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梨极矮化突变体S基因型鉴定与della蛋白编码基因的克隆

梨极矮化突变体S基因型鉴定与DELLA蛋白编码基因的克隆

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作者：巩艳明延边大学

学位级别：硕士

本研究以延边小香水梨实生后代中发现的矮化紧凑的突变体等17个梨属砧木及延边地区栽培梨品种为试材,应用PCR扩增及克隆、测序技术分离其S基因,使用生物信息学软件对各序列进行分析和同源性搜索比对,最终确定各品种的S基因型,初步推测... 详细信息

本研究以延边小香水梨实生后代中发现的矮化紧凑的突变体等17个梨属砧木及延边地区栽培梨品种为试材,应用PCR扩增及克隆、测序技术分离其S基因,使用生物信息学软件对各序列进行分析和同源性搜索比对,最终确定各品种的S基因型,初步推测梨极矮化突变体亲本;应用RT-PCR、cDNA末端快速扩增技术（RACE）克隆梨极矮化突变体和苹果梨della家族蛋白编码基因的编码区全长。主要研究结果如下：梨矮化突变体等17个梨属砧木及延边地区栽培梨品种的S基因型分别为：“极矮化突变体”、“苹果梨”、“东宁五号大梨”、“延光梨”、“S2（中矮一号）”、“S7”为S1S17;“苹博香”为S1S8m;“早酥”为SlSd;“延边谢花甜”、“S5”为S17S31;“尖把梨”为S12S30;“延边明月梨”为S3Se;“小香水芽变”为SeSx;“朝鲜洋梨”为SeS3;“身不知”为S5Sd;“PDR54（中矮二号）”为。S4S8S17;“山梨”为S12Sx。其中“苹博香”的S8m为新基因,“PDR54”为三倍体。利用RACE技术从梨极矮化突变体中克隆到一个编码della家族蛋白的全长cDNA序列,命名为PuRGL。该基因全长1743bp,包含一个完整的编码580个氨基酸的开放阅读框（ORF）.PuRGL与MdRGL2α.MhGAI、RcGAI、***2的同源性分别为98%、98%、82%、81%、77%;结构分析表明该基因具有della家族蛋白的典型结构域。利用RACE技术从苹果梨中克隆到两个编码della家族蛋白的全长cDNA序列,分别命名为PbRGLl和PbRGL2。PbRGL1全长1755bp,包含一个完整的编码584个氨基酸的ORF,PbRGL1与MdRGL2b、MhGAI、RcGAI、PtGAS、AtRGL2的同源性分别为99%、93%、83%、82%、78%、78%、PbRGL2全长1743bp,包含一个完整的编码580个氨基酸的ORF, PbRGL2与MdRGL2α、MhGAI、RcGAI、PtGRAs、AtRGL2的同源性分别为98%、98%、82%、81%、77%。结构分析表明以上两个基因具有della家族蛋白的典型结构域。

关键词：梨极矮化突变体 S基因型 della蛋白编码基因 RACE技术克隆

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