节炎的治疗效果,为利用FGF18治疗骨关节炎提供实验依据。方法:利用PCR的方法获取FGF18全长基因片段,再用AgeⅠ和NheⅠ酶切目的基因和pYr-1.1载体,连接后得到pYr-FGF18质粒。通过LR体外同源重组,将pYr-FGF18的表达框转移到pAd/PL-DEST腺病毒表达载体上,得到pAd/PL-FGF18质粒。用PacⅠ酶切pAd/PLFGF18,将线性化的质粒转染至HEK293A细胞中包装得到Ad-FGF18重组腺病毒载体,并进行扩增、纯化。Ad-GFP腺病毒也用同样的方法得到。用Ad-FGF18腺病毒感染HEK293A细胞并鉴定感染后的细胞中FGF18基因是否过表达。用Ad-FGF18腺病毒感染软骨细胞,观察其对软骨细胞分化的影响。对小鼠施行dmm手术,术后第2周开始关节腔内注射Ad-FGF18腺病毒,持续6周,术后第8周处死。取小鼠腿部进行石蜡包埋,切片后进行SO染色,观察关节软骨的受损情况。通过免疫荧光法和免疫组化法染色观察小鼠关节腔内注射Ad-FGF18腺病毒后FGF18在关节软骨处的过表达情况。利用免疫组化法染色观察关节腔内注射Ad-FGF18腺病毒的小鼠关节软骨处骨关节炎分化标志物的表达情况。结果:经PCR扩增成功获得大小为624bp的FGF18目的基因片段。将FGF18目的基因与pYr-1.1载体连接得到pYr-FGF18腺病毒穿梭质粒,测序结果与FGF18在基因库中的序列一致。pYr-FGF18和pAd/PLDEST体外同源重组得到pAd/PL-FGF18,将线性化后的质粒转染至HEK293A细胞中包装腺病毒,几天后细胞出现CPE现象。收集病毒并使其感染HEK293A细胞后,HEK293A细胞在mRNA水平和蛋白质水平上均能过表达FGF18。Ad-FGF18感染软骨细胞后,软骨细胞中的FGF18表达量增高,同时软骨分化标志物II型胶原蛋白(Col2)、聚蛋白多糖(Aggrecan)和Sox9的表达量也增高。dmm小鼠关节腔内注射Ad-FGF18腺病毒后,关节软骨处FGF18表达增高,与注射Ad-GFP腺病毒的小鼠相比,高表达FGF18的小鼠关节软骨处的损伤比较轻微。免疫组化结果显示,注射Ad-FGF18的小鼠关节处Col2和Aggrecan的表达增加,Adamts的表达明显降低,基质金属蛋白酶3(Matrix metalloproteinase 3,MMP3)和基质金属蛋白酶13(Matrix metalloproteinase 3,MMP13)的表达稍有降低。结论:1.成功构建重组Ad-FGF18腺病毒载体,并能在HEK293A细胞中表达。***-FGF18腺病毒能够促进软骨细胞的分化。***小鼠关节腔内注射Ad-FGF18腺病毒能够对关节炎起到一定的治疗作用。

关键词：成纤维生长因子18 重组腺病毒载体 dmm模型骨关节炎

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基于NF-κB信号通路探究天竺葵素对骨关节炎的作用及机制

基于NF-κB信号通路探究天竺葵素对骨关节炎的作用及机制

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作者：曾智南昌大学

学位级别：硕士

第一部分:天竺葵素在体外对小鼠软骨细胞炎症和表型的影响及其机制的研究目的:骨关节炎是中老年人常见的疾病,主要临床表现为关节畸形、疼痛和功能障碍,其发病与软骨细胞外基质的破坏和炎症反应息息相关。炎症和炎症反应是引发和加剧骨... 详细信息

第一部分:天竺葵素在体外对小鼠软骨细胞炎症和表型的影响及其机制的研究目的:骨关节炎是中老年人常见的疾病,主要临床表现为关节畸形、疼痛和功能障碍,其发病与软骨细胞外基质的破坏和炎症反应息息相关。炎症和炎症反应是引发和加剧骨关节炎发生发展的关键因素,在这些炎症因子中,白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）被认为在骨关节炎的病理发展中起到关键作用。核转录因子κB（NF-κB）是一种二聚体转录因子,起到协调多种生理和病理过程的作用,特别是炎症的发生与发展。天竺葵素（Pelargonidin,PG）属于花青素的一种,是一种天然存在于植物中的化合物,它已被证实在某些疾病中具有抗氧化和抗炎作用。但是,天竺葵素对骨关节炎的作用还未被证明,其具体的作用机制还有待深入研究。本部分旨在探讨天竺葵素对于IL-1β诱导的小鼠软骨细胞炎症反应的作用及其机制。方法:1.C57BL/6J原代软骨细胞的分离、培养及冻存。2.利用细胞计数试剂盒-8（cell counting Kit-8,CCK-8）法检测PG和IL-1β（10ng/ml）对小鼠软骨细胞活性影响。3.利用逆转录-聚合酶链式反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）检测浓度梯度的PG作用于由IL-1β（10ng/ml）刺激的小鼠软骨细胞后一氧化氮合酶（Inducible nitric oxide synthase,i NOS）、环氧化酶-2（Cyclooxygenase-2,COX-2）、白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）和肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosisi factor-α,TNF-α）基因水平的表达。4.利用软骨细胞高密度培养和甲苯胺蓝染色观察小鼠软骨细胞经IL-1β（10ng/ml）刺激后加入浓度梯度的PG,软骨细胞外基质的形态及染色后的情况。5.利用免疫荧光实验观察浓度梯度的PG作用于由IL-1β（10ng/ml）刺激的小鼠软骨细胞后Ⅱ型胶原蛋白（CollagenⅡ,COLⅡ）的荧光强度。6.利用免疫印迹试验（Western-blotting,WB）测定浓度梯度的PG作用于由IL-1β（10ng/ml）刺激的小鼠软骨细胞后基质金属蛋白酶13（Matrix metalloproteinase13,MMP13）、蛋白聚糖酶5（A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 5,ADAMTS5）、COLⅡ、i NOS和COX-2在蛋白水平的表达。7.利用免疫印迹试验和免疫荧光实验观察浓度梯度的PG作用于由IL-1β（10ng/ml）刺激的小鼠软骨细胞后p65的核转位情况。结果:1.在0-40μM的浓度范围内天竺葵素对小鼠软骨细胞的活性没有影响,当浓度升高到80μM及更高时,出现了明显的毒性作用。2.在基因层面上单独加入IL-1β（10ng/ml）会促进软骨细胞内炎症介质如IL-6、TNF-α、COX-2、i NOS的表达,而加入PG后IL-6、TNF-α、COX-2、i NOS的表达明显下降,且抑制作用随PG浓度的增加而增强。***-1β（10ng/ml）单独作用于软骨细胞时,甲苯胺蓝染色结果十分浅,随着PG的加入,软骨细胞染色变深,且加深的程度与PG的浓度正相关。4.单独用IL-1β（10ng/ml）处理的软骨细胞COLⅡ荧光强度很弱,而用天竺葵素和IL-1β共同处理的实验组COLⅡ荧光强度逐渐增强,并与PG的浓度有关。***在蛋白水平下调由IL-1β（10ng/ml）刺激引起的MMP13、ADAMTS5、i NOS和COX-2的升高,并且抑制IL-1β（10ng/ml）造成的COLⅡ的分解,呈浓度依赖性。6.在IL-1β（10ng/ml）的刺激下,绝大部分p65发生核转位,但是在用PG与IL-1β共同刺激后,p65核转位情况显著减少。结论:PG可以通过抑制NF-κB通路的激活减弱小鼠软骨细胞经IL-1β（10ng/ml）刺激后产生的炎性反应并对软骨细胞表型有维持作用。第二部分:天竺葵素在体内对小鼠骨关节炎模型作用的研究目的:骨关节炎是一种以软骨破坏,软骨下骨增厚,骨赘形成及不同程度的滑膜炎并关节囊增厚为特点的关节疾病,在这部分我们拟采用小鼠内侧半月板-胫骨韧带切除术（Destabilization of the medial meniscus,dmm）构建实验性关节炎模型,在体内水平探究PG对骨关节炎小鼠模型关节退变的保护作用及其机制。方法:1.通过小鼠内侧半月板-胫骨韧带切除术（dmm术）构建实验性骨关节炎模型,口服给药方式给与小鼠PG,8周后处死取膝关节标本制成石蜡切片。2.将石

关键词：天竺葵素骨关节炎软骨细胞炎症 IL-1β 细胞外基质 NF-κB dmm模型番红固绿染色苏木素伊红染色免疫组化

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