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山东医药 2011年第32期51卷 74-76,F0003页

作者：刘文欣刘岩雪陈颖天津医科大学附属肿瘤医院天津市肿瘤防治重点实验室天津300060

目的探讨CDK7和cyclinh蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及意义。方法应用免疫组化染色技术,检测21例正常子宫内膜,26例子宫内膜不典型增生及58例子宫内膜癌组织中CDK7和cyclinh的表达。结果 CDK7和cyclinh在正常、增生及癌变的子宫内膜组... 详细信息

目的探讨CDK7和cyclinh蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及意义。方法应用免疫组化染色技术,检测21例正常子宫内膜,26例子宫内膜不典型增生及58例子宫内膜癌组织中CDK7和cyclinh的表达。结果 CDK7和cyclinh在正常、增生及癌变的子宫内膜组织中表达率逐渐增高(Pcyclinh在子宫内膜癌中的表达与临床分期、肌层侵犯深度和组织分化程度没有明显关系(P>0.05)。子宫内膜癌中CDK7与Cy-clinH的表达成正相关(r=0.806,Pcyclinh的异常表达可以造成子宫内膜细胞周期调控失调,在子宫内膜癌的发生发展过程中起重要作用。

关键词：子宫内膜肿瘤 CDK7 cyclinh 免疫组织化学

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斑马鱼中囊胚转换分子机制的研究

斑马鱼中囊胚转换分子机制的研究

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作者：储琳华东师范大学

学位级别：硕士

中囊胚转换(Midblastula transition，MBT)在胚胎发育过程中是一个重要的过程。从这个时期开始表达的基因将在后续的原肠胚形成及体节形成过程中起至关重要的作用。存MBT前，早期胚胎发育主要受母型mRNAs和蛋白质调控，转录水平较低。... 详细信息

中囊胚转换(Midblastula transition，MBT)在胚胎发育过程中是一个重要的过程。从这个时期开始表达的基因将在后续的原肠胚形成及体节形成过程中起至关重要的作用。存MBT前，早期胚胎发育主要受母型mRNAs和蛋白质调控，转录水平较低。以前依靠突变的方法发现了许多重要的基因是与发育相关的。但是，还有很多存早期发育过程中具有重要功能的基因没有被发现，因为这些基因的突变会引起胚胎死亡。本实验应用美国Affymetrix公司的斑马鱼基因表达谱芯片，对斑马鱼中囊胚转换过程中的基因表达差异进行了研究。中囊胚转换大致发生在胚胎发育至2.75hpf(hour post-fertilization)。我们分别提取发育至2.5hpf和4hpf的斑马鱼胚胎总RNA。芯片分析结果表明，共获得了479个差异表达的基因，其中360个基因表达上调，119个基因表达下调。通过GO(Gene Ontology)分析表明，上调表达的基因按功能可以分为以下几种类别：信号转导，细胞通讯，表达调控，转录因子活性，胚胎发育，形态发生，性别分化，代谢以及转运类蛋白等。其中可能有一些与中囊胚转换相关并具有重要作用的基因，但其具体功能尚不清楚。选取表达上调率较高，且在中囊胚转换前未表达的31个基因作为进一步研究对

关键词：斑马鱼中囊胚转换基因芯片 CDK7 cyclinh 原核表达抗体

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CK2α对结肠癌HCT116细胞增殖的影响及机制探讨

CK2α对结肠癌HCT116细胞增殖的影响及机制探讨

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作者：张霞辽宁医学院

学位级别：硕士

目的以CK2α作为研究靶点，通过观察RNA干扰CK2α表达后HCT116细胞生长增殖情况及细胞周期相关蛋白cyclinh、P53和P21的表达水平，分析CK2α对HCT116细胞生长增殖的影响，并探讨其作用机制。方法 1、根据CK2α的mRNA序列，设计CK2α-s... 详细信息

目的以CK2α作为研究靶点，通过观察RNA干扰CK2α表达后HCT116细胞生长增殖情况及细胞周期相关蛋白cyclinh、P53和P21的表达水平，分析CK2α对HCT116细胞生长增殖的影响，并探讨其作用机制。方法 1、根据CK2α的mRNA序列，设计CK2α-siRNA序列，将体外培养HCT116细胞分为正常对照组、阴性对照组和CK2α-siRNA组，并应用Lipofectamine2000进行转染。倒置相差显微镜下观察干扰CK2α后的HCT116细胞形态学变化。利用Western blotting法检测RNA干扰24h、48h、72h、96h不同时间点CK2α的蛋白表达水平，以此分析CK2α-siRNA的干扰效果。 2、应用MTT法分别检测RNA干扰24h、48h、72h、96h不同时间点HCT116细胞增殖情况。 3、应用流式细胞术法检测RNA干扰后72h HCT116细胞周期时相的分布。 4、利用Western blotting法检测RNA干扰后72h HCT116细胞CK2α、cyclinh、P53和P21蛋白表达水平。 5、HCT116细胞分别转染MHA和MHA-CK2α，利用免疫共沉淀法检测CK2α与cyclinh的相互作用。结果 1、CK2α-siRNA干扰后HCT116细胞的形态发生回缩，细胞密度减少。 2、CK2α-siRNA干扰效果，与阴性对照组相比，转染CK2α-siRNA24h至72h之间，HCT116细胞CK2α的蛋白表达水平逐渐减少，72h干扰效果最显著，但转染96hCK2α的蛋白表达水平有恢复的趋势。 3、MTT检测，与阴性对照组比较，转染48和72h，CK2α-siRNA组细胞存活率明显降低（P 0.05）。 4、流式细胞术分析，与阴性对照组比较，CK2α-siRNA组在转染72h后S期细胞在细胞周期中所占比例显著减少（P cyclinh的表达显著降低（P 0.05）;P21蛋白表达水平则明显升高（P cyclinh在体内存在相互作用。结论干扰CK2α表达显著抑制HCT116细胞的增殖，其机制可能通过抑制细胞周期蛋白cyclinh表达和上调P21表达有关，从而阻滞细胞周期，抑制细胞增殖。

关键词： CK2 RNA干扰细胞周期结肠癌HCT116细胞 cyclinh P53

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CDK7与子宫内膜癌发生发展的相关性及机制的研究

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作者：姜丽天津医科大学

学位级别：硕士

目的:研究CDK7在子宫内膜癌中的表达,及在子宫内膜癌中的表达与临床分期、病理学类型、组织学分级等诸因素间的关系。通过研究CDK7表达程度与cyclinh、P53表达程度变化的关系,进一步推断其在子宫内膜癌发生发展过程中所起的作用。 ... 详细信息

目的:研究CDK7在子宫内膜癌中的表达,及在子宫内膜癌中的表达与临床分期、病理学类型、组织学分级等诸因素间的关系。通过研究CDK7表达程度与cyclinh、P53表达程度变化的关系,进一步推断其在子宫内膜癌发生发展过程中所起的作用。方法:应用免疫组化方法,检测96例子宫内膜癌、69例正常子宫内膜及35例不典型增生子宫内膜中CDK7的表达情况,研究其与子宫内膜癌病理分型、临床分期、浸润及转移等诸多因素之间的关系。通过RT-PCR的方法初步分析CDK7、cyclinh和P53在15例正常子宫内膜、11例不典型增生子宫内膜及23例子宫内膜癌组织中的表达水平,并对CDK7与cyclinh及P53表达程度变化的关系进一步分析。结果:CDK7的阳性表达率在子宫内膜癌中明显高于正常子宫内膜和不典型增生子宫内膜（P＜0.05）,与子宫内膜癌的组织学分级、病理学类型无相关关系（P＞0.05）,与手术-病理分期、癌组织浸润深度、淋巴结转移和腹腔细胞学阳性有关（P＜0.05）。CDK7的阳性表达率随着手术-病理分期的加重和肌层浸润深度的增加而增高,有淋巴结转移组较无淋巴结转移组增高,腹腔细胞学阳性组较阴性组增高。在正常子宫内膜中,CDK7mRNA表达阳性率为13.33%（2/15）,表达水平为（0.3124±0.2834）;在子宫内膜不典型增生中,CDK7mRNA表达阳性率为18.19%（2/11）,表达水平为（0.4220±0.2203）;在子宫内膜癌组织中,CDK7mRNA阳性表达率为82.61%（19/23）,表达水平为（0.5832±0.2343）。在正常子宫内膜中,cyclinhmRNA表达阳性率为20.00%（3/15）,表达水平为（0.3840±0.1933）;在子宫内膜不典型增生中,cyclinhmRNA表达阳性率为27.28%（3/11）,表达水平为（0.4178±0.2834）;在子宫内膜癌组织中,cyclinhmRNA阳性表达呈78.26%（18/23）,表达水平为（0.6241±0.3343）。在正常子宫内膜中,P53mRNA表达阳性率为33.33%（5/15）,表达水平为（0.3840±0.2443）;在子宫内膜不典型增生中,P53mRNA表达阳性率为54.54%（6/11）,表达水平为（0.4211±0.1946）;在子宫内膜癌组织中,P53mRNA阳性表达率为86.96%（20/23）,表达水平为（0.6412±0.3834）。在所同时检测的23例子宫内膜癌患者中,用pearson相关分析发现CDK7mRNA与cyclinhmRNA之间有相关性（r=0.319,P=0.008）,与P53mRNA仅有正相关趋势而无明显的相关关系（r=0.130,P＞0.05）。结论:CDK7在子宫内膜癌中过表达,其过表达与子宫内膜癌的组织学分级、病理学类型无关,与手术-病理分期、癌组织肌层浸润深度、淋巴结转移和腹腔细胞学阳性正相关。认为CDK7的过表达与子宫内膜癌的浸润和转移有关,是子宫内膜癌恶性程度增高、易于转移的信号。CDK7与cyclinh在子宫内膜癌组织中阳性表达率和表达水平明显高于正常子宫内膜及子宫内膜不典型增生,并且呈正相关关系,提示CDK7、cyclinh参与子宫内膜癌的发生与发展,在发病机制中可能作为复合体起协同作用。在子宫内膜癌患者中,CDK7与P53在mRNA水平上仅有正相关趋势,而无明显的相关关系。本研究提出了检测CDK7的表达对判断子宫内膜癌的恶性程度、预测肿瘤侵袭转移和评估预后是有意义的分子生物学指标。

关键词：子宫内膜癌 CDK7 免疫组化肿瘤转移 cyclinh P53 逆转录-聚合酶链反应

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