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肝癌细胞H22培养上清液对鼠细胞L929细胞周期、CyclinD1、P27蛋白表达的影响

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郑州大学学报（医学版） 2008年第1期43卷 144-146页

作者：张晓艳付旭东汤为学郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450001 郑州大学第五附属医院神经外科郑州450052 重庆医科大学病理生理学教研室重庆450016

目的:探讨小鼠肝癌细胞H22培养上清液对鼠L929细胞细胞周期、CyclinD1、P27蛋白表达的影响。方法:采用肝癌细胞H22的培养上清液诱导正常成纤维细胞L929,诱导细胞为L929-H22。采用流式细胞术检测L929细胞与L929-H22细胞细胞周期分布,免... 详细信息

目的:探讨小鼠肝癌细胞H22培养上清液对鼠L929细胞细胞周期、CyclinD1、P27蛋白表达的影响。方法:采用肝癌细胞H22的培养上清液诱导正常成纤维细胞L929,诱导细胞为L929-H22。采用流式细胞术检测L929细胞与L929-H22细胞细胞周期分布,免疫细胞化学方法检测2种细胞中CyclinD1、P27蛋白的表达。结果:与L929相比,L929-H22G0/G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例明显增加(P1的表达增强(P<0.05),P27的表达减弱(P<0.05)。结论:小鼠肝癌细胞培养上清液诱导的细胞CyclinDl、P27的表达及细胞周期分布与正常细胞不同,CyclinDl表达增强和P27表达减弱可能在细胞恶性转化过程中发挥作用。

关键词：肝癌细胞H22 培养上清液诱导 cyelind1 P27 细胞周期成纤维细胞L929

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中国麻风皮肤病杂志 2004年第2期20卷 122-125页

作者：孙莉李新功徐志秀许金萍吴起嵩胜利石油管理局中心医院皮肤科山东东营257034

目的 :　探讨HPV16 18阳性的尖锐湿疣DNA倍体和cyclinD1、P5 3、P2 1WAF1 蛋白表达的改变。方法 :　使用组织芯片技术和DNA计算机图像分析方法观察 2 2 7例外阴尖锐湿疣和 2 1例外阴鳞状细胞癌的DNA倍体类型 ,并进行cyclinD1、P5 3、P2... 详细信息

目的 :　探讨HPV16 18阳性的尖锐湿疣DNA倍体和cyclinD1、P5 3、P2 1WAF1 蛋白表达的改变。方法 :　使用组织芯片技术和DNA计算机图像分析方法观察 2 2 7例外阴尖锐湿疣和 2 1例外阴鳞状细胞癌的DNA倍体类型 ,并进行cyclinD1、P5 3、P2 1WAF1 免疫组化研究。结果 :　HPV 16 18阳性外阴尖锐湿疣 2C细胞占 (4 4 .36± 6 .6 6 ) % ,3C～ 4C占 (37.72± 8.4 3) % ,5C占 (15 .2 1± 6 .33) % ,>5C占 (2 .71± 1.0 4 ) %。 98例HPV16 18阳性尖锐湿疣中 ,cyclinD1、P5 3、P2 1WAF1 阳性者分别为 39例 (39.80 % )、5 2例 (5 3.0 6 % )、4 7例(4 7.96 % )。HPV 16 18阳性外阴尖锐湿疣与阴性者差异有显著性 (P 1)。结论 :　HPV16 18阳性外阴尖锐湿疣DNA倍体图像分析显示高度增殖活性 ,cyclinD1、P5 3高表达 ,P2 1WAF1

关键词：组织芯片 HPV16 HPV18 外阴尖锐湿疣 DNA倍体类型 cyelind1 P53 P21^WAF1

肾透明细胞癌Survivin表达及其与Bcl-2、CyclinD1表达相关性的研究

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肾透明细胞癌Survivin表达及其与Bcl-2、CyclinD1表达相关性的研究

作者：朱李兵第四军医大学

学位级别：硕士

肾透明细胞癌(RCCC)是泌尿系统常见的恶性肿瘤，恶性程度较高，对放、化疗都不敏感。手术是目前临床最好的治疗方法，但由于其早期没有特异性临床症状，发现的基本都是中晚期，转移的较多，造成治疗效果不理想。所以研究寻找RCCC新的分... 详细信息

肾透明细胞癌(RCCC)是泌尿系统常见的恶性肿瘤，恶性程度较高，对放、化疗都不敏感。手术是目前临床最好的治疗方法，但由于其早期没有特异性临床症状，发现的基本都是中晚期，转移的较多，造成治疗效果不理想。所以研究寻找RCCC新的分子生物学标志，对于及早诊断和治疗RCCC具有重要的临床指导意义。Survivin是近年来新发现的凋亡蛋白抑制因子，是迄今发现作用最强的凋亡抑制蛋白之一，本研究旨在探讨Survivin在肾透明细胞癌中的表达情况及其与肾透明细胞癌生物学特性的关系，同时探讨其与Bcl-2、CyclinD1的相关性，为RCCC的诊治提供依据。方法收集61例肾透明细胞癌组织及10例正常肾组织，以半定量RT-PCR方法，检测了其中32例肾透明细胞癌中Survivin mRNA表达水平;以免疫组织化学方法检测61例肾透明细胞癌中Survivin、Bcl-2、CyclinD1蛋白表达，与正常肾组织进行比较，分析其与肿瘤的大小、病理分级、临床分期、有无淋巴结转移等临床病理特征之间的关系，同时分析Survivin表达与Bcl-2、CyclinD1表达的相关性。结果 RT-PCR检测结果显示，32例肾透明细胞癌组织中，Survivin表达的有18例，占56.25％。免疫组化染色结果显示肾透明细胞癌组织中Survivin、Bcl-2和CyclinD1的阳性表达率分别为62.3％(38／61)、45.9％(28／61)和65.6％

关键词：肾透明细胞癌凋亡 Survivin Bcl-2 cyelind1

β-catenin,CyclinD1和C-myc在甲状腺肿瘤中的表达及意义

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β-catenin,CyclinD1和C-myc在甲状腺肿瘤中的表达及意义

作者：安兆峰郑州大学

学位级别：硕士

甲状腺癌是最常见的甲状腺恶性肿瘤，约占全身恶性肿瘤的1％，在癌症死亡病例中约占0.5％。分化型甲状腺癌(Differentiated thyroid careinoma，DTC)包括乳头状甲状腺癌(Papillary thyroid carcinoma，PTC)和滤泡状甲状腺癌(Follicular ... 详细信息

甲状腺癌是最常见的甲状腺恶性肿瘤，约占全身恶性肿瘤的1％，在癌症死亡病例中约占0.5％。分化型甲状腺癌(Differentiated thyroid careinoma，DTC)包括乳头状甲状腺癌(Papillary thyroid carcinoma，PTC)和滤泡状甲状腺癌(Follicular thyroid carcinoma，FTC)，两者约占甲状腺癌总数的80％～90％，如早期予以手术治疗，5年生存率可高达75％以上，这说明了甲状腺癌早期确诊的重要性。随着对甲状腺癌认识的深入和诊断技术的改进，甲状腺恶性肿瘤的发生率近年已呈上升趋势。因此，探讨甲状腺癌的发生发展、浸润和转移的机制具有重要的基础和临床意义。肿瘤的发生发展是一个多因素作用、多基因参与、经过多个阶段才最终形成的极其复杂的生物学现象。已知许多细胞间的信息传递分子参与该过程，而近年来细胞信号转导中的一些分子与肿瘤发生发展等的关系的发现使该领域的研究更加活跃。Wnt信号转导通路是近年来才逐渐被人们认识的一类调控细胞生长、发育和分化的重要途径，其异常激活与肿瘤发生密切相关。癌基因或抑癌基因的突变均可导致正常调控细胞增生的调节途径不恰当的活化，使细胞增生失控而至肿瘤形成，已发现Wnt信号途径的成分在多种人的癌症中发生突变，如肿瘤抑制基因APC失活突变或β-catenin突变等因素均可促进该通路异常激活，使细胞无力调节β-catenin的恰当水平，引起胞浆游离β-catenin浓度升高并进入胞核内，促进下游靶基因c-myc和cyclinD1等的转录，引起细胞增殖，分化失控，郑州大学2004届硕卜毕业论文卜eatenin，。yelinol和e一mye在甲状腺肿瘤中的表达及意义导致肿瘤的发生。其中p一catenin是Wnt信号转导通路的关键调控点，其在肿瘤发生中的作用倍受关注。另外，p一catenin也是构成勃附连接的E一cad/cat复合体的胞内重要组分，E一Cad/cat复合体对于上皮极性、完整性的维持具有及其重要的作用，而p一catenin异常导致整个复合体结构与功能异常，在肿瘤浸润转移过程中发挥重要作用。目前，对于甲状腺癌的发生发展及转移机制的认识尚不充分，探讨p一catenin，CyClinDI和C一myc在甲状腺癌中的表达及其关系，有助于揭示甲状腺癌发生、发展及转移机制，为抑制甲状腺癌的发生发展及转移，使肿瘤局限以利于肿瘤的手术切除以及基因治疗提供理论依据。本研究应用免疫组化技术检测了p一catenin、cyclinDI和c一myc在腺瘤旁正常甲状腺组织、甲状腺腺瘤和分化型甲状腺癌中的表达，旨在探讨其在甲状腺癌发生发展中的作用及三者间的关系，为临床诊断、治疗该病提供理论依据。材料与方法:本研究收集1 996一1999年郑州大学第一附属医院病理科以及1999～2002年郑州市铁路中心医院病理科存档腊块95例，标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，每例均有详细的临床资料，肿瘤HE切片由两位病理医师明确诊断并作组织病理分型。甲状腺滤泡状腺瘤28例，男性7例，女性21例，年龄15一80岁，平均年龄42.89士巧.27岁。分化型甲状腺癌57例，男性14例，女性43例，年龄14～70岁，平均年龄41.91士15.H岁，其中乳头状腺癌48例，滤泡状腺癌9例。全部病例术前均无化疗、放疗及免疫治疗史。按照国际抗癌协会联盟(U ICC)的TNM分期，分为I期41例，n期7例，m期9例，W期1例;有淋巴结转移21例，无淋巴结转移36例。另取腺瘤旁经病理证实的正常甲状腺组织标本10例为正常对照。采用免疫组织化学SP法染色，检测10例腺瘤旁正常甲状腺组织，28例甲状腺腺瘤和57例分化型甲状腺癌组织石蜡切片中p一eatenin、cyelindI和c一mye表达情况。统计学分析:所有资料采用SPSS10.0软件处理，以a=0.05为显著性检验水平。结果:(1)在正常甲状腺滤泡上皮细胞中，日一catenin主要定位于细胞膜，未见异常表达，eyelinDI和c一mye均为阴性。

关键词：甲状腺肿瘤 β-catenin cyelind1 c-myc 免疫组织化学

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福建省安溪县食管癌高发影响因素的研究

福建省安溪县食管癌高发影响因素的研究

作者：彭仙娥福建医科大学

学位级别：硕士

目的：初步探讨福建省安溪县食管癌高发的影响因素，为食管癌高发区制定综合防制措施提供理论的依据。方法：采用1:1配对病例对照研究方法，对237例食管癌患者及与之在年龄、性别和居住地相匹配的对照分别使用食管癌影... 详细信息

目的：初步探讨福建省安溪县食管癌高发的影响因素，为食管癌高发区制定综合防制措施提供理论的依据。方法：采用1:1配对病例对照研究方法，对237例食管癌患者及与之在年龄、性别和居住地相匹配的对照分别使用食管癌影响因素调查表和家系健康状况调查表进行问卷调查，分析安溪县食管癌高发的影响因素。同时采用免疫组化S-P法对部分调查对象的食管组织标本中的三种细胞周期G期调节因子p53、p16及CyclinD1进行检测。采用多元统计方法综合评价环境、遗传、基因这三个因素在食管癌发生过程中的作用大小及作用特点。结果： (1)1:1配对病例-对照研究的结果表明：多因素条件Logistic回归分析结果显示：食盐量、性格内向、吸烟量、一级亲属食管癌家族史、病前10～20年常食用油炸食品、红薯、腌菜是食管癌发生的危险因素，而饮茶、饮用清洁水、常吃豆制品、水果是保护因素。 (2)遗传流行病学研究的结果表明：安溪县食管癌具有家族聚集现象，根据Falconer多基因易患性阈值模型计算，安溪县食管癌一级亲属的遗传度为46.5±6.7％。同胞中食管癌的分离分析及根据Penrose法对遗传模式估计的结果均显示食管癌属于多基因疾病。功戈礴罗 (3)细胞周期G1期相关调节因子检测的结果表明:病例中p53、Cycl inDI、p16三种蛋白的异常表达率均明显高于正常对照，差别有统计学意义。 (4)遗传、基因与环境因素综合分析的结果表明:在控制基因蛋白表达的影响后，对食管癌发病有影响的因素为常吃红薯、吸烟、食管癌家族史、饮茶、常吃豆制品等，其中常吃红薯、吸烟、食管癌家族史为食管癌发生的危险因素，而饮茶、常吃豆制品为保护因素:当控制环境因素和家族史的影响后，对食管癌发病有影响的基因为p53高表达及pl6表达缺失，且二者均为危险因素，而CyclinDI对食管癌的作用不明显。 (5)影响因素之间的交互作用分析的结果表明:多个危险因素同时存在，不但可以提高患食管癌的危险，而且能拮抗饮茶的保护作用。进一步对影响因素之间的交互作用效应的分析结果表明:环境危险因素(如吸烟、常吃红薯)、食管癌家族史与易感型基因蛋白(如p53蛋白高表达、P16蛋白表达缺失)以及环境危险因素与食管癌家族史之间均存在明显的协同作用，而饮茶与p53蛋白高表达、食管癌家族史之间具有拮抗作用;没发现饮茶与P16蛋白表达缺失之间有交互作用。结论: 环境、遗传、基因三个因素在食管癌高发区安溪县起着重要的作用，多个危险因素同时存在以及基因一环境、基因一遗传、环境一遗传之间的交互作用在食管癌肿瘤的发生过程中尤为重要，因此，在制定食管癌防治措施时，应根据上述三个因素的作用特点，采取综合性的防制措施:(1)改变不良的行为习惯，调整膳食结构，平衡营养。(2)以年龄大于45 岁，并有以下特征之一者(有食管癌家族史，暴露于多个危险因素，或携带危险基因型) 作为高危人群，利用己知的保护因素(如饮茶、常吃豆制品、蔬菜水果、饮用清洁水等) 加以干预，达到降低食管癌发病的目的。(3)应用简便可靠的筛检方法和诊断方法，在高危人群中开展预防性普查，做到早发现、早诊断、早治疗，从而提高食管癌患者的生存率和生活质量。

关键词：食管癌病例对照研究危险因素遗传流行病学 p53 p16 cyelind1 交互作用

茶多酚对人肝癌细胞株SMMC-7721的生物效应

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茶多酚对人肝癌细胞株SMMC-7721的生物效应

作者：李相武南华大学

学位级别：硕士

目的: 通过茶多酚(TP)对人肝癌细胞株SMMC-7721作用,观察TP对细胞增殖影响、细胞形态学改变、细胞周期改变,确定TP对SMMC-7721细胞的剂量反应关系。 TP作用细胞后,测定细胞周期素D1(CyclinD1)蛋白表达量的改变,初步探讨激活蛋白1(AP-1)... 详细信息

目的: 通过茶多酚(TP)对人肝癌细胞株SMMC-7721作用,观察TP对细胞增殖影响、细胞形态学改变、细胞周期改变,确定TP对SMMC-7721细胞的剂量反应关系。 TP作用细胞后,测定细胞周期素D1(CyclinD1)蛋白表达量的改变,初步探讨激活蛋白1(AP-1)、P16与CyclinD1在信号传导通路中的作用,阐明TP对人肝癌细胞的分子作用机制。方法: 本实验以体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721为研究对象,观察TP对人肝癌细胞的生物效应,(1) MTT比色法测定细胞增殖率,确定TP对人肝癌细胞的剂量反应关系。(2) 苏木精-伊红(HE)染色法观察细胞形态学改变。(3) 流式细胞仪检测细胞周期。为进一步探讨TP作用人肝癌细胞株SMMC-7721的机理,(1) 免疫细胞化学、灰度值分析比较,确定细胞CyclinD1和P16蛋白表达量改变。(2) 构建AP-1报到质粒,以psv-β-gal质粒为内参照测量AP-1蛋白活性。结果: TP可抑制体外培养人肝癌细胞增殖,随着TP浓度增加,作用时间延长,细胞增殖率逐渐降低,其中48h内,25.0mg/L与50.0mg/L两剂量组增殖率差异有显著性(增殖率分别为94.12%和80.08%,t=4.011,P1)。TP作用细胞后出现细胞凋亡改变,表现为细胞变小变圆,核染色质致密浓缩。在48h内随着TP浓度的增加,S期细胞从60.4%(0mg/L)降低到

关键词：茶多酚肝癌细胞激活蛋白1 cyelind1 p16

外源性p16基因对人肝癌细胞生物学行为的影响及其机制

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外源性p16基因对人肝癌细胞生物学行为的影响及其机制

作者：罗春华南华大学

学位级别：硕士

目的:构建人p16cDNA重组真核表达载体。探讨转入外源性p16cDNA对人原发性肝癌SMMC-7721细胞生物学行为的影响及其抑制细胞生长的机制。方法:从pBS-p16克隆载体中,将人p16cDNA亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1,构建含人p16cDNA的重组质... 详细信息

目的:构建人p16cDNA重组真核表达载体。探讨转入外源性p16cDNA对人原发性肝癌SMMC-7721细胞生物学行为的影响及其抑制细胞生长的机制。方法:从pBS-p16克隆载体中,将人p16cDNA亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1,构建含人p16cDNA的重组质粒pcDNA3.1-p16,并经双酶切和测序鉴定。将该重组质粒转染人SMMC-7721细胞,经G418抗性筛选和扩增得到稳定表达p16的亚细胞株及稳定表达pcDNA3.1的对照亚细胞株,并经RT-PCR及免疫细胞化学鉴定。通过细胞计数法,流式细胞术,免疫细胞化学及Western blot等实验方法,对外源性p16基因导入人肝癌细胞后的细胞生物学行为及细胞周期调控因子CyclinD1及pRb进行观察。结果:成功地构建含人p16cDNA的重组表达质粒pcDNA3.1-p16,测序证明p16cDNA编码序列与Genbank中报道的序列一致。转染外源性p16基因的SMMC-7721细胞有外源性p16基因的整合及表达,细胞生长速度明显减慢,细胞群体倍增时间明显延长(37.8h vs 24.3h),G1期细胞明显多于转基因前(57.9% vs 41.5%)(P16表达可下调cylinD1的表达(P16基因后细胞中磷酸化pRb水平明显降低。结论: 1、成功构建含人p16cDNA的重组表达质粒pcDNA3.1-p16;2、外源性p16基因导入人肝癌细胞株SMMC-7721细胞中可稳定表达并使细胞周期停滞在G1期,抑制细胞生长;3、外源性p16基因抑制细胞生长的机制可能与下调cyclinD1表达,抑制pRb磷酸化相关。

关键词：肝肿瘤 p16基因治疗 G1期阻滞 cyelind1 pRb

P27 Cyclin D_1在胆囊癌中的表达及意义

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川北医学院学报 2002年第1期17卷 3-5页

作者：王琼文彬朱治健黄一凡川北医学院病理教研室四川南充637000

目的研究p2 7、cyelindl 在胆囊癌中的表达情况 ,并探讨它们与肿瘤分化程度及生物学行为的关系。方法应用免疫组织化学S -P法检测 10例胆囊炎及 32例胆囊癌标本p2 7及cyelindl的表达状况。结果p2 7在胆囊炎上皮中为低表达 ,在胆囊癌中... 详细信息

目的研究p2 7、cyelindl 在胆囊癌中的表达情况 ,并探讨它们与肿瘤分化程度及生物学行为的关系。方法应用免疫组织化学S -P法检测 10例胆囊炎及 32例胆囊癌标本p2 7及cyelindl的表达状况。结果p2 7在胆囊炎上皮中为低表达 ,在胆囊癌中少部分表现出高表达。而cyelindl 在胆囊炎上皮中低表达 ,而在胆囊癌中大部分呈现高表达 ,两者间差异显著 (P <0 .0 5 )。结论CyclinDl在胆囊癌的发生发展中有重要作用 ,且与患者预后有关。

关键词：表达胆囊癌 p27 cyelind1

冷冻治疗对荷瘤Wistar大鼠生存期的影响和机制

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中国肿瘤 2008年第11期17卷 961-963页

作者：付锐涂汉军徐航何跃郧阳医学院附属太和医院湖北十堰442000 华中科技大学同济医学院附属同济医院湖北武汉430030

[目的]研究冷冻治疗对荷瘤Wistar大鼠生存期的影响和机制。[方法]建立大鼠C6脑胶质瘤模型,冷冻治疗后免疫组化检测p27kip1和CyclinD1蛋白的表达,观察动物生存期。[结果]与未实施冷冻治疗对照组比较,冷冻治疗可延长动物生存期,上调p27kip... 详细信息

[目的]研究冷冻治疗对荷瘤Wistar大鼠生存期的影响和机制。[方法]建立大鼠C6脑胶质瘤模型,冷冻治疗后免疫组化检测p27kip1和CyclinD1蛋白的表达,观察动物生存期。[结果]与未实施冷冻治疗对照组比较,冷冻治疗可延长动物生存期,上调p27kip1蛋白的表达,下调CyclinD1蛋白的表达。p27kip1蛋白阳性表达率与荷瘤鼠生存期呈正相关,CyclinD1蛋白的阳性表达率与荷瘤鼠生存期呈负相关。p27kip1蛋白阳性表达率和CyclinD1蛋白的阳性表达率呈负相关。[结论]冷冻治疗可延长动物生存期,其机制同上调p27kip1蛋白和下调CyclinD1蛋白的表达有关。

关键词：冷冻疗法胶质瘤 p27^kip1 cyelind1 生存期