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Elevated dll3 in stomach cancer by tumor-associated macrophages enhances cancer-cell proliferation and cytokine secretion of macrophages

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Gastroenterology Report 2022年第1期10卷 322-334页

作者： Jian-Bin Ye Jun-Jie Wen Dan-Lin Wu Bing-Xin Hu Mei-Qun Luo Yan-Qing Lin Yun-Shan Ning Yan Li School of Laboratory Medicine and Biotechnology Southern Medical UniversityGuangzhouGuangdongP.R.China Service Union Medicine Southern Medical UniversityZhuhaiGuangdongP.R.China

Background The notch signal pathway is important in the development of both tumor-associated macrophages(TAMs)and stomach cancer,but how Notch signaling affects TAMs in stomach cancer is barely *** The expressions of Notch1,Notch2,Notch3,Notch4,hes family bHLH transcription factor 1(Hes1),and delta-like canonical Notch ligand 3(dll3)were detected by Western blot and the expressions of interleukin(IL)-10,IL-12,and IL1-b were detected using enzyme-linked immunosorbent assay after the co-culture of macrophages and stomach-cancer *** proliferation and migration of cancer cells were detected using 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay and scratch assay,respectively,and the cell cycle was detected using Annexin V/propidium iodide *** protein interactions with dll3 were detected using co-immunoprecipitation and mass *** The co-culture of macrophages and stomach-cancer cells MKN45 and BGC823 could enhance cell proliferation accompanied by the activation of Notch1/Notch2 signaling and upregulation of *** signaling gamma-secretase inhibitor(DAPT)blocked this *** overexpression of dll3 in stomach-cancer cells could promote the proliferation of cancer cells,enhance the activation of Notch1/Notch2 signaling,induce the expression of IL-33,lead to the degradation of galectin-3–binding protein(LG3BP)and heat shock cognate 71 kDa protein(HSPA8),and result in elevated IL-1b,IL-12,and IL-10 secretion by *** expression of dll3 or IL-33 could lead to a lower survival rate based on University of California,Santa Cruz Xena Functional Genomics Explorer and The Cancer Genome Atlas data *** This is evidence that dll3 regulates macrophages in stomach cancer,suggesting that dll3 may be a novel and potential target for stomach-cancer therapy.

关键词： stomach cancer dll3 macrophages Notch signaling,proliferation cytokines

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dll3 in stomach cancer enhances cancer cell proliferation and regulates the immunity of tumor associated macrophages

DLL3 in stomach cancer enhances cancer cell proliferation an...

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第十三届全国免疫学学术大会

作者： Jianbin Ye Danlin Wu Junjie Wen Bingxin Hu Meiqun Luo Yan Li Yunshan Ning Southern Medical University

Background: Stomach cancer is the fifth common cancer and the third leading cause of cancer death worldwide and the second incidence and mortality of cancer in China. Tumor-associated macrophages(TAMs), as part of the adaptive immune response, constitute a major portion of the leukocyte infiltrate in cancer. Studies have demonstrated the connection between stomach cancer and macrophages. Notch signal pathway is important in the development of both tumor associated macrophages(TAMs) and stomach cancer, but how Notch in stomach cancer affects TAMs is barely understood. Methods: THP-1 was induced into macrophages by PMA and co-cultured with stomach cancer cell line MKN45. Notch signaling proteins were detected by western blot,and IL-1β, IL-12 and IL-10 were detected by ELISA in the supernatant from co-culture. The transcriptome sequencing was performed to detect the genes regulated by dll3 overexpression in ***: We found that co-culture of macrophages and stomach cancer cell MKN45 could enhance MKN45 cell proliferation accompanied with activation of Notch1/Notch2 signaling and up-regulation of Notch ligand dll3. Elevated dll3 in MKN45 could promote cell proliferation, enhance activation of Notch1/Notch2 signaling, induce IL-33 expression, and lead to galectin-3-binding protein and heat shock cognate 71 kDa protein degradation in MKN45, which resulted in elevated IL-1β, IL-12 and IL-10 secretion by macrophages. Conclusions: This is the first report unveiling how Notch signal pathway especially dll3 in stomach cancer regulates macrophages. And this will offer new possible targets for stomach cancer therapy.

关键词： Notch stomach cancer macrophages dll3 IL-33

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dll3表达与晚期小细胞肺癌含铂化疗疗效及预后的相关性

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肿瘤防治研究 2020年第11期47卷 846-850页

作者：韩淑华黄见玲曹丹丹苑仁祥刘丹丹齐保龙东南大学附属中大医院呼吸内科南京210000 安徽省第二人民医院呼吸内科合肥230000

目的探讨Delta-like protein 3(dll3)与晚期小细胞肺癌(SCLC)顺铂/依托泊苷(EP)方案化疗敏感度及预后的关系。方法选取64例明确诊断为Ⅲ/Ⅳ期的SCLC患者,采用免疫组织化学法检测dll3在SCLC石蜡包埋组织中的表达情况;χ~2检验分析dll3表... 详细信息

目的探讨Delta-like protein 3(dll3)与晚期小细胞肺癌(SCLC)顺铂/依托泊苷(EP)方案化疗敏感度及预后的关系。方法选取64例明确诊断为Ⅲ/Ⅳ期的SCLC患者,采用免疫组织化学法检测dll3在SCLC石蜡包埋组织中的表达情况;χ~2检验分析dll3表达与化疗疗效的关系,Kaplan-Meier和Cox多因素分析dll3表达及其他因素对晚期SCLC患者无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)的影响。结果在84.1%(54/64)的SCLC组织中可检测到dll3表达,其表达与患者性别、年龄、吸烟史、分期无相关性(P>0.05)。dll3高表达组的EP方案化疗有效率及疾病控制率均低于dll3低表达组(Pdll3低表达组的无进展生存期长于dll3高表达组,差异有统计学意义(Pdll3表达、肿瘤分期、肿瘤直径是晚期SCLC患者PFS的独立预后因素,肿瘤分期是OS的独立预后因素。结论dll3表达与晚期SCLC EP方案化疗反应率及PFS相关,可能成为预测化疗敏感度的生物标志物。dll3表达对于晚期SCLC患者的远期预后无预测价值。

关键词：小细胞肺癌 dll3 化疗敏感度预后

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dll3的上调加快G1/S期转换和激活Notch信号进而促进胃癌细胞增殖

DLL3的上调加快G1/S期转换和激活Notch信号进而促进胃癌细胞增殖

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作者：叶健斌南方医科大学

学位级别：硕士

Notch信号通路中的dll3配体在不同的癌症中发挥着不同的功能,但是dll3在胃癌中的作用和机制几乎未被提及。为了探究dll3在胃癌中的作用,我们完成了以下实验。1.通过TCGA和UCSC数据库分析dll3基因在胃癌病人中的表达及对病人生存时间的影... 详细信息

Notch信号通路中的dll3配体在不同的癌症中发挥着不同的功能,但是dll3在胃癌中的作用和机制几乎未被提及。为了探究dll3在胃癌中的作用,我们完成了以下实验。1.通过TCGA和UCSC数据库分析dll3基因在胃癌病人中的表达及对病人生存时间的影响,结果显示dll3高表达的病人生存时间要低于dll3低表达的病人。通过免疫组织化学染色分析35例人胃癌组织样本及相应癌旁组织中dll3表达情况,结果显示胃癌组织中dll3的表达要高于癌旁组织。以上结果提示dll3可能对胃癌的发展有促进作用。2.对人胃癌细胞MKN45和BGC823进行过表达dll3或抑制dll3表达后,通过MTT实验检测细胞增殖,结果显示dll3的上调可以促进细胞的增殖,下调dll3则抑制其增殖。使用siRNA抑制MKN45和BGC823的dll3表达后,通过碘化丙啶染色实验检测细胞周期的变化,结果显示dll3的下调降低S期细胞的比例。dll3在MKN45和BGC823过表达后,通过划痕实验检测迁移能力的变化,结果显示dll3的上调可以促进胃癌细胞的迁移能力;通过MTT实验检测抗癌药物番荔枝内酯和奥沙利铂的效果,结果显示dll3过表达后胃癌细胞对番荔枝内酯和奥沙利铂更为敏感。以上结果提示dll3的上调促进了胃癌细胞的增殖。***数据库分析人胃癌细胞周期相关基因的表达情况,结果显示G1/S期转换相关的基因突变与胃癌有着一定关系。在AGS、MKN45和BGC823中过表达dll3或在MKN45和BGC823中抑制dll3表达后,通过蛋白印迹检测Notch受体蛋白N1ICD和N2ICD、细胞周期G1/S检查点相关蛋白RB、CyclinD1、CyclinE1、CDK2、CDK4、CDK6 和 p16 的表达,结果显示 dll3过表达上调 N1ICD、N2ICD、RB、CyclinD1、CyclinE1、CDK2、CDK4、CDK6和下调p16。以上结果提示dll3的上调促进G1/S检查点相关蛋白的表达和Notch信号的激活。4.通过免疫共沉淀检测dll3在MKN45和BGC823中与N1ICD和N2ICD的结合情况,结果显示未能检测到dll3与N1ICD或N2ICD结合。通过核质分离蛋白提取试剂和细胞免疫荧光染色检测dll3在MKN45和BGC823细胞内的表达情况,结果显示部分dll3进入细胞核并聚集在核仁,同时dll3过表达后核内dll3含量升高。通过免疫共沉淀-质谱检测MKN45细胞内与dll3相互作用的蛋白,结果显示58个与dll3相互作用的蛋白中有26个具有促癌作用,2个具有抑癌的效果;24个在核内表达,其中XPO1、DDX5、RPS3、NPM1和EEF1A1表达在核仁。此外,这58个蛋白主要参与细胞周期、细胞生长、细胞凋亡、转录调控、蛋白合成、脂代谢、离子转运以及固有免疫等细胞活动。以上结果提示dll3影响了胃癌细胞增殖并且还可能通过其他方式影响胃癌的发生发展。综上所述,本研究首次证实了 dll3的上调加快G1/S期转换和激活Notch信号进而促进胃癌细胞增殖。

关键词：胃癌 dll3 促癌增殖细胞周期细胞核核仁

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dll3降低晚期小细胞肺癌化疗敏感性及促进肿瘤细胞的增殖与侵袭

DLL3降低晚期小细胞肺癌化疗敏感性及促进肿瘤细胞的增殖与侵袭

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作者：黄见玲东南大学

学位级别：硕士

第一部分dll3在小细胞肺癌肿瘤组织中的表达及其意义目的:检测dll3蛋白在小细胞肺癌(Small Cell Lung Cancer,SCLC)肿瘤组织中的表达情况,探讨dll3的表达与SCLC患者临床病理参数、化疗敏感性及预后之间的关系。方法:1.按照入组标准筛选... 详细信息

第一部分dll3在小细胞肺癌肿瘤组织中的表达及其意义目的:检测dll3蛋白在小细胞肺癌(Small Cell Lung Cancer,SCLC)肿瘤组织中的表达情况,探讨dll3的表达与SCLC患者临床病理参数、化疗敏感性及预后之间的关系。方法:1.按照入组标准筛选入组SCLC患者,收集其临床信息;2.采用免疫组化方法检测SCLC患者组织标本中dll3的表达情况,将患者分为高表达组和低表达组;3.统计分析dll3表达与临床病理特征及含铂方案化疗敏感性的关系;KaplanMeier分析dll3表达与晚期SCLC患者无进展生存期(Progression-Free Survival,PFS)和总生存期(Overall Survival,OS)之间的关系。结果:1.72例患者纳入此项临床研究。dll3在SCLC肿瘤组织中的阳性表达率为79.17%(57/72),主要定位于细胞膜。dll3表达量与患者年龄、性别、吸烟史、TNM分期、肿瘤直径均无统计学相关性(P>0.05);***3低表达组化疗有效率(RR)高于高表达组,两组之间的差异具有统计学意义(p=0.041)。疾病控制率(DCR)在两组之间无明显统计学差异(56.5%VS77.6%,p=0.095)。dll3低表达组中位PFS为6.8个月,dll3高表达组中位PFS为4.9个月,两组差异具有统计学意义(P3在晚期SCLC组织中高表达,在正常肺组织中无表达。dll3主要定位于细胞膜。dll3表达水平与性别、年龄、吸烟史、TNM分期、肿瘤直径无相关性。***3表达与晚期SCLC患者化疗反应率和PFS呈负相关,dll3可能是预测晚期SCLC患者化疗敏感性的生物学标志物。第二部分dll3对小细胞肺癌H69和H20细胞株增殖侵袭的影响目的:探究dll3在SCLC细胞增殖、侵袭中的作用。方法:1.q RT-PCR法检测dll3 m RNA在5种SCLC细胞株(H2227,H446,H524,H69和H20)及正常肺上皮细胞(HBE)中的相对表达情况;2.转染sh-RNA使dll3基因沉默或表达下调;***8、Edu增殖实验检测SCLC细胞株H69和H20在沉默dll3基因后的增殖情况;***小室检测SCLC细胞株H69和H20在沉默dll3基因后的侵袭和转移能力的变化。*** blot、免疫荧光检测SCLC H69和H20细胞株沉默dll3基因后NCadherin和E-Cadherin的表达情况。结果:1.q PCR结果显示dll3m RNA在5种SCLC细胞株中的表达均高于支气管上皮细胞,其中在H69和H20细胞株中dll3m RNA表达水平最高;***细胞株H69和H20转染sh-dll3#1,sh-dll3#2,sh-dll3#3后,相对于对照组sh-dll3-NC,dll3 m RNA表达明显下降,其中以sh-dll3#2沉默作用最为显著。***-8、Ed U细胞增殖实验结果示沉默dll3基因后,SCLC细胞株H69和H20的增殖受到抑制(Pdll3基因后,SCLC细胞株H69和H20的侵袭能力下降。***、免疫荧光结果示沉默dll3基因后,EMT相关蛋白E-cadherin表达增强,N-cadherin蛋白表达降低,表明EMT受到抑制。结论:dll3促进SCLC细胞增殖、侵袭及EMT进展。第三部分dll3在小细胞肺癌恶性行为中的机制研究目的:探究mi R-518d-5p和LIN28B对dll3的调控作用以及对小细胞肺癌细胞株恶性生物学行为的影响。方法:1.通过生物信息学预测与dll3m RNA结合的RNA结合蛋白、mi RNA及结合位点(http://***/);2.共转染mi R-518d-5p和dll3 m RNA 3’UTR结合靶点载体(dll3-WT)、突变体(dll3-MUT)以及LIN28B m RNA 3’UTR结合靶点载体(LIN28B-WT)以及突变体(LIN28B-MUT),双荧光素酶报告基因实验、Ago2-RIP验证mi R-518d-5p与dll3和LIN28B3’UTR的直接结合;3.转染mi R-518d-5p mimics,检测dll3 m RNA、LIN28B m RNA及其蛋白表达水平的变化情况;4.共转染sh-dll3和LIN28B过表达载体,检测小细胞肺癌H69、H20细胞株增殖、转移和侵袭能力及N-Cadherin和E-Cadherin蛋白水平变化情况;5.共转染sh-dll3和过表达LIN28B载体、共转染sh

关键词：小细胞肺癌 dll3 化疗敏感性预后增殖侵袭 EMT miR-518d-5p LIN28B

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活血通络汤在家兔激素性股骨头缺血性坏死模型中对Notch1、dll3和HERP1的影响

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中华中医药杂志 2018年第1期33卷 300-303页

作者：蔡万翔江蓉星王敏李涛李婷成都中医药大学临床学院成都610075 成都中医药大学附属医院成都610075 四川师范大学成都610068

目的:研究活血通络汤对家兔激素性股骨头缺血性坏死造模过程中Notch1、dll3和HERP1的影响。方法:将192只日本大耳兔随机分为预防治疗组(A组)、治疗组(B组)、模型对照组(C组)、空白对照组(D组),每组48只,A、B、C组运用贺西京造模法造模。... 详细信息

目的:研究活血通络汤对家兔激素性股骨头缺血性坏死造模过程中Notch1、dll3和HERP1的影响。方法:将192只日本大耳兔随机分为预防治疗组(A组)、治疗组(B组)、模型对照组(C组)、空白对照组(D组),每组48只,A、B、C组运用贺西京造模法造模。A组第2周开始喂服中药饲料,B组第3周开始喂服中药饲料,C、D组均喂服等量普通饲料。于第2、5、8周末检测血Notch1、dll3和HERP1 m RNA表达水平,同时做股骨头病理镜检,计算空骨陷窝率。结果:Notch1、dll3和HERP1表达值各组间比较不同时间段分析及空骨陷窝率分析具有统计学意义(Pdll3表达水平,降低空骨陷窝率,促进骨坏死的修复。

关键词：活血通络汤激素性股骨头缺血性坏死 Notch1 dll3 HERP1 兔

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活血通络汤对SANFH兔造模过程中Notch2、dll3以及PDGF表达的影响

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时珍国医国药 2019年第10期30卷 2334-2337页

作者：王敏蔡万翔李涛江蓉星重庆市中医院重庆400021 成都体育学院附属医院四川成都410041 都江堰市人民医院四川都江堰611830 成都中医药大学四川成都610072

目的通过研究活血通络汤对SANFH兔Notch2、dll3与PDGF表达的影响,探讨活血通络汤防治SANFH的作用机制。方法将192只日本大耳兔随机分为预防+治疗组A、治疗组B、模型对照组C、空白对照组D,每组兔各48只,第3周起A、B、C组采用贺氏造模法... 详细信息

目的通过研究活血通络汤对SANFH兔Notch2、dll3与PDGF表达的影响,探讨活血通络汤防治SANFH的作用机制。方法将192只日本大耳兔随机分为预防+治疗组A、治疗组B、模型对照组C、空白对照组D,每组兔各48只,第3周起A、B、C组采用贺氏造模法造模。A组第2周开始喂服中药饲料,B组第3周开始喂服中药饲料,C、D组均喂服等量普通饲料。并于第2、5、8周末检测兔血中Notch2、dll3基因表达值与PDGF含量。同时对兔骨组织标本做病理镜检,计算其空骨陷窝率。结果 A、B、C、D组的Notch2基因表达值在2、5、8周末呈递增趋势;各周末,C组Notch2基因表达值均高于D组(P0.05)。在dll3基因表达值方面,A、B组的dll3在第2至8周末呈下降趋势,C组在第2至8周末呈增高趋势。在PDGF方面,从第2周末至第8周末,A、B、C组PDGF呈下降趋势(P>0.05);第5周末时,C组PDGF低于A、B组(P>0.05);A、B、C组PDGF均低于D组(P>0.05)。第8周末时,A、B两组的PDGF明显高于C组(Pdll3以及增加PDGF的表达有关。

关键词：活血通络汤激素性股骨头缺血性坏死 Notch2 dll3 PDGF

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靶向dll3的双特异性抗体和CAR-T用于小细胞肺癌的免疫治疗研究

靶向DLL3的双特异性抗体和CAR-T用于小细胞肺癌的免疫治疗研究

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作者： NORHAN MOHAMED HAMDY EMAM AMAR 华中农业大学

学位级别：硕士

小细胞肺癌(SCLC)在肺癌患者约占15%,通常与吸烟有密切关系,小细胞肺癌被归类为侵略性程度非常高的肺癌。SCLC的治疗方法首先从化学疗法和放射疗法开始。由于SCLC通常分为局限性(LD)和广泛性(ED)两个阶段,SCLC的患者中有70%被诊断为广... 详细信息

小细胞肺癌(SCLC)在肺癌患者约占15%,通常与吸烟有密切关系,小细胞肺癌被归类为侵略性程度非常高的肺癌。SCLC的治疗方法首先从化学疗法和放射疗法开始。由于SCLC通常分为局限性(LD)和广泛性(ED)两个阶段,SCLC的患者中有70%被诊断为广泛阶段。dll3被认为是SCLC免疫疗法的理想靶标,因为它在SCLC患者中高表达,而在正常组织中几乎不表达。免疫检查点抑制剂和dll3靶向抗体偶联药物是目前SCLC免疫疗法中研究比较多的免疫治疗方法。双特异性抗体是通过将T细胞和肿瘤细胞直接桥连起来从而发挥T细胞的肿瘤杀伤活性。CAR-T细胞是将抗体片段表达在T细胞的表面,提高了T细胞对肿瘤细胞的识别与杀伤活性。本论文构建了靶向dll3的双特异性抗体和CAR-T,并研究了它们对小细胞肺癌的杀伤活性。双特异性抗体的构建采用经典的knob-into-hole结构,其中靶向dll3的抗体片段SC16.15与h Fc(knob)融合,靶向CD3的抗体片段OKT3与h Fc(hole)融合。CART细胞构建采用第三代结构,由抗体片段SC16.15、CD8跨膜区、共激活域CD28、4-1BB和CD3z构成。dll3双特异性抗体和CAR-T的肿瘤杀伤活性均通过细胞水平和和体内移植瘤小鼠模型测试。双特异性抗体的细胞结合活性分别用dll3阴性的A431细胞和dll3阳性的小细胞肺癌细胞系、T淋巴瘤细胞系Jurkat和原代PBMC细胞进行测试。双特异性抗体和CAR-T的肿瘤杀伤活性通过荧光素酶法进行测试,首先用慢病毒载体将荧光素酶报告基因导入上述细胞系中,通过测试荧光素酶活性的下降确定双特异性抗体和CAR-T的体外杀伤活性。双特异性抗体和CAR-T的体内抑瘤活性在NSG小鼠中测试,通过向NSG小鼠皮下接种SCLC细胞,待成瘤后,通过腹腔注射PBMC细胞和尾静脉注射双特异性抗体,或腹腔注射CAR-T细胞,观察对肿瘤生长的抑制作用。体外杀伤结果显示,靶向dll3的双特异性抗体和CAR-T均可迅速杀死dll3阳性的小细胞肺癌细胞系H446,H196,H82,和超表达dll3的A431细胞系系。体内抑瘤活性试验显示,双特异性抗体和CAR-T对肿瘤的生长均具有明显的抑制作用。联合PD-1检查点抑制抗体可以提高dll3双特异性抗体的抑瘤活性,但未能加强CAR-T的抗肿瘤活性。总体来说,本研究的结果表明,以dll3为靶点的双特异性抗体和CAR-T对小细胞肺癌均有很强的抑瘤活性,其中,dll3双特异抗体联合PD-1抗体对SCLC的抑瘤效果更理想。

关键词：小细胞肺癌 dll3 双特异性抗体 CAR-T PD-1抗体

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肿瘤相关巨噬细胞介导Notch信号通路配体DLL3的上调促进胃癌细胞...

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作者：吴丹琳南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景和目的Notch信号通路是一种高度保守的信号通路,参与肿瘤的发生发展。dll3作为Notch信号通路的配体,在不同的肿瘤中发挥着抑癌或促癌的功能。然而,人们对dll3在胃癌中的作用知之甚少。肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrop... 详细信息

研究背景和目的Notch信号通路是一种高度保守的信号通路,参与肿瘤的发生发展。dll3作为Notch信号通路的配体,在不同的肿瘤中发挥着抑癌或促癌的功能。然而,人们对dll3在胃癌中的作用知之甚少。肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrophages,TAMs)指浸润在肿瘤组织中的巨噬细胞,是肿瘤微环境中主要的浸润细胞,通过多种途径调节肿瘤细胞的生长,已有研究证实Notch信号通路参与调控TAMs的分化和功能。本研究在体外构建胃癌细胞与巨噬细胞共培养模型,初步探讨在胃癌细胞、巨噬细胞及肿瘤微环境中通过dll3介导的直接或间接的相互作用。研究方法1、体外构建胃癌细胞MKN45与巨噬细胞(Mφ)的共培养体系,将Mφ置于Transwell上室,MKN45于下室进行共培养。MTT检测MKN45细胞的增殖,ELISA检测上清分泌IL-10、IL-1 β和IL-12的水平,Western blot检测MKN45细胞中Notch信号通路蛋白的表达。2、构建过表达dll3的MKN45稳定细胞株(MKN45-dll3)和用siRNA下调dll3的表达,MTT检测dll3的上调和下调对MKN45细胞增殖的影响。3、将MKN45-dll3细胞株与Mφ共培养,ELISA检测上清分泌IL-10、IL-11β和IL-12的水平。4、全转录组测序MKN45-dll3细胞株,分析受dll3调控的基因。得到与Mφ功能相关的基因为IL-33,通过qPCR及ELISA进一步鉴定。然后,用rIL-33刺激Mφ,ELISA检测Mφ分泌IL-10、IL-1 β和IL-12的水平。5、通过免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)与质谱分析(IP-MS)鉴定MKN45细胞中与dll3相互作用并与Mφ功能相关的蛋白。结果1、Mφ和MKN45细胞共培养促进MKN45细胞的增殖,增加肿瘤微环境中IL-10、IL-1lβ和IL-12的水平,上调MKN45细胞dll3的表达。2、dll3在MKN45细胞中成功上调和下调,并促进和抑制MKN45细胞的增殖。同时,dll3的上调增加肿瘤微环境中IL-10和IL-12的水平。3、MKN45细胞中dll3的上调诱导IL-33表达,但IL-33对Mφ分泌IL-10、IL-1β和IL-12的水平没有影响。4、MKN45细胞中dll3与半乳糖凝集素-3-结合蛋白(galectin-3-binding protein,LG3BP)和71 kDa热休克同源蛋白(heat shock cognate 71 kDa protein,HSPA8)相互作用,可能诱导其至内体/溶酶体内降解。结论Mφ和MKN45细胞共培养上调MKN45中dll3的表达,促进MKN45细胞的增殖,增加肿瘤微环境中IL-10和IL-12的水平。这些结果是关于胃癌与巨噬细胞间通过Notch信号通路相互作用的新见解。

关键词： Notch 胃癌巨噬细胞 dll3 细胞增殖细胞因子

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活血通络汤在SANFH家兔造模过程中干预Notch2、dll3、PDGF的实验研究

活血通络汤在SANFH家兔造模过程中干预Notch2、DLL3、PDGF的实验...

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作者：王敏成都中医药大学

学位级别：硕士

【研究目的】通过研究活血通络汤干预激素性股骨头坏死(SANFH)家兔血中Notch2、dll3以及PDGF在造模前、造模中、造模后的表达的变化;并通过光镜与电镜镜下检测家兔股骨头骨组织标本的病理改变情况,从而研究活血通络汤预防治疗SANFH的疗... 详细信息

【研究目的】通过研究活血通络汤干预激素性股骨头坏死(SANFH)家兔血中Notch2、dll3以及PDGF在造模前、造模中、造模后的表达的变化;并通过光镜与电镜镜下检测家兔股骨头骨组织标本的病理改变情况,从而研究活血通络汤预防治疗SANFH的疗效及作用机制。【研究方法】将192只健康日本大耳兔随机分组,分为预防+治疗组A组、治疗组B组、模型对照组C组、空白对照组D组,每组各48只。A、B、C三组均从第3周开始采用贺西京造模法造模,造模的周期为6周。A组在造模前1周开始喂服等量的活血通络汤中药饲料;B组在造模开始时喂服活血通络汤中药饲料;C、D两组均喂服同等剂量的普通饲料。动态观察各组家兔的一般情况,并于第2周末、第5周末、第8周末应用RT-PCR法对家兔血中Notch2、dll3的基因表达值进行测定,应用Elisa法检测家兔血中PDGF的含量。同时截取家兔的双侧股骨头骨组织标本做病理镜检,并计算其空骨陷窝率。【研究结果】***2:A、B、C组Notch2基因表达值在第2周末、第5周末、第8周末呈增长趋势。第2周末时,A、B组Notch2高于D组(P3:A、B组的dll3在第2周末、第5周末、第8周末呈降低的趋势,C组的dll3在第2周末、第5周末、第8周末呈增高的趋势。第2周末时,A组、B组、C组dll3均明显高于D组(Pdll3高于D组(P>0.05);C组dll3高于A组、B组(P>0.05);第8周末时,A组dll3低于D组(Pdll3低于D组(Pdll3高于A、B两组(P>0.05)。***:从第2周末至第8周末,A、B、C组PDGF呈下降趋势(P>0.05);第2周末时,C组PDGF高于D组(P>0.05);A、B组PDGF低于C组(P>0.05)。第5周末时,C组PDGF低于A组、B组(P>0.05);A、B、C组PDGF均低于D组(P>0.05)。第8周末时,A、B两组的PDGF明显高于C组(Pdll3的表达呈正相关,与PDFG的表达成负相关。活血通络汤能够下调Notch2以及dll3的基因表达与股骨头空骨陷窝率,并维持血中PDGF的浓度。表明了活血通络汤能够减轻激素对血管的影响,促进血管的修复与生成,改善股骨头的血运。2.活血通络汤防治SANFH的机制可能是通过抑制Notch2、dll3基因的表达,上调PDGF的表达来刺激血管新生,加速血管的重塑,改善股骨头血供;并且刺激成骨细胞复制,促进骨形成。达到预防与治疗本病的作用。3.本研究课题基于“未病先防”的中医特色指导思想,变被动为主动,应用活血通络汤在SANFH发生之前给予干预治疗,从源头上阻断SANFH发生。为临床治疗股骨头缺血性坏死提供新的治疗模式。

关键词：激素性股骨头坏死活血通络汤 Notch2 dll3 PDGF

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