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作者：白梅中国医科大学

学位级别：硕士

前言短串联重复序列(short tandem repeats,sTR)又称微卫星dNA(mierosatellite),是指重复单位只有1～6bp、重复次数一般在数次至几十次之间的串联重复dNA序列。sTR在人类基因组中分布广泛、数量较多、等位基因片段长度较短、扩增成功率... 详细信息

前言短串联重复序列(short tandem repeats,sTR)又称微卫星dNA(mierosatellite),是指重复单位只有1～6bp、重复次数一般在数次至几十次之间的串联重复dNA序列。sTR在人类基因组中分布广泛、数量较多、等位基因片段长度较短、扩增成功率高,是目前法医物证鉴定中应用最广泛的dNA长度多态性遗传标记。然而,对于毛发等富含角化细胞的特殊法医物证检材,由于其细胞核发生明显的转移,核基因组dNA含量少且分解严重,常规方法检测法医物证鉴定中最常用的四核苷酸sTR基因座时,常难以获得满意的结果。线粒体dNA(mitochondrialdNA,mtdNA)检测作为法医学应用序列多态性分析进行个人识别的典型实例,在毛发等非常规检材的鉴定中具有重要的实用价值。但mtdNA特殊的遗传特征、突变率较高、信息量较低、检测技术复杂等因素的影响,在一定程度上限制了mtdNA的法医学应用。因此,选择多态性程度较高且等位基因片段更短,适用于毛发等检材dNA多态性分析的遗传标记,是法医物证工作者共同关心的课题。d17s518基因座位于人类第17号染色体上,是由(CA)n核心序列构成的二核苷酸简单串联重复序列。本研究首先应用PCR扩增结合聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的方法,调查d17s518基因座在辽宁汉族人群中的频率分布,以评估该遗传标记的法医学应用价值,并对其应用于毛发检材的可行性及影响因素进行了初步研究,为该基因座在更广泛领域的应用奠定了基础。材料与方法根据文献合成特异性扩增d17s518基因座的引物,应用PCR技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳分离结合银染显谱的方法,对120例中国辽宁地区无血缘关系的汉族个体血液样本进行d17s518基因座分型,并通过dNA序列分析确定其等位基因;对采用不同方法(酚/氯仿法和Chelex—100法)提取dNA,不同数量(1根、2根和5根)和不同区段(远段、中段和近段)毛发检材的d17s518基因座扩增结果进行比较。结果在120例中国辽宁地区无血缘关系汉族个体中,检出d17s518基因座的5种等位基因及12个基因型,根据dNA序列分析结果将扩增片段长度为88bp、90bp、94 bp、98 bp、100 bp的5种等位基因分别命名为d17s518*15、d17s518*16、d17s518*18、d17s518*20和d17s518*21。12种基因型及频率分别为:15/15为12例(10%),16/16为13例(10.7%),18/1 8为3例(2.5%),15/16为21例(17.5%),15/18为23例(19.2%),15/20为6例(5%),15/21为2例(1.7%),16/18为20例(16.7%),16/20为8例(6.7%),16/21为5例(4.2%),18/20为4例(3.3%),18/21为3例(2.5%);5种等位基因频率分别为:d17s518*15=0.317、d17s518*16=0.333、d17s518*18=0.233、d17s518*20=0.075、d17s518*21=0.042。应用Powerstatsvl2软件对d17s518基因座群体调查结果进行数据分析,获得如下法医学应用参数:杂合度(H)为0.767,个人识别几率(dP)为0.872,偶合几率(Pm)为0.128,非父排除率(PE)为0.539,多态信息含量(PIC)为0.68。6个个体毛发检材的d17s518基因座扩增产物检测结果:①采用酚/氯仿方法提取模板dNA,其扩增产物检出率随毛发数量的增加而提高,即1根为2/6、2根为4/6、5根为5/6;而采用Chelex-100法提取模板dNA的毛发检材均未检出扩增产物。②同一毛发不同区段的扩增产物检出结果不同;不同毛发中、远段部分扩增产物检出规律不同,但近段毛发均可检出扩增产物。结论1、d17s518基因座在中国辽宁地区汉族群体中具有良好的多态性分布,在法医学上具有较高的应用价值。2、二核苷酸简单串联重复序列的sTR基因座适用于毛发等非常规法医物证检材的dNA多态性分析。3、酚/氯仿法提取毛干dNA的扩增效果明显优于Chelex-100法。

关键词：二核苷酸简单串联重复顺序 d17s518 PCR-sTR 毛发检材辽宁汉族

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中国辽宁汉族人群d17s518基因座多态性分析

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交通医学 2012年第6期26卷 533-535,538页

作者：冯春梅白梅牡丹江医学院生物技术实验室黑龙江157011

目的:调查d17s518基因座在辽宁汉族人群中的频率分布,并为法医学亲子鉴定和个人识别提供基础数据。方法:应用聚合酶链式反应(PCR)、聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染显带技术,对中国辽宁省无血缘关系的汉族个体120例血液样本进行d17s518基因座... 详细信息

目的:调查d17s518基因座在辽宁汉族人群中的频率分布,并为法医学亲子鉴定和个人识别提供基础数据。方法:应用聚合酶链式反应(PCR)、聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染显带技术,对中国辽宁省无血缘关系的汉族个体120例血液样本进行d17s518基因座分型。通过dNA序列分析确定其等位基因,并计算相关法医学参数。结果:在无血缘关系汉族个体120例中,检出d17s518基因座的5种等位基因及12种基因型。(1)根据dNA序列分析结果,将扩增片段长度为88bp、90bp、94 bp、98 bp、100 bp的5种等位基因分别命名为d17s518*15、d17s518*16、d17s518*18、d17s518*20和d17s518*21。(2)12种基因型及频率分别为:15/15型为12例(10%),16/16型为13例(10.7%),18/18型为3例(2.5%),15/16型为21例(17.5%),15/18型为23例(19.2%),15/20型为6例(5%),15/21型为2例(1.7%),16/18型为20例(16.7%),16/20型为8例(6.7%),16/21型为5例(4.2%),18/20型为4例(3.3%),18/21型为3例(2.5%)。(3)5种等位基因频率分别为:d17s518*15=0.317、d17s518*16=0.333、d17s518*18=0.233、d17s518*20=0.075、d17s518*21=0.042。(4)对d17s518基因座群体行数据分析,获得法医学应用参数:杂合度(H)为0.767,个人识别几率(dP)为0.872,偶合几率(Pm)为0.128,非父排除率(PE)为0.539,多态信息含量(PIC)为0.68。结论:d17s518基因座在中国辽宁省地区汉族群体中具有良好的多态性分布,有较高的遗传多态性,在法医学上具有较高的应用价值。

关键词：二核苷酸简单串联重复顺序 d17s518 短串联重复序列-聚合酶链反应中国辽宁汉族人群

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