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甘油制备新型表面活性剂的研究

中国油脂 2008年第7期33卷 55-58页

作者：郝晋洪蒋惠亮方银军江南大学化学与材料工程学院江苏无锡214122 浙江赞成科技有限公司杭州310009

研究了非离子表面活性剂十二烷基聚甘油醚的合成条件。首先制备了中间产物十二烷基缩水甘油醚(dge),然后利用甘油与dge制得十二烷基聚甘油醚。考察了反应温度、催化剂种类、反应时间、甘油与dge摩尔比等条件对反应的影响,获得适宜的反... 详细信息

研究了非离子表面活性剂十二烷基聚甘油醚的合成条件。首先制备了中间产物十二烷基缩水甘油醚(dge),然后利用甘油与dge制得十二烷基聚甘油醚。考察了反应温度、催化剂种类、反应时间、甘油与dge摩尔比等条件对反应的影响,获得适宜的反应条件为:以氢氧化钠为催化剂,n(甘油)∶n(dge)=1.3∶1,在真空环境下以150℃反应4h,产率达88%。并利用自制的不同聚合度的甘油,合成了一系列同系物产品,该新型非离子表面活性剂具有良好的降低表面张力的能力。

关键词：甘油 dge 十二烷基聚甘油醚非离子表面活性剂

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基于MEMS技术的光通信器件及其市场前景

光通信技术 2003年第6期27卷 8-11页

作者：吴国锋中国电子科技集团第34研究所桂林541004

介绍了基于MEMS技术的光通信器件主要制造商及其产品情况,并概要分析了MEMS光器件的市场前景和发展方向。

关键词： MEMS Switch VOA OTF VCSEL RCE dge

非繁殖季节发情与乏情哈萨克羊下丘脑差异表达基因分析

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石河子大学学报（自然科学版） 2018年第2期36卷 145-152页

作者：梁慧慧翟曼君梁艳萍解一凡曹少奇赵宗胜石河子大学动物科技学院

通过构建数字基因表达谱(Digital Gene Expression,dge)文库,筛选出非繁殖季节乏情与营养诱导的发情哈萨克羊下丘脑差异表达基因,为丰富绵羊发情机制奠定基础。本研究选取36只哈萨克羊随机分为补饲组和对照组各18只。非繁殖季节采集3只... 详细信息

通过构建数字基因表达谱(Digital Gene Expression,dge)文库,筛选出非繁殖季节乏情与营养诱导的发情哈萨克羊下丘脑差异表达基因,为丰富绵羊发情机制奠定基础。本研究选取36只哈萨克羊随机分为补饲组和对照组各18只。非繁殖季节采集3只乏情和3只补饲后发情的哈萨克羊下丘脑,构建dge文库并进行差异基因数字表达谱分析。结果表明:通过补饲能够使处于非繁殖季节的哈萨克羊发情,其发情率为44%,而对照组没有发情现象。经差异基因数字表达谱分析,补饲组发情与对照组乏情下丘脑共筛选出828个差异表达基因,其中728个上调,100个下调。GO功能富集分析表明,差异表达基因主要在神经元胞体、轴突、细胞膜上表达,具有调节GTP酶的活性等功能,这些基因还参与细胞通讯、信号调控、神经冲动传导、细胞定位等生物过程。通过Pathway分析发现,差异表达基因显著富集在Gn RH信号通路、神经营养因子的信号转导通路、胰岛素信号通路等31条信号通路。结合dge文库及已有文献筛选出GNAQ、ERα、PI3K、POMC可能是参与营养诱导的调控哈萨克羊非繁殖季节发情相关通路的关键基因。

关键词：非繁殖季节发情乏情 dge 下丘脑差异表达基因

干式硬态切削不同硬度材料下刀具磨损的预测分析

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工具技术 2015年第12期49卷 13-15页

作者：吕钊沈浩唐林虎常青山高成秀林小军兰州理工大学兰州工业学院(甘肃省高校绿色切削加工技术及其应用省级重点实验室)

运用AdvantE dge软件提供的用户自定义Johnson-Cook模型和Usui磨损模型建立不同淬硬状态工件材料模型和刀具模型。对干式硬态车削过程进行有限元分析,得到PCBN刀具切削不同硬度Cr12MoV工件时刀具前刀面切削压力和切削温度,并判断出刀具... 详细信息

运用AdvantE dge软件提供的用户自定义Johnson-Cook模型和Usui磨损模型建立不同淬硬状态工件材料模型和刀具模型。对干式硬态车削过程进行有限元分析,得到PCBN刀具切削不同硬度Cr12MoV工件时刀具前刀面切削压力和切削温度,并判断出刀具磨损的变化规律。通过模拟分析得到模拟规律与实验规律基本符合,为工件材料的硬度选取提供合理参考。

关键词： AdvantE dge 干式硬态车削工件材料硬度刀具磨损

外源施加IAA增强黑大豆抗铝能力的生理和分子机理研究

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外源施加IAA增强黑大豆抗铝能力的生理和分子机理研究

作者：王平昆明理工大学

学位级别：硕士

铝是酸性土壤中植物生长和作物产量的一种主要限制因子。铝首先抑制了植物根系的生长与发育,进而阻碍根系对水分和养分的吸收。植物在长期进化过程中形成了多种解铝毒机制,而根系有机酸的分泌、胞内铝的区室化作用以及抗氧化酶活性的提... 详细信息

铝是酸性土壤中植物生长和作物产量的一种主要限制因子。铝首先抑制了植物根系的生长与发育,进而阻碍根系对水分和养分的吸收。植物在长期进化过程中形成了多种解铝毒机制,而根系有机酸的分泌、胞内铝的区室化作用以及抗氧化酶活性的提高等是植物抗铝的最常见机制。生长素(indole-3-acetic acid, IAA)是人类最早发现的一类植物激素,不仅对植物的正常生长与发育起到重要的作用,也在植物的抗逆过程中起到关键的调节作用。本研究以酸性土壤和铝胁迫耐受型黑大豆(丹波黑大豆,简称RB)和酸性土壤和铝胁迫敏感型黑大豆(简称SB)为材料,分析了外源施加IAA增强黑大豆抗铝能力的生理和分子机制,主要研究结果如下：1.外源施加IAA可以明显缓解铝胁迫对SB(铝敏感型黑大豆)和RB(抗铝型黑大豆)主根生长的抑制作用,并且能显著促进侧根的发育以及生物量的增加。RB在铝胁迫下外源施加不同浓度(0.5、1、25和50μM)IAA后,主根长、根冠比和鲜重、侧根数目和长度与仅有铝处理的相比随着IAA浓度的升高而升高。其中,在铝胁迫下外源施加50μM 1A对RB的主根长、单位主根上的侧根数、侧根长、根冠比和鲜重促进效果最佳,与仅有铝胁迫处理的相比分别增加了26.72%、110.69%、12.89%、58.76%和51.94%。与RB相似,SB也得到了有效的增加。然而,在铝处理液中施加25μM IAA对SB主根长、单位主根上侧根数目、侧根长、根冠比和鲜重的促进效果最佳,与仅有铝胁迫相比分别增加了41.02%、63.26%、16.01%、45.41%和39.43%。以上结果说明,外源施加IAA可以有效的缓解铝对植物的毒害作用。2.以抗铝品种丹波黑大豆(RB)为研究材料进一步分析了外源施加IAA增强黑大豆抗铝能力的生理和分子机制。研究结果表明,经25,50和200μMAlCl3胁迫处理24 h后,RB根尖IAA含量、柠檬酸分泌量和质膜H+-ATPase活性均表现为先上升后下降的趋势,而H2O2、MDA和根尖铝含量却随着铝处理浓度的增加呈显著性上升的趋势。此外,与单独铝胁迫处理(A25、A5o和A200)相比,不同浓度铝胁迫下外源施加50μM IAA使得RB根尖铝、MDA和H202含量显著降低,同时使I50A25、I50A50和150A200处理的RB根尖柠檬酸分泌量分别增加到2.39、1.73和6.85倍,且相应的质膜H+-ATPase活性也增加了1.09、1.74和1.45倍。可见,铝胁迫下外源施加IAA通过增强柠檬酸的分泌量和质膜H+-ATPase的活性来提高RB对铝的抗性,明显的缓解铝对RB的毒害作用。对调控柠檬酸分泌和质膜H+-ATPase活性相关基因表达水平结果表明,铝胁迫下外源施加50μM IAA使柠檬酸分泌相关基因MATE、STOP1表达水平最高,而外源施加IAA对GHA2基因的表达水平并没有明显的变化趋势。然而免疫共沉淀和Western分析结果表明,铝胁迫下外源施加IAA增强了RB根尖质膜H+-ATPase磷酸化水平及其与14-3-3蛋白的相互作用,且该机制在过表达△GHA2(去掉质膜H+-ATPase的C端自抑区)基因和质膜H+-ATPase基因抑制表达的转基因烟草得到了进一步的证实。以上结果表明,铝胁迫下外源施加IAA一方面通过调节柠檬酸分泌相关基因(MATE和STOP1)的表达,另一方面通过增强质膜H+-ATPase的磷酸化水平和与14-3-3蛋白的相互作用而提高铝诱导的柠檬酸分泌和对铝的抗性。3.植物的抗铝能力是由多基因协同作用的结果。为了深入而全面地理解IAA增强RB抗铝能力的分子机制,本研究利用数字基因表达谱(dge)技术分析了应答铝胁迫和铝胁迫下应答IAA的响应基因。在铝胁迫显著性诱导的上调表达的1104个基因中,受到IAA显著性上调或TIBA下调的基因有207个,其中包括一系列抗铝基因如MATE、ABC通道蛋白以及抗氧化胁迫相关基因,参与IAA含量调节的相关基因如GH3和PIN基因以及Ca2+信号转导的钙结合蛋白PBP1、bZIP转录因子、WRKY转录因子等。然而,编码质膜H+ATPase的基因如pma4的表达仅受到铝胁迫的诱导,这与前面的研究结果是一致的。在铝胁迫显著性下调表达的467个基因中,被IAA诱导显著上调表达或被TIBA诱导显著下调表达的共有基因103个,其中包括代谢相关基因如甾醇还原酶、脂肪酸去饱和酶等以及蛋白合成与降解相关基因。由此可见,铝胁迫下外源施加IAA可能通过增强一系列抗铝基因和信号转导相关基因的表达以及有效的逆转铝对RB根正常生命活动相关基因表达的抑制作用而增强RB对铝的抗性。

关键词：铝胁迫黑大豆 IAA 柠檬酸质膜H+-ATPase dge

B-3多糖对RAW264.7细胞免疫调节活性的影响

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B-3多糖对RAW264.7细胞免疫调节活性的影响

作者：玉蕾叶河北科技大学

学位级别：硕士

多糖的生物活性的研究在近几十年已被人们广泛关注。其中,不同来源多糖的免疫调节和抗肿瘤活性是多糖研究的热点。南极细菌的胞外多糖是否具有免疫调节活性也开始受到人们的关注。本课题就一株南极嗜冷菌B-3产的B-3胞外多糖是否对RAW26... 详细信息

多糖的生物活性的研究在近几十年已被人们广泛关注。其中,不同来源多糖的免疫调节和抗肿瘤活性是多糖研究的热点。南极细菌的胞外多糖是否具有免疫调节活性也开始受到人们的关注。本课题就一株南极嗜冷菌B-3产的B-3胞外多糖是否对RAW264.7细胞具有免疫调节作用展开研究。使用MTT法测定B-3多糖对RAW264.7细胞增殖的影响。结果表明,B-3多糖在一定浓度范围内能促进RAW264.7细胞的增殖,在低浓度时,促进增殖的效果更明显。另外,使用流式细胞仪检测B-3多糖对RAW264.7细胞吞噬FITC-dextran能力的影响,结果表明,B-3多糖在浓度0.2、2、20和100μg/mL时,均能提高RAW264.7细胞的吞噬能力,具浓度依赖性。分别使用格里斯试剂法(Griess reagent assay)和ELISA法测定B-3多糖对RAW264.7细胞或小鼠腹腔巨噬细胞分泌的一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNFα)和白介素10(IL10)的影响。结果表明,B-3多糖在浓度2、20和100μg/mL时,能够显著的增加RAW264.7细胞NO的分泌,也显著的增加RAW264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞TNFα和IL10的分泌。Toll样受体4(Toll-like receptors,TLR4)的抑制剂TAK-242显著的减少了B-3多糖刺激引起的RAW264.7细胞NO的分泌,说明B-3多糖对巨噬细胞的激活和TLR4有着密切的关系。使用Western blot法分析B-3多糖刺激的RAW264.7细胞内NF-κB信号通路的变化。结果显示,B-3多糖明显的诱导IκBα降解和p65发生磷酸化,说明B-3多糖激活了RAW264.7细胞内的NF-κB信号通路。使用Transwell小室和Snapwell小室以不接触或部分接触的方式将B-3多糖刺激后的RAW264.7细胞和小鼠黑色素瘤细胞(B16)共培养,结果表明适当浓度的B-3多糖能够增强RAW264.7细胞对B16细胞的杀伤能力。使用实时荧光定量PCR在mRNA水平检测B-3多糖刺激后的RAW264.7细胞中Fas和FasL的表达。实验结果表明,B-3多糖能够减少RAW264.7细胞内Fas的表达并增加其FasL的表达。Fas和FasL表达的变化可能和部分接触共培养时更多B16细胞的凋亡存在联系。数字基因表达谱(Digital Gene Expression Profiling,dge)检测B-3多糖对RAW264.7细胞基因表达的影响。结果显示,2μg/mL的B-3多糖的刺激导致RAW264.7细胞178个基因发生上调,242个基因发生下调。一氧化碳合酶Nos2(Nitric oxide synthase 2)和金属羧肽酶(Metallocarboxypeptidase D)这两个上调的基因能促进NO的合成。

关键词： B-3多糖 RAW264.7细胞免疫调节 TLR4 NF-κB NO dge

三角帆蚌转录组和数字基因表达谱分析及EF-hand基因的表达研究

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三角帆蚌转录组和数字基因表达谱分析及EF-hand基因的表达研究

作者：祁晓翔上海海洋大学

学位级别：硕士

我国是淡水珍珠生产大国,产量占全世界淡水珍珠总产量的95%以上,但是大型优质珍珠稀缺,产量较低,很难满足国际及国内珍珠市场的需求。我国淡水资源丰富,多年来生产中以外套膜无核珍珠养殖为主,但由于外套膜较薄,育珠空间受限,不易于培... 详细信息

我国是淡水珍珠生产大国,产量占全世界淡水珍珠总产量的95%以上,但是大型优质珍珠稀缺,产量较低,很难满足国际及国内珍珠市场的需求。我国淡水资源丰富,多年来生产中以外套膜无核珍珠养殖为主,但由于外套膜较薄,育珠空间受限,不易于培养大型珍珠。而内脏团空间较大,可以植入直径较大的珠核,缩短育珠周期,有利于培养大型珍珠,增加经济效益。但是由于淡水贝类是开放式循环系统,内脏团育珠部位靠近胃、肾、性腺等脏器,所产珍珠不如外套膜所产珍珠光泽好。本课题组长期以来针对如何在内脏团培育出大型优质珍珠而开展了不同层次的研究,对内脏团育珠的生理生化条件、插核部位、免疫反应以及钙代谢相关基因的功能等多方面的探索。三角帆蚌作为我国特有的主要淡水育珠蚌,在珍珠产地广为养殖。由于珍珠的主要成分是Ca CO3,因此加强对三角帆蚌钙代谢相关生物过程以及功能基因的研究具有重要意义。近年来随着生物分子技术的发展成熟,为各物种的功能基因研究提供了实验平台。但是目前软体动物的基因数据信息较为缺乏,海洋贝类的研究相对丰富一些,但是由于水环境的差异较大,淡水贝类的基因与可供参考的海洋贝类也有较大差异,长期以来拖缓了淡水贝类功能基因的研究。随着新一代测序技术的发展推广,转录组结合数字基因表达谱测序技术能够为无参考基因组信息的物种提供高通量数据分析。本研究采取三角帆蚌外套膜前、中、后部、内脏团、性腺、血淋巴6处与育珠相关组织,提取总RNA经检测合格后富集m RNA,经反转录成c DNA加测序接头构建文库,经检测合格后经Illumina Hi Seq2000进行测序。测序得到的原始序列经过滤后得到clean reads,拼接组装成257457条Unigene,经7大数据库比对注释出223345个基因,通过GO功能显著性富集和KEGG Pathway显著性分析筛选出156个与钙代谢相关的同源比对率较高的基因。选取200只体型差异较小的2龄三角帆蚌,随机选取20只为对照组,对其余180只实验组用蚌的外套膜和内脏团各插一粒直径3mm的珠核加一个外套膜小片,在同一水域进行常规养殖。分别各取对照组和插核后第5d、20d、50d、90d的5只蚌,取其外套膜和内脏团育珠部位的组织进行RNA抽提,经检测合格后用于dge测序。获得10个clean reads 7M以上的dge文库,与转录组注释序列mapping率都在90%以上,数据质量较高满足后续生物信息分析要求。通过基因差异表达分析、GO功能显著性富集分析和KEGG显著性分析,从转录组筛选出的156与钙代谢相关中筛选到58个表达差异显著的基因,对这58个基因进行不同育珠时期表达变化趋势分析,总结钙代谢相关基因与珍珠形成的表达分析。EF-hand基因是一类与钙代谢功能十分相关的基因,本研究在转录组和dge分析中找到7个EF-hand基因。首先对这7个基因进行氨基酸多序列比对和进化树分析,找出其相互之间的相似关系。挑选了其中的包含EF-hand钙结合结构域1(EF-hand calcium-binding domain-containing protein 1,EFCB1)基因进行c DNA序列克隆并对其核苷酸序列和氨基酸序列进行生物信息学分析。对EF-hand家族的7个基因进行不同育珠时期的表达分析及对EFCB1基因进行各组织表达分析。结果发现EF-hand基因在外套膜和内脏团组织中表达差异显著,推测这两个组织中珍珠形成基因表达模式差异较大。在不同育珠时间的表达差异有所不同,没有找到统一的表达变化模式。更多功能的发现需要更深层次和多方面的研究,通过对关键基因的表达调控来影响珍珠质的沉积。本研究构建的转录组数据平台以及10个dge文库为三角帆蚌提供了丰富的基因数据信息,为后续更多功能基因的研究探索以及珍珠形成的分子机理研究奠定了基础,通过更多分子水平的研究和科研力量的投入将最终在三角帆蚌内脏团培育出大型优质珍珠,加快我国珍珠产业的健康持续发展。

关键词：三角帆蚌内脏团育珠转录组 dge EF-hand基因

玉米非生物胁迫下赤霉素代谢相关基因的转录变化分析

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玉米非生物胁迫下赤霉素代谢相关基因的转录变化分析

作者：蒋超吉林农业大学

学位级别：硕士

赤霉素是重要的植物激素。最近的研究中发现,赤霉素合成代谢及信号传导中的相关基因参与了植物应答非生物胁迫的过程。为了探究玉米中赤霉素相关合成代谢基因对非生物胁迫的响应,我们对玉米自交系郑58苗期进行了高盐、干旱、低温胁迫处... 详细信息

赤霉素是重要的植物激素。最近的研究中发现,赤霉素合成代谢及信号传导中的相关基因参与了植物应答非生物胁迫的过程。为了探究玉米中赤霉素相关合成代谢基因对非生物胁迫的响应,我们对玉米自交系郑58苗期进行了高盐、干旱、低温胁迫处理后的转录谱分析(dge,Digital Genes Express)。根据dge分析的结果,初步确定了玉米中赤霉素合成代谢中的GA2ox类基因在低温、干旱和高盐条件下发生转录上调,而GA3ox类基因则会发生转录下调;另一类GA20ox基因则只在低温条件下发生上调。在研究赤霉素代谢相关基因的同时,我们还对与非生物胁迫相关的基因进行了分析,发现DREB/CBF-like基因在这三种胁迫下都发生显著的上调,而MYC转录因子则发生了显著的下调。NAC,bZIP和MYB基因却会产生不同的响应变化。LEA基因与CDPK基因相同,仅在低温胁迫下发生上调。根据转录分析的结果,赤霉素合成代谢参与了玉米的耐受非生物胁迫响应,因此有必要发掘和鉴定玉米中关键ZmGA2ox类赤霉素合成代谢调控基因。我们以水稻、短柄草和高粱中的GA2ox类基因作为参考基因,在玉米中发现了13个ZmGA2ox类基因,并对其进行了相关的基因结构和分类分析。另外,结合已公布的玉米Hapmap Ⅱ中的数据,对已发现的13个玉米ZmGA2ox类基因的遗传多样性进行了分析。结果显示13个基因中均存在不同数量的SNP位点,其中部分SNP位点存在于这些基因的编码区。根据已公布的玉米表达数据(Plant Expression Database,***),对这13个ZmGA2ox基因在不同的组织中表达状况也做了分析比较。为了进一步确定13个ZmGA2ox基因在玉米耐旱响应的不同作用。我们选择了耐旱性不同的三份玉米自交系材料郑58、B73和丹340进行了苗期干旱处理,并进行了干旱胁迫后生理生化指标的分析和转录变化的分析。qRT-PCR分析发现,干旱胁迫后部分ZmGA2ox基因会发生明显的表达变化,说明ZmGA2ox类基因与玉米耐旱响应相关。在不同材料中,ZmGA2ox1;1、ZmGA2ox3;1和ZmGA2ox9三个基因在干旱胁迫后发生了较为一致的转录变化,有可能是玉米赤霉素合成代谢中响应干旱胁迫的关键基因。通过本研究的开展,初步确定了玉米赤霉素合成代谢调控能够快速的参与耐受非生物胁迫响应。其中ZmGA2ox类调控基因,在玉米耐受干旱胁迫响应的过程中发挥主要作用。这些研究结果为未来确定与耐旱响应密切相关的关键ZmGA2ox基因,并进行候选基因关联分析等工作提供了依据。

关键词：玉米赤霉素代谢基因非生物胁迫 dge GA2ox GA信号

利用数字基因表达谱技术研究TDCIPP暴露致PC12细胞损伤的作用机制

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利用数字基因表达谱技术研究TDCIPP暴露致PC12细胞损伤的作用机制

作者：李丽中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯(TDCIPP)作为一种新型环境有机污染物受到了研究者的广泛关注,其生产量和使用量一直处于较高水平且呈现逐年增加的趋势。TDCIPP作为添加剂应用于纺织、家具、电子产品、婴幼儿产品等各行各业中,可经过一系列... 详细信息

磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯(TDCIPP)作为一种新型环境有机污染物受到了研究者的广泛关注,其生产量和使用量一直处于较高水平且呈现逐年增加的趋势。TDCIPP作为添加剂应用于纺织、家具、电子产品、婴幼儿产品等各行各业中,可经过一系列的转化过程逐渐渗入到环境介质中。环境及生物监测研究发现,在水、室内外空气、土壤、灰尘等环境介质中,甚至鱼类、鸟类等生物体内均检测到不同浓度范围的TDCIPP,有些样本中的含量甚至超越了溴代联苯醚的水平。人类可通过摄食、吸入及皮肤吸收等多种途径暴露TDCIPP,目前已经在人类的尿液、乳汁以及胎盘中都检测到TDCIPP及其代谢产物的存在。因此,评价TDCIPP潜在的毒性以及对环境健康的影响已经刻不容缓。已有研究表明,TDCIPP能够对哺乳类动物产生甲状腺内分泌干扰毒性以及潜在的神经毒性。本研究以多巴胺能神经元模型(PC12细胞)为受试对象,初步探讨TDCIPP的毒性效应以及可能的分子机制。目的建立有机磷酸酯阻燃剂TDCIPP致PC12细胞损伤模型,并观察TDCIPP暴露产生的毒性效应;应用数字基因表达谱(dge)测序技术筛选TDCIPP暴露致PC12细胞损伤的差异表达基因并加以验证,进而探讨TDCIPP致PC12细胞损伤的毒性作用机制。为评价TDCIPP毒理学机制提供数据支持。方法1、TDCIPP暴露对PC12细胞产生的毒性效应评估:1.1、实验分组及处理:分化的PC12细胞分为5组:(1)正常对照组(Control组):含有细胞的培养液;(2)TDCIPP暴露组,暴露剂量为7.5,15,30,60?M,共4组。每组设置3-6个复孔。1.2、TDCIPP对PC12细胞生存率的影响:培养PC12细胞并刺激分化为多巴胺能神经元细胞,按实验分组分别暴露TDCIPP 24 h和72 h,采用CCK-8法检测TDCIPP暴露对PC12细胞生存率的影响,并确定TDCIPP的暴露时间;1.3、TDCIPP对PC12细胞氧化应激的影响:分化的PC12细胞按实验分组暴露TDCIPP 72 h,采用分子探针DCFH-DA试剂盒,以流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)的含量;采用酶联免疫吸附法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的含量。1.4、TDCIPP对PC12细胞凋亡的影响:分化的PC12细胞按实验分组暴露TDCIPP 72 h,采用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒,以流式细胞仪检测细胞凋亡率;并利用Western blot技术检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达量。2、TDCIPP暴露对PC12细胞毒性作用机制的研究:2.1、实验分组及处理:用于dge测序分析的实验分组为:正常对照组(C组)以及60?M TDCIPP暴露组(H组);用于qRT-PCR以及Western blot检测的实验分组同1.1小节;暴露时间均为72 h,每个实验均设置3个复孔。2.2、分化的PC12细胞按实验分组暴露TDCIPP后,运用dge测序技术检测PC12细胞mRNA表达情况,筛选出差异表达的基因,并通过GO富集和KEGG富集寻找可能的代谢通路产生的影响;2.3、分化的PC12细胞按实验分组进行TDCIPP暴露处理,选取6个显著表达的差异基因(Myc、p21、Lamb3,col1a1,THBS和CREB),运用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术验证dge测序数据的准确性;2.4、分化的PC12细胞按实验分组进行TDCIPP暴露处理,采用Western blot技术检测PC12细胞中磷酸化PI3K/Akt及非磷酸化PI3K/Akt/Myc/p21蛋白的表达量。结果1、TDCIPP暴露对PC12细胞产生的毒性效应评估:1.1、TDCIPP对PC12细胞生存率的影响:不同剂量的TDCIPP暴露PC12细胞24 h、72 h后,细胞的生存率均随暴露剂量的升高而降低,呈现剂量效应关系;在相同的暴露剂量下,72 h暴露所致细胞生存率的降低程度高于24 h暴露;当TDCIPP剂量为60μM、暴露72 h时,细胞存活率为(58.15?0.78)%,接近半数致死浓度,故选取72 h作为暴露时间;1.2、TDCIPP对PC12细胞氧化应激的影响:与对照组相比,TDCIPP暴露组细胞内ROS的含量呈上升趋势,且在30,60μM剂量时具有显著性差异(P(27)0.01);SOD与GSH的含量随TDCIPP暴露剂量的升高而降低;MDA含量则呈现升高的趋势;1.3、TDCIPP对PC12细胞凋亡的影响:与对照组相比,TDCIPP暴露组细胞凋亡率明显升高,呈现剂量依赖的关系,在15,30,60μM暴露组所致细胞凋亡率的增加具有统计学意义(P(27)0.01),且在最高暴露剂量60μM时,细胞的凋亡率增加

关键词： TDCIPP dge PI3K/Akt信号通路细胞凋亡