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水稻d1基因新等位突变的鉴定与功能分析

中国水稻科学 2023年

作者：高郡茹权弘羽袁刘珍李钦颖乔磊李文强西北农林科技大学生命科学学院

【目的】株高是作物重要的农艺性状，挖掘株高控制基因并解析其分子功能，可为作物高产育种提供更多有用的基因资源。【方法】利用EMS诱变水稻日本晴获得的矮化突变体d1-11为材料，进行表型和细胞学观察，通过图位克隆的方法鉴定d1-11... 详细信息

【目的】株高是作物重要的农艺性状，挖掘株高控制基因并解析其分子功能，可为作物高产育种提供更多有用的基因资源。【方法】利用EMS诱变水稻日本晴获得的矮化突变体d1-11为材料，进行表型和细胞学观察，通过图位克隆的方法鉴定d1-11基因并对基因表达、激素含量和抗旱性进行了分析。【结果】 d1-11突变体表现为植株矮化、叶片变短变宽和籽粒形态变圆表型；d1-11突变体叶片中脉萎缩、大脉和小脉数量和面积减少，导致d1-11突变体叶形态变异。d1-11基因被定位到水稻第5号染色体R5M15.2和R5M15.8两个分子标记之间；图位克隆表明d1-11突变体中d1基因第11外显子和内含子交界处单碱基替换导致基因功能缺失。d1基因在苗期各组织中表达量较高，从分蘖期开始表达量降低；外源脱落酸 (ABA) 处理24小时后诱导d1基因表达，外源赤霉素 (GA) 处理抑制d1基因表达，盐胁迫处理24小时诱导d1基因剧烈上调表达。d1-11突变体植株GA、油菜素内酯 (BR) 和生长素 (IAA) 等激素含量均上升，叶片相对含水量上升、叶片失水速率降低，植株对干旱胁迫抗性显著增强。【结论】鉴定到水稻d1基因新等位突变d1-11，发现d1-11突变体多种内源激素水平上升、叶含水量增加、植株对干旱胁迫抗性增强。本研究进一步丰富了水稻矮化基因资源并揭示d1基因新的生物学功能。

关键词：株高矮化 d1基因 d1-11突变体植物激素干旱胁迫

BP1基因和Cyclin d1基因在乳腺癌组织中的表达及意义

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癌症 2007年第7期26卷 709-714页

作者：宋永春傅四东温小鹏马振华党诚学西安交通大学医学院第一附属医院肿瘤外科陕西西安710061 乔治华盛顿大学生物化学和分子生物学中心美国华盛顿20037 西安交通大学医学院第一附属医院肝胆外科陕西西安710061

背景与目的:BP1基因是新近发现的转录因子,属于同源盒基因的dLX家族。近年来的国内外研究显示BP1基因与人乳腺癌的发病密切相关。目前BP1基因与细胞周期控制因子之间的关系未见进一步的研究报道。本研究拟观察人乳腺癌组织中BP1的表达... 详细信息

背景与目的:BP1基因是新近发现的转录因子,属于同源盒基因的dLX家族。近年来的国内外研究显示BP1基因与人乳腺癌的发病密切相关。目前BP1基因与细胞周期控制因子之间的关系未见进一步的研究报道。本研究拟观察人乳腺癌组织中BP1的表达情况以及BP1与Cyclin d1表达的关系。方法:收集86例乳腺癌组织和20例癌旁组织,用RT-PCR的方法检测乳腺癌组织和癌旁组织中BP1 mRNA表达的情况。合成BP1多抗,用Western blot方法验证BP1多抗的效果,并检测86例乳腺癌组织中BP1和Cyclin d1免疫组化的情况及BP1蛋白和Cyclin d1蛋白有无共表达。结果:86例乳腺癌组织中,60例呈BP1 mRNA阳性(69.8%)。20例癌旁组织中BP1 mRNA均为阴性。乳腺癌组织中BP1 mRNA表达明显高于癌旁组织(P=0.000)。在86例乳腺癌组织中,Cyclin d1 mRNA表达率为64.0%(55/86),与BP1 mRNA共阳性的有52例,共阴性的有23例,BP1 mRNA和Cyclin d1 mRNA存在共表达(P=0.277)。另外,在86例乳腺癌组织免疫组化检测中,43例呈BP1和Cyclin d1共阳性表达,31例呈BP1和Cyclin d1共阴性。经配对χ2检验显示,Cyclin d1与BP1也存在共表达(P=0.146)。结论:BP1基因在人乳腺癌组织中有较高的表达率,BP1基因和Cyclin d1基因在人乳腺癌组织中有共表达。BP1基因可能是通过调节细胞周期控制因子Cyclin d1导致乳腺癌发生的。

关键词：乳腺肿瘤 BPl基因 Cyclin d1基因基因表达逆转录聚合酶链反应免疫组化

反义细胞周期素d1基因对肝癌细胞株HepG2的作用

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中华肝脏病杂志 2005年第10期13卷 768-771页

作者：肖震宇陈孝平黄志勇华中科技大学同济医学院附属同济医院肝脏外科中心武汉430030

目的通过基因反义封闭技术体外抑制细胞周期素d1(cyclin d1)的表达,研究其对肝癌细胞cyclin d1蛋白表达和细胞增殖的影响。方法以肝癌细胞株HepG2为研究对象,通过转染可表达cyclin d1反义互补脱氧核苷酸(AScdNA)的质粒后,观察cyclin d1... 详细信息

目的通过基因反义封闭技术体外抑制细胞周期素d1(cyclin d1)的表达,研究其对肝癌细胞cyclin d1蛋白表达和细胞增殖的影响。方法以肝癌细胞株HepG2为研究对象,通过转染可表达cyclin d1反义互补脱氧核苷酸(AScdNA)的质粒后,观察cyclin d1反义cdNA对HepG2细胞cyclin d1基因表达及体外增殖活性的影响。结果四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖活性显示转染表达反义cyclin d1的质粒后, HepG2细胞的增殖受到抑制,抑制作用在48 h左右最强;逆转录聚合酶链反应检测显示cyclin d1 mRNA基因的表达明显被抑制;免疫组织化学检测结果显示cyclin d1蛋白表达明显降低; 流式细胞仪检测结果显示G0/G1期的细胞比例增高,G2+M和S期的细胞比例下降,HepG2细胞周期在G1期被阻滞。结论cyclin d1反义cdNA可以特异性的抑制肝癌HepG2细胞株cyclin d1蛋白的表达,从而调控细胞周期,抑制肝癌细胞增殖。利用cyclin d1反义cdNA进行细胞周期调控对于肝细胞癌的生物治疗具有一定的应用前景。

关键词：癌,肝细胞细胞周期素d1 反义互补脱氧核苷酸肝癌细胞株肝癌细胞株HepG2 反义cdNA 细胞周期素 d1基因 cyclin 聚合酶链反应检测

儿童急性白血病survivin、cyclin d1基因的表达

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临床儿科杂志 2007年第7期25卷 570-573页

作者：谭丽珍刘壮广西柳州中医院肿瘤科广西柳州545001 广西医科大学第一附属医院儿科广西南宁530021

目的探讨基因survivin、cyclin d1的表达与儿童急性白血病(AL)的关系。方法采用RT-PCR方法对42例初发或复发AL患儿和13例完全缓解AL(AL-CR)患儿及15例非恶性疾病患儿骨髓单个核细胞进行基因survivin、cyclind1表达的检测。结果①AL组sur... 详细信息

目的探讨基因survivin、cyclin d1的表达与儿童急性白血病(AL)的关系。方法采用RT-PCR方法对42例初发或复发AL患儿和13例完全缓解AL(AL-CR)患儿及15例非恶性疾病患儿骨髓单个核细胞进行基因survivin、cyclind1表达的检测。结果①AL组survivin、cyclind1mRNA的阳性率分别为78.6%和42.9%,高于AL-CR组和对照组(Pd1 mRNA阳性率明显高于初发组。②儿童AL初发者survivin与cyclin d1的阳性表达差异无统计学意义。③cyclin d1 mRNA阳性者缓解率低。结论儿童AL中存在survivin、cyclin d1异常表达,两者阳性表达差异无统计学意义;cyclin d1高表达者可降低AL的化疗敏感性,cyclin d1对AL有判断疗效和预后的价值。

关键词：急性白血病 survivin基因 cyclin d1基因逆转录多聚酶链反应

RNA干扰沉默Cyclin d1基因对胰腺癌AsPC-1细胞增殖和凋亡的影响

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山东医药 2011年第43期51卷 20-22页

作者：肖卫东李勇李学明蔡军邓君曾林山胡伟南昌大学第一附属医院南昌330006

目的探讨以细胞周期蛋白(Cyclin)d1为靶基因的RNA干扰对胰腺癌AsPC-1细胞增殖和凋亡的影响,为胰腺癌的靶向治疗提供依据。方法用含有10%FBS的dMEM培养液在37℃、5%CO2培养箱中常规培养AsPC-1细胞,至对数生长期后接种于96孔培养板中,随... 详细信息

目的探讨以细胞周期蛋白(Cyclin)d1为靶基因的RNA干扰对胰腺癌AsPC-1细胞增殖和凋亡的影响,为胰腺癌的靶向治疗提供依据。方法用含有10%FBS的dMEM培养液在37℃、5%CO2培养箱中常规培养AsPC-1细胞,至对数生长期后接种于96孔培养板中,随机分为实验组、阴性对照组、空白对照组,并采用Lipo-fectamineTM2000脂质体分别转染Cyclin d1-小干扰RNA(siRNA)、阴性对照siRNA、脂质体4,8 h时收集细胞。应用荧光定量PCR法和Western blot法分别检测细胞中Cyclin d1 mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测细胞体外增殖活力,流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡率(AI)。结果与空白对照组和阴性对照组相比,实验组Cyclin d1 mR-NA和蛋白表达均明显下调,细胞生长速度明显减慢,G0/G1细胞比例显著增大、S期细胞比例则明显降低、AI显著升高(P均d1-siRNA能通过沉默靶基因表达抑制AsPC-1细胞生长、改变细胞周期分布、诱导细胞凋亡,可作为胰腺癌基因治疗的一个有效靶点。

关键词：胰腺肿瘤,胰腺癌 Cyclin d1基因 RNA干扰细胞增殖细胞凋亡

RNA干扰靶向cyclin d1基因对K562细胞化疗增敏的研究

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国际医药卫生导报 2007年第9期13卷 14-21页

作者：万一元曹小龙姜文奇广州市番禺区人民医院肿瘤科广东广州511400 中山大学肿瘤防治中心内科广东广州510060

目的cyclind1基因在细胞周期调控中起关键性作用。研究表明其过表达与肿瘤的发生、发展及预后密切相关；并且与肿瘤细胞对化疗药物抗拒性有关。抑制CYClind1蛋白表达可达到化疗增敏作用。本研究利用RNA干扰（RNAi）技术体外观测其对K56... 详细信息

目的cyclind1基因在细胞周期调控中起关键性作用。研究表明其过表达与肿瘤的发生、发展及预后密切相关；并且与肿瘤细胞对化疗药物抗拒性有关。抑制CYClind1蛋白表达可达到化疗增敏作用。本研究利用RNA干扰（RNAi）技术体外观测其对K562细胞cyclind1基因的沉默效应及增强阿霉素（AdM）对K562细胞毒性作用。方法体外构建靶向cyclind1基因的小发夹RNA（shRNA）表达质粒，通过壳聚糖介导转染K562细胞，Westernblot分析检测转染前后Cyclind1蛋白表达变化，流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡率的影响以及MTT法检测K562细胞对AdM敏感性的变化。结果构建靶向cyclind1基因的ShRNA表达质粒（pshRNA-419和PshRNA-575）经壳聚糖转染后，能显著抑制cyclind1基因表达；影响K562细胞周期分布，诱导细胞凋亡，并降低AdM半数抑制浓度，提高了化疗敏感性。而设计一碱基突变的序列所构建的质粒并无上述生物学效应。结论沉默K562细胞cyclind1基因表达可达到有效的化疗增敏目的。

关键词： cyclin d1基因 RNA干扰小发夹RNA K562细胞化疗敏感性

Cyclin d1基因沉默对K562细胞增殖及凋亡的影响

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肿瘤学杂志 2008年第1期14卷 48-52页

作者：万一元刘扬清陈小飞姜文奇南京医科大学附属淮安第一医院江苏淮安223300 中山大学肿瘤防治中心广东广州510060

[目的]利用RNA干扰(RNAi)技术观测其对白血病K562细胞cyclin d1基因的沉默效应及对细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。[方法]体外构建靶向cyclin d1基因的小发夹RNA(shRNA)表达质粒,通过壳聚糖介导转染K562细胞,Western blot分析检测转... 详细信息

[目的]利用RNA干扰(RNAi)技术观测其对白血病K562细胞cyclin d1基因的沉默效应及对细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。[方法]体外构建靶向cyclin d1基因的小发夹RNA(shRNA)表达质粒,通过壳聚糖介导转染K562细胞,Western blot分析检测转染前后cyclin d1蛋白表达变化;集落形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡情况。[结果]构建靶向cyclin d1基因的shRNA表达质粒(pshRNA-419和pshRNA-575)经壳聚糖转染后,能显著抑制cyclin d1基因表达;抑制K562细胞增殖,影响其集落形成能力;细胞阻滞于G0/G1期,细胞凋亡明显。而m-pshRNA-790质粒并无上述生物学效应。[结论]cyclin d1基因表达下调可抑制K562细胞生长,影响细胞周期分布,并诱导细胞凋亡。提示cyclin d1基因可能是白血病治疗的一个有效靶点。

关键词： cyclin d1基因 K562细胞细胞周期凋亡 RNA干扰小发夹RNA

RNA干扰靶向cyclin d1基因对K562细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响

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中国基层医药 2007年第7期14卷 1145-1147页

作者：万一元曹小龙姜文奇广州市番禺区人民医院肿瘤科广东省广州511400 中山大学肿瘤防治中心内科

目的利用 RNA 干扰(RNAi)技术体外观测其对 K562细胞 cyclin d1基因的沉默效应及对细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法通过壳聚糖介导转染 K562细胞,Western blot 分析检测转染前后Cyclin d1蛋白表达变化;集落形成实验检测细胞增殖能... 详细信息

目的利用 RNA 干扰(RNAi)技术体外观测其对 K562细胞 cyclin d1基因的沉默效应及对细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法通过壳聚糖介导转染 K562细胞,Western blot 分析检测转染前后Cyclin d1蛋白表达变化;集落形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡率的影响。结果构建靶向 cyclin d1基因的 shRNA 表达质粒(pshRNA-419和 pshRNA-575)经壳聚糖转染后,能显著抑制 cyclin d1基因表达;抑制 K562细胞增殖,影响其集落形成能力;影响 K562细胞周期分布,诱导细胞凋亡。而设计一碱基突变的序列所构建的质粒并无上述生物学效应。结论 cyclin d1基因表达下调可抑制 K562细胞生长,并诱导细胞凋亡。提示 cyclin d1基因可能是白血病治疗的一个有效靶点的。

关键词： cyclin d1基因 K562细胞细胞周期凋亡 RNA干扰小发夹RNA

P16、Rb及cyclin d1基因在骨肉瘤和一些良性骨肿瘤中的表达及其意义

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世界今日医学杂志 2000年第3期1卷 201-204页

作者：沈为栋李康华陈曼娜黎岳南沈明廖金辉湖南省岳阳市一人民医院骨科414000 湖南医科大学湘雅医院

目的探讨P16、Rb及cyclin d1基因在骨肉瘤和一些良性骨肿瘤中的表达及其相关性。方法采用免疫组织化学技术(S-P法)对47例人骨肉瘤及18例良性骨肿瘤组织标本分别进行P16、Rb及cyclin d1蛋白表达检测。结果①骨肉瘤组织中，Rb蛋白表达水... 详细信息

目的探讨P16、Rb及cyclin d1基因在骨肉瘤和一些良性骨肿瘤中的表达及其相关性。方法采用免疫组织化学技术(S-P法)对47例人骨肉瘤及18例良性骨肿瘤组织标本分别进行P16、Rb及cyclin d1蛋白表达检测。结果①骨肉瘤组织中，Rb蛋白表达水平低于良性骨肿瘤(Pd1在骨肉瘤中呈高表达，与良性骨肿瘤比较有显著性差异(P0．05)；④上述三种基因蛋白在骨肉瘤不同病理分型中的表达无明显差异(P>0．05)；Rb蛋白的表达在骨肉瘤临床分期的ⅡA与Ⅲ期之间，有显著差异(Pd1之间存在负相关系(rs=-0．468，Pd1在骨肉瘤中呈高表达，提示cyclin d1与骨肉瘤的发生有关系，为癌基因研究提供了新的线索；②发现P16与cyclin d1之间存在负相关关系，提示P16与cyclin d1可能共同参与骨肉瘤的发生、发展，为骨肉瘤发病机理研究提供了重要线索；③发现Rb基因可能与骨肉瘤的转移有关；④Rb蛋白的表达水平，与其他学者的研究结果一致，可望作为骨肉瘤与良性骨肿瘤的诊断和鉴别诊断的参考指标。

关键词：骨肉瘤良性骨肿瘤高表达 d1基因 Rb蛋白表达水平免疫组织化学技术