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离子交换凝胶Capto-deae替代deae-sepharose纯化乙脑病毒抗原研究

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生物化工 2018年第1期4卷 29-30,34页

作者：胡雪芹珠海市丽珠单抗生物技术有限公司广东珠海513000

乙脑病毒抗原离子交换层析中,使用新型的凝胶填料Capto-deae替代deae-sepharose纯化乙脑病毒抗原的研究。研究结果表明,使用离子交换凝胶填料Capto-deae层析不仅产品质量更好,而且生产效率也得到了提高。

关键词：乙脑病毒离子交换 Capto-deae deae-sepharose

肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖的提取纯化及其对细胞免疫活性的影响

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生物工程学报 2005年第3期21卷 461-465页

作者：张燕李轻舟杜连祥戚薇陈锦英天津科技大学生物工程学院天津300222 天津医科大学医学微生物学院天津300070

采用液体深层培养得肺炎克雷伯氏菌Kp 9株发酵液,研究确立了菌体快速裂解条件:NP4 0 1%和胰蛋白酶2 5 0IU g菌体,5 0℃作用1h ,然后加入溶菌酶80 μg mL ,5 6℃作用1h ;裂解液经超滤浓缩和有机溶剂沉淀获得多糖粗品;多糖粗品先后经CTAB... 详细信息

采用液体深层培养得肺炎克雷伯氏菌Kp 9株发酵液,研究确立了菌体快速裂解条件:NP4 0 1%和胰蛋白酶2 5 0IU g菌体,5 0℃作用1h ,然后加入溶菌酶80 μg mL ,5 6℃作用1h ;裂解液经超滤浓缩和有机溶剂沉淀获得多糖粗品;多糖粗品先后经CTAB吸附分离,deae sepharoseFastFlow离子交换和SephacrylS 30 0HR凝胶过滤纯化,得分子量分布相对均一的多糖纯品,产品得率为0 2 5 1g L。采用淋巴细胞转化实验分别探讨了多糖粗品和纯品的免疫活性,研究显示荚膜多糖具有高效的体外细胞免疫活性,并具有典型的双向免疫调节作用。研究结论为肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖的开发奠定了前期基础。

关键词：肺炎克雷伯氏菌免疫活性荚膜多糖 deae-sepharose 提取纯化液体深层培养淋巴细胞转化免疫调节作用分子量分布快速裂解胰蛋白酶溶剂沉淀超滤浓缩吸附分离 CTAB Fast 离子交换 Flow 凝胶过滤产品得率发酵液

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神经红蛋白的表达、分离纯化和谱学表征

科学通报 2005年第10期50卷 964-969页

作者：李连之冀海伟赵超许涛刘国富付崇罗闫华超聊城大学化学化工学院聊城252059 聊城大学生命科学院聊城252059

报道了神经红蛋白(NGB)的基因表达、分离纯化和谱学表征.将载有NGB基因的pET3a质粒转入***21(DE3)plys细菌,于TB培养基中进行表达,其表达量占菌体总蛋白的10%左右.依次经硫酸铵分级沉淀,deae-sepharose阴离子交换柱,Hiload16/60Superde... 详细信息

报道了神经红蛋白(NGB)的基因表达、分离纯化和谱学表征.将载有NGB基因的pET3a质粒转入***21(DE3)plys细菌,于TB培养基中进行表达,其表达量占菌体总蛋白的10%左右.依次经硫酸铵分级沉淀,deae-sepharose阴离子交换柱,Hiload16/60Superdex75凝胶过滤柱和Hiprep16/10QFF阴离子交换柱纯化,得到了电泳纯的血红色可溶性蛋白.电喷雾质谱测得其分子量为16930.0Da.紫外-可见吸收光谱表明,还原态的NGB在425nm有一强吸收峰,在531和559nm处有弱吸收峰,它们可分别归属为金属卟啉的γ,β和α吸收带,氧化态的NGB在413nm处有强吸收,则对应于金属卟啉的γ吸收带,是电子在卟啉环中非定域化π电子的轨道跃迁(π→π?)的结果.荧光激发谱最大波长为281nm,发射谱最大波长为338nm.圆二色谱表明其二级结构为典型的α螺旋结构,在410nm处有一血红素正峰.酸稳定性研究表明,pH>4时蛋白稳定.

关键词：谱学表征分离纯化 deae-sepharose 神经紫外-可见吸收光谱阴离子交换柱硫酸铵分级沉淀 E.Coli 金属卟啉可溶性蛋白电喷雾质谱荧光激发谱稳定性研究基因表达 GB基因凝胶过滤轨道跃迁螺旋结构二级结构圆二色谱

一步柱层析纯化B-藻红蛋白及其毛细管电泳结合激光诱导检测

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食品科学 2006年第9期27卷 188-193页

作者：胡金梅魏东郭祀远陈峰华南理工大学轻工与食品学院广东广州510640

本研究采用硫酸铵沉淀结合deae-sepharoseFF离子交换柱层析技术分离纯化紫球藻中的B-藻红蛋白。试验结果表明,藻红蛋白粗提物经65%硫酸铵沉淀2d后过柱层析,B-藻红蛋白的纯度为A545nm/A280nm=3.0;而用65%硫酸铵沉淀2个月后,只需采用一步... 详细信息

本研究采用硫酸铵沉淀结合deae-sepharoseFF离子交换柱层析技术分离纯化紫球藻中的B-藻红蛋白。试验结果表明,藻红蛋白粗提物经65%硫酸铵沉淀2d后过柱层析,B-藻红蛋白的纯度为A545nm/A280nm=3.0;而用65%硫酸铵沉淀2个月后,只需采用一步柱层析,B-藻红蛋白的纯度可提高到5.37,即达到纯品要求(纯度大于4.5)。说明65%硫酸铵对B-藻红蛋白具有高度选择性,其工艺效果对分离纯化有很大影响。特征吸收光谱和荧光光谱证实纯化后的产物符合B-藻红蛋白的性质,Native-PAGE电泳只出现单一染色带,表明获得的B-藻红蛋白是均一的;SDS-PAGE电泳出现2条染色带,一条着色较深带为α和β亚基,分子量为16～18kD左右,另一条较浅为γ亚基,分子量大约为31kD。同时建立了涂层毛细管柱结合激光诱导荧光电泳技术快速检测B-藻红蛋白纯度的分析方法,结果出现单一峰,表明毛细管电泳用于B-藻红蛋白的纯度检测高效可靠。

关键词： B-藻红蛋白 deae-sepharose FF层析毛细管电泳

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苦荞水溶性蛋白体外吸附胆酸盐能力的研究

食品科学 2011年第23期32卷 77-81页

作者：周小理黄琳周一鸣上海应用技术学院香料香精技术与工程学院上海200235

通过采用硫酸铵盐析法、deae-sepharose Fast Flow离子交换层析法提取分离制备苦荞水溶性蛋白,并通过磷酸盐缓冲液pH值、动态层析流速的最佳选择改善分离提纯效果。同时通过体外吸附胆酸盐能力的测定证实所提取分离得到的苦荞水溶性蛋... 详细信息

通过采用硫酸铵盐析法、deae-sepharose Fast Flow离子交换层析法提取分离制备苦荞水溶性蛋白,并通过磷酸盐缓冲液pH值、动态层析流速的最佳选择改善分离提纯效果。同时通过体外吸附胆酸盐能力的测定证实所提取分离得到的苦荞水溶性蛋白具有一定的降血脂功能。结果发现:当磷酸盐缓冲溶液pH值为6.5、流速1.0mL/min于室温下洗脱的效果最好,得到的3个主要分离组分中峰3的体外吸附胆酸盐能力最佳。

关键词：苦荞水溶性蛋白硫酸铵盐析 deae-sepharose Fast Flow离子交换层析体外吸附胆酸盐降血脂

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关白附多糖纯化工艺优化及抑制结肠癌肝转移

世界科学技术-中医药现代化 2021年第9期23卷 3281-3288页

作者：赵可李汉清蒋嘉烨可燕上海中医药大学教学实验中心上海201203 上海中医药大学中药学院上海201203

目的采用Box-Behnken法优化关白附粗多糖经deae-sepharose Fast Flow离子交换色谱法分离得到0.2M NaCl部位多糖ACP02的纯化工艺,为该成分的富集和后续的药效开发打下基础。方法在单因素试验基础上,以上样量、洗脱时间、洗脱流速为影响因... 详细信息

目的采用Box-Behnken法优化关白附粗多糖经deae-sepharose Fast Flow离子交换色谱法分离得到0.2M NaCl部位多糖ACP02的纯化工艺,为该成分的富集和后续的药效开发打下基础。方法在单因素试验基础上,以上样量、洗脱时间、洗脱流速为影响因素,总多糖含量为评价指标,Box-Behnken响应面法优化纯化工艺。以雄性BALB/C裸鼠注射HT-29单细胞悬液作为结肠癌肝转移模型,分别用多糖低剂量组(100 mg·kg^(-1 ))、多糖高剂量组(200 mg·kg^(-1 ))处理,观察老鼠体重变化,30天后处死小鼠,取出肝脏和脾脏,观察发生转移的裸鼠个体数量。结果根据响应面法得出deae-sepharose Fast Flow离子交换色谱法最优工艺参数,即上样量5.03 g,洗脱时间73.10 min,洗脱流速7.33 mL·min^(-1);不同质量浓度多糖给药后,裸鼠体重无明显变化,给药组与对照组相比较发生转移的裸鼠个体数量显著性减少。结论该方法纯化ACP02方便可行、稳定可靠、预测性良好。ACP02对于体内结肠癌肿瘤肝转移有明显抑制作用。

关键词：关白附多糖纯化工艺 Box-Behnken 响应面法 deae-sepharose Fast Flow 离子交换色谱法

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大量分离叶绿素a和b的方法

植物生理学通讯 2002年第2期38卷 156-158页

作者：杨建虹陶冶中国科学院研究生院北京100039 中国科学院高能物理研究所北京100039

在原有分离叶绿素a和b的deae sepharoseCL 6B和sepharoseCL 6B柱层析法的基础上 ,用较大的层析柱 ,在保持分离效果的前提下 ,提高流速 ,并对层析柱进行原位再生处理 ,实现循环分离 ,可节省装柱和平衡时间 ,快速大量分离纯化叶绿素并可... 详细信息

在原有分离叶绿素a和b的deae sepharoseCL 6B和sepharoseCL 6B柱层析法的基础上 ,用较大的层析柱 ,在保持分离效果的前提下 ,提高流速 ,并对层析柱进行原位再生处理 ,实现循环分离 ,可节省装柱和平衡时间 ,快速大量分离纯化叶绿素并可循环再生。 10 0 g菠菜叶可分离得到叶绿素a约 5 0mg ,叶绿素b约 15mg。

关键词： deae-sepharose CL-6B sepharose CL-6B 柱层析叶绿素分离

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桔梗多糖的分离纯化与含量测定

中国农学通报 2011年第17期27卷 83-86页

作者：贾林陆金健卢德赵施佳杰周文雅沃兴德浙江中医药大学生命科学学院杭州310053

利用离子交换凝胶柱层析法分离纯化桔梗多糖,并对纯化组分进行纯度鉴定和糖含量及蛋白质含量测定。桔梗饮片经热水浸提、乙醇分步沉淀得桔梗粗多糖PPS80,Sevage法脱蛋白后,通过deae-sepharose FF离子交换和Sephadex G-75凝胶柱层析进行... 详细信息

利用离子交换凝胶柱层析法分离纯化桔梗多糖,并对纯化组分进行纯度鉴定和糖含量及蛋白质含量测定。桔梗饮片经热水浸提、乙醇分步沉淀得桔梗粗多糖PPS80,Sevage法脱蛋白后,通过deae-sepharose FF离子交换和Sephadex G-75凝胶柱层析进行纯化鉴定。分别采用苯酚-硫酸法和考马斯亮蓝染色法测定纯化后各组分的糖和蛋白质含量。试验结果表明,从桔梗粗多糖PPS80中分离得到2个均一性组分PPS80-I和PPS80-Ⅱ,糖含量分别为90.32%和86.75%,蛋白质含量分别为0.48%和1.96%。该试验首次采用deae-sepharose FF离子交换柱层析结合Sephadex G-75凝胶柱层析有效分离纯化出桔梗多糖均一性组分,为桔梗多糖的进一步研究提供基础。

关键词：多糖离子交换柱层析凝胶层析 deae-sepharose FF Sephadex G-75

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交变电场下离子交换色谱分离过程

化工学报 2001年第4期52卷 311-315页

作者：王东海刘铮清华大学化学工程系北京100084

以牛血清白蛋白在阴离子交换剂deae -sepharoseFastFlow上的吸附和解吸过程为例 ,考察了交变电场下离子交换色谱过程的吸附和洗脱过程及其传质特性 .结果表明 :在本文实验条件下 ,交变电场电流强度的变化对离子交换吸附平衡无显著影响 ... 详细信息

以牛血清白蛋白在阴离子交换剂deae -sepharoseFastFlow上的吸附和解吸过程为例 ,考察了交变电场下离子交换色谱过程的吸附和洗脱过程及其传质特性 .结果表明 :在本文实验条件下 ,交变电场电流强度的变化对离子交换吸附平衡无显著影响 ,而外加电场在介质孔内所产生的电渗流可加速待分离组分进出固相介质的传递过程 ,显著提高色谱填充床的动态吸附容量。

关键词：离子交换色谱交变电场电渗牛血清白蛋白 deae-sepharose Fast Flow 分离吸附解吸