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dazl基因单核苷酸多态性与弱畸精子症的相关性研究

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中华男科学杂志 2013年第4期19卷 311-314页

作者：叶禄伟余庆锋杨学习李景平武小强张永海毛向明南方医科大学附属南方医院泌尿外科广东广州510515 中山大学附属汕头医院泌尿外科广东汕头515031 南方医科大学生物技术学院抗体工程研究所广东广州510515

目的:探讨dazl基因(deleted in azoospermia like)单核苷酸多态性(SNP)与弱精子症伴畸形精子症男性不育的关系。方法:收集弱畸精子症不育患者(病例组,n=173)和精液正常男性(对照组,n=175)精液样本,进行精液常规及精子形态学分析并提取... 详细信息

目的:探讨dazl基因(deleted in azoospermia like)单核苷酸多态性(SNP)与弱精子症伴畸形精子症男性不育的关系。方法:收集弱畸精子症不育患者(病例组,n=173)和精液正常男性(对照组,n=175)精液样本,进行精液常规及精子形态学分析并提取精子基因组DNA,应用Sequenom MassARRAY SNP分型技术对dazl基因A260G和A386G多态性位点进行基因分型,比较病例组与对照组基因型的分布差异。结果:在病例组与对照组中,dazl基因A260G、A386G这两个位点均表现为野生基因型,无突变基因型。结论:dazl基因A260G和A386G两个多态性位点与汉族男性精子活力低下及精子形态异常所致不育可能不存在相关,不足以视为男性不育的易感基因。

关键词：男性不育弱畸精子症 dazl基因单核苷酸多态性汉族人群

少弱精子症患者dazl基因DNA甲基化分析

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中华生殖与避孕杂志 2021年第4期41卷 327-332页

作者：薛鹏王鲲鹏顾金保卢道远汪辉张小宝徐州医科大学附属连云港医院泌尿外科 222000 徐州医科大学附属连云港医院麻醉科 222000

目的比较正常生育男性及少弱精子症患者dazl基因启动子区域DNA甲基化水平的差异。方法采用病例对照研究,回顾性分析2018年6月至2019年6月期间于徐州医科大学附属连云港医院就诊的具有正常生育男性(对照组)15例和少弱精子症患者35例(少... 详细信息

目的比较正常生育男性及少弱精子症患者dazl基因启动子区域DNA甲基化水平的差异。方法采用病例对照研究,回顾性分析2018年6月至2019年6月期间于徐州医科大学附属连云港医院就诊的具有正常生育男性(对照组)15例和少弱精子症患者35例(少弱精子症组)的临床资料,对精液标本进行精子形态与精子浓度、活力分析。提取精液基因组DNA行亚硫酸氢盐处理,利用PCR体外扩增并将PCR产物经纯化后与pCR2.1载体连接及酶切验证,挑选阳性克隆进行测序和DNA甲基化程度差异比较。结果对照组dazl基因启动子均呈低甲基化水平,甲基化率为0.96%±0.46%,少弱精子症组甲基化率为12.15%±11.35%,组间差异有统计学意义(P=0.0004);dazl基因甲基化率在少弱精子症组患者中个体差异明显,有12例(34.3%)患者DNA甲基化水平超过10%。结论dazl基因启动子区域甲基化异常可能和少弱精子症有关,有望成为男性生精缺陷的生物学标志之一。

关键词：男性不育 dazl基因少弱精子症 DNA甲基化重亚硫酸盐测序PCR

dazl基因对犊牛支持细胞几种精子发生相关基因表达的影响

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DAZL基因对犊牛支持细胞几种精子发生相关基因表达的影响

作者：于磊东北农业大学

学位级别：硕士

睾丸支持细胞(sertoli cell)被认为是生精细胞的支架细胞，能够为生精细胞提供必需的营养物质，并且合成和分泌雄激素结合蛋白，为生精细胞提供高浓度的雄激素环境，对精子发生发挥着重要的作用。因此，研究睾丸支持细胞的体外培养与生... 详细信息

睾丸支持细胞(sertoli cell)被认为是生精细胞的支架细胞，能够为生精细胞提供必需的营养物质，并且合成和分泌雄激素结合蛋白，为生精细胞提供高浓度的雄激素环境，对精子发生发挥着重要的作用。因此，研究睾丸支持细胞的体外培养与生物学特性，不仅对支持细胞潜在的功能研究提供基础，而且对雄性不育、器官移植以及转基因动物生产等问题的解决开辟了广阔的前景。本研究首先利用组合酶消化法分离出犊牛睾丸支持细胞，并采用差速贴壁法对支持细胞进行纯化，进一步通过免疫细胞化学和分子标记检测技术对支持细胞纯度进行了鉴定;对不同血清浓度条件下支持细胞的培养特性进行了分析;此外，本研究采用MTT提取比色方法对支持细胞的体外增殖特性进行了分析比较;通过克隆扩增出牛dazl基因并构建其真核表达载体pEGFP-N3-dazl，采用脂质体介导使其转染至睾丸支持细胞，利用Real-time PCR技术检测支持细胞中过表达dazl后精子发生相关基因的表达变化，并通过G418筛选稳定过表达dazl的细胞株。本研究为阐明支持细胞的体外培养特性及生物学应用前景奠定基础，主要研究结果如下： (1)利用组合酶法可以对犊牛睾丸支持细胞进行分离纯化，支持细胞在体外培养条件下能够传至第20代，并且随着传代次数的增加，支持细胞的增殖速度越来越慢。 (2)2%浓度血清的培养基能够用于犊牛睾丸支持细胞的体外培养。 (3)利用免疫组化及RT-PCR技术对体外培养的犊牛睾丸支持细胞进行了有效的鉴定，其纯度为95%以上;利用AKP染色对生精细胞进行了初步鉴定。 (4)由细胞生长曲线可以发现，第1代睾丸支持细胞按3.5×10个/ml的密度接种，能够获得较好的增殖效果。 (5)本试验成功构建出带绿色荧光蛋白标记的牛dazl真核表达质粒pEGFP-N3-dazl。 (6)支持细胞内瞬时过表达dazl显著上调BOULE和TPX1基因的表达(P基因mRNA的表达没有显著性变化。 (7)本研究筛选得到稳定表达dazl的支持细胞的克隆。

关键词：犊牛支持细胞 dazl基因细胞增殖真核表达载体

浙江地区无精子症和少弱精子症患者dazl基因A260G和A386G单核苷酸多态性分析

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中华男科学杂志 2015年第8期21卷 713-716页

作者：倪吴花杨旭杨海燕费前进潘承双黄学锋温州医科大学附属第一医院生殖医学中心浙江温州325000

目的：探讨浙江地区人群中dazl基因A260G和A386G单核苷酸多态性（SNP）与无精子症和少弱精子症的关系。方法：收集浙江地区无精子症和少弱精子症患者317例和正常生育男性246例外周血标本,利用SNa Pshot SNP分型技术对样本dazl基因Q260G... 详细信息

目的：探讨浙江地区人群中dazl基因A260G和A386G单核苷酸多态性（SNP）与无精子症和少弱精子症的关系。方法：收集浙江地区无精子症和少弱精子症患者317例和正常生育男性246例外周血标本,利用SNa Pshot SNP分型技术对样本dazl基因Q260G和A386G多态性位点进行分型。结果：dazl基因A260G在浙江地区汉族人群中具有多态性,其基因频率与基因型频率分布在病例组和对照组中均符合Hardy-Weinberg平衡。AA、AG和GG的基因型频率在对照组中分别为92.3%、7.3%和0.4%,而病例组中分别为94.3%、5.7%和0%,统计学分析无显著性差异（P=0.430,OR=0.780,95%CI=0.413～1.46）。A386G突变只在正常对照组中出现1例杂合子AG,两组中都没有发现纯合子GG突变,两组之间亦无显著性差异（P=0.259,OR=0.698,59%CI：0.374～1.306）。结论：dazl基因Q260G和A386G多态性与中国浙江地区无精子症和少弱精子症无相关性,两者都不能作为无精子症和少弱精子症遗传诊断的分子标志。

关键词：男性不育 dazl基因单核苷酸多态性浙江地区

山羊dazl基因的克隆及在山羊骨髓间充质干细胞中的表达

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南京农业大学学报 2012年第6期35卷 104-110页

作者：张艳丽钟部帅樊懿萱周峥嵘王子玉应诗家郭蓉王锋南京农业大学动物胚胎工程技术中心江苏南京210095

本研究以山羊睾丸组织为材料,用RT-PCR法成功克隆了山羊dazl基因的cDNA序列950 bp,测序和生物信息学分析表明,其含有885 bp的完整开放阅读框(ORF),编码295个氨基酸,与牛的氨基酸序列同源性为97.97%,编码产物含有典型的RNA识别基序RRM和... 详细信息

本研究以山羊睾丸组织为材料,用RT-PCR法成功克隆了山羊dazl基因的cDNA序列950 bp,测序和生物信息学分析表明,其含有885 bp的完整开放阅读框(ORF),编码295个氨基酸,与牛的氨基酸序列同源性为97.97%,编码产物含有典型的RNA识别基序RRM和DAZ重复基序;将山羊dazl基因亚克隆至表达载体pEGFP-C1上,构建了山羊dazl基因真核表达载体pEGFP-dazl,采用脂质体法将其瞬时转染至山羊骨髓间充质干细胞(BMSC)中,通过荧光显微镜观察确定重组质粒在山羊BMSC内的表达和定位。

关键词：山羊 dazl基因序列分析真核表达骨髓间充质干细胞

牦牛dazl基因编码区的克隆和序列特征与进化分析

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南京农业大学学报 2010年第3期33卷 109-114页

作者：李新福谢元澄张庆波赵兴波顾垚朱翔谢庄李齐发南京农业大学动物科技学院江苏南京210095 南京农业大学信息科技学院江苏南京210095 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京100193

根据黄牛dazl基因序列设计引物,通过PCR扩增和克隆测序获得牦牛睾丸组织dazl基因编码区序列,利用生物信息学软件分析牦牛dazl基因编码区序列结构以及与其他物种的系统发育关系。结果表明:牦牛dazl基因cDNA序列长度为1 782 bp,编码区全长... 详细信息

根据黄牛dazl基因序列设计引物,通过PCR扩增和克隆测序获得牦牛睾丸组织dazl基因编码区序列,利用生物信息学软件分析牦牛dazl基因编码区序列结构以及与其他物种的系统发育关系。结果表明:牦牛dazl基因cDNA序列长度为1 782 bp,编码区全长885 bp,编码295个氨基酸,与黄牛的氨基酸序列同源性为98.31%;牦牛dazl蛋白含有DAZ基因家族所具有的典型的RNA结合域和DAZ重复基序。系统发育分析显示:牦牛与黄牛首先聚为一类,然后与哺乳纲的其他物种相聚,而与鱼纲、爬行纲动物的亲缘关系最远。

关键词：牦牛 dazl基因编码区序列分析系统发育

小鼠dazl基因真核表达载体的构建及表达检测

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华北农学报 2014年第B12期29卷 35-39页

作者：孙星虹孙晓凤孙雷雷李兰青岛农业大学山东省高校动物生殖与种质创新重点实验室山东青岛266109 青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 青岛农业大学生命科学学院山东青岛266109 中国共产党潍坊市坊子区委党校山东潍坊261200

为研究小鼠dazl基因的功能及探究dazl基因过表达在干细胞向生殖细胞分化过程中的作用,采用RTPCR方法,从13.5 dpc雌性胎鼠卵巢中克隆出dazl基因的全部编码区,测序正确后利用限制性内切酶将其连接到真核表达载体pc DNA3.1上。线性化后对... 详细信息

为研究小鼠dazl基因的功能及探究dazl基因过表达在干细胞向生殖细胞分化过程中的作用,采用RTPCR方法,从13.5 dpc雌性胎鼠卵巢中克隆出dazl基因的全部编码区,测序正确后利用限制性内切酶将其连接到真核表达载体pc DNA3.1上。线性化后对小鼠成纤维细胞进行转染,qRT-PCR及Western Blot技术显示外源基因dazl已经成功转染并表达。为研究dazl基因的功能及干细胞向生殖细胞的诱导分化奠定了基础。

关键词： dazl基因真核表达载体转染

小鼠dazl基因融合蛋白表达载体的构建及转染

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中国兽医学报 2013年第2期33卷 236-240页

作者：王龙周莹胡玥于萌白耀富华进联西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心农业部动物生物技术重点开放性实验室陕西杨凌712100 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

根据NCBI数据库上公布的小鼠dazl基因的mRNA序列设计引物,以小鼠睾丸组织RNA为模板,RT-PCR扩增小鼠dazl基因编码区片段,并将其克隆到增强型绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1中,构建重组融合蛋白表达载体pEGFP-C1-dazl,单双酶切和测序验证... 详细信息

根据NCBI数据库上公布的小鼠dazl基因的mRNA序列设计引物,以小鼠睾丸组织RNA为模板,RT-PCR扩增小鼠dazl基因编码区片段,并将其克隆到增强型绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1中,构建重组融合蛋白表达载体pEGFP-C1-dazl,单双酶切和测序验证正确。将pEGFP-C1-dazl质粒转染293和NIH-3T3细胞,荧光显微镜下观察到融合表达的绿色荧光蛋白,且呈胞质表达;对照组转染pEGFP-C1,绿色荧光遍布整个细胞。dazl蛋白的免疫荧光试验也证明重组载体转染后,dazl基因和GFP共同定位于胞质部分。pEGFP-C1-dazl融合蛋白表达载体的成功构建为进一步研究生殖特异性基因dazl在小鼠和大型动物的表达特性奠定了一定的基础。

关键词：小鼠生殖细胞 dazl基因绿色荧光蛋白

利用液相芯片技术研究dazl基因单核苷酸多态性与男性不育关系

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四川大学学报（医学版） 2009年第6期40卷 1135-1138页

作者：王欢丁显平朱一剑张敏四川大学生命科学学院遗传医学研究所生物资源与生态环境教育部重点实验室成都610064

目的建立液相芯片检测dazl基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的方法,并探讨该基因SNP与男性不育的相关性。方法实验分为由无精症和严重少精症组成的病例组与健康自愿者组成的对照组,基于Luminex技术平台,应用等... 详细信息

目的建立液相芯片检测dazl基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的方法,并探讨该基因SNP与男性不育的相关性。方法实验分为由无精症和严重少精症组成的病例组与健康自愿者组成的对照组,基于Luminex技术平台,应用等位基因特异性延伸反应(allele specific pri mer extension,ASPE),研究dazl基因SNP260A→G和SNP386A→G的突变情况。结果196例病例中SNP260A→G和SNP386A→G突变分别为6例(3.06%)和4例(2.04%),40例对照组中只有1例(2.5%)SNP260A→G突变,没有发现SNP386A→G突变。所有突变均为突变纯合体,且没有发现同时存在两个突变的标本。两个位点的突变频率在病例组和对照组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论成功建立并应用液相芯片检测单核苷酸多态性的方法;dazl基因SNP260A→G和SNP386A→G突变与成都地区男性不育没有明显相关性。

关键词：液相芯片单核苷酸多态性等位基因特异性延伸反应 dazl基因