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CyclinD1反义核酸诱导肺腺癌细胞A549的凋亡

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生理学报 2011年第3期63卷 261-266页

作者：李尊岭邵淑红谢书阳岳真马颖滨州医学院生物化学与分子生物学教研室分子遗传学研究所烟台264003 滨州医学院应用心理学教研室烟台264003

为了探讨CyclinD1反义核酸在肺癌基因治疗中的作用,本研究构建了含有CyclinD1反义核酸的表达载体(命名为:pcDNA3.1-CyclinD1),并将该载体转染肺腺癌细胞A549,进行G418筛选后,获得稳定表达CyclinD1反义核酸的A549细胞(命名为:anti-Cyclin... 详细信息

为了探讨CyclinD1反义核酸在肺癌基因治疗中的作用,本研究构建了含有CyclinD1反义核酸的表达载体(命名为:pcDNA3.1-CyclinD1),并将该载体转染肺腺癌细胞A549,进行G418筛选后,获得稳定表达CyclinD1反义核酸的A549细胞(命名为:anti-CyclinD1-A549)。通过MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,结果显示稳定转染CyclinD1反义核酸后,A549细胞增殖显著被抑制,细胞凋亡增加。为探讨CyclinD1反义核酸诱导细胞凋亡的机理,应用Westernblot的方法检测了细胞内视网膜母细胞瘤蛋白质(retinoblastoma protein,pRb)、adenovirus E2 factor-1(E2F-1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2和MMP-9的表达,其结果显示,稳定转染CyclinD1反义核酸后,A549细胞内pRb、E2F-1、VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白表达均显著降低。以上结果表明,Cy-clinD1反义核酸可引起肺癌细胞的凋亡,其机制可能与细胞内pRb、E2F-1、VEGF、MMP-2和MMP-9的表达降低相关。

关键词：肺癌凋亡 CyclinD1 基因治疗

TRK、CyclinD1及CyclinA1在胶质瘤中的表达水平及相关性研究

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TRK、CyclinD1及CyclinA1在胶质瘤中的表达水平及相关性研究

作者：陈赟南昌大学

学位级别：硕士

目的:本研究通过检测TRK、CyclinD1及CyclinA1在各级别胶质瘤中的表达情况,分析TRK、CyclinD1及CyclinA1在不同级别胶质瘤中表达水平及预后的关系。方法:选择2017至2019年间从南昌大学第一附属医院病理科确诊40例胶质瘤样本,运用免疫组... 详细信息

目的:本研究通过检测TRK、CyclinD1及CyclinA1在各级别胶质瘤中的表达情况,分析TRK、CyclinD1及CyclinA1在不同级别胶质瘤中表达水平及预后的关系。方法:选择2017至2019年间从南昌大学第一附属医院病理科确诊40例胶质瘤样本,运用免疫组化法分别检测胶质瘤样本中TRK、CyclinD1、CyclinA1的表达情况,荧光原位杂交法（FISH）检测NTRK融合在胶质瘤中的表达情况,使用SPSS 25软件对数据进行统计学分析。结果:1、TRK蛋白的表达水平与胶质瘤WHO分级呈负相关（P=0.038）（P＜0.05差异有统计学意义）,而与性别、年龄、位置、术前KPS评分等无明显相关性（均P＞0.05,差异无统计学意义）。2、CyclinD1蛋白的表达水平与胶质瘤WHO分级、性别、年龄、位置、术前KPS评分等无明显相关性（均P＞0.05,差异无统计学意义）。但是在WHOI、II级中的表达率低于WHOIII、IV级。3、CyclinA1蛋白的表达水平与胶质瘤WHO分级呈负相关（P=0.003,差异有统计学意义）。CyclinA1蛋白的表达与胶质瘤大小、性别、年龄、位置、术前KPS评分等无明显相关性（均P＞0.05,差异无统计学意义）。4、TRK蛋白表达程度与胶质瘤病人的OS、PFS明显相关性,可以作为评价胶质瘤的生物学检测状态的指标,而CyclinD1、CyclinA1与胶质瘤病人的OS、PFS无关。5、在胶质瘤中NTRK的融合以NTRK1为主,且免疫组化对于诊断胶质瘤的融合特异性较低。结论:1、TRK、CyclinD1及CyclinA1在胶质瘤中存在表达,TRK、CyclinA1与胶质瘤的恶性程度呈负相关,两者之间存在正相关。2、TRK表达水平也许能作为胶质瘤病人的预后指标,而CyclinD1、CyclinA1的表达水平与患者预后无关。3、在胶质瘤中,NTRK的融合可能以NTRK1的融合为主。且IHC检测NTRK的融合特异度较低。

关键词： TRK CyclinD1 CyclinA1 胶质瘤

CyclinD1和Bax在甲状腺微小乳头状癌中的表达及意义

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重庆医学 2017年第3期46卷 325-328页

作者：魏广民周文波武伦魏英张睿湖北医药学院附属东风医院肝胆胰甲状腺外科湖北十堰442000 湖北医药学院附属东风医院实验中心湖北十堰442000 湖北医药学院附属东风医院病理科湖北十堰442000

目的探究细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)蛋白在甲状腺微小乳头状癌中的表达及其价值。方法选取2014年1月至2015年6月该院病理科存档的甲状腺疾病手术病例石蜡标本,应用免疫组织化学(MaxvisionTM/HRP免疫组织化... 详细信息

目的探究细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)蛋白在甲状腺微小乳头状癌中的表达及其价值。方法选取2014年1月至2015年6月该院病理科存档的甲状腺疾病手术病例石蜡标本,应用免疫组织化学(MaxvisionTM/HRP免疫组织化学染色法),以单克隆抗体兔抗人CyclinD1和鼠抗人Bax标记检测72例甲状腺微小乳头状癌、65例腺瘤组织和60例癌旁甲状腺正常组织,观察不同甲状腺组织中CyclinD1和Bax蛋白表达情况。结果 CyclinD1蛋白表达在甲状腺微小乳头状癌中的阳性率为79.17%,与腺瘤组织(χ~2=14.730,P1)、癌旁甲状腺正常组织(χ~2=80.404,P1)的表达差异有统计学意义,其与患者年龄、性别及淋巴结转移无明显关联(P>0.05)。Bax蛋白表达在甲状腺微小乳头状癌中的阳性率为66.67%,与腺瘤中的表达差异无统计学意义(P>0.05),与癌旁甲状腺正常组织的表达差异有统计学意义(P1),其与淋巴结转移有关联(χ~2=4.598,P0.05)。甲状腺微小乳头状癌中CyclinD1与Bax蛋白表达呈正相关关联(χ~2=11.463,r=0.435,P1)。结论 CyclinD1和Bax蛋白在甲状腺微小乳头状癌中高表达,与甲状腺微小乳头状癌的发生、发展相关,两者联合检测有助于对甲状腺微小乳头状癌的诊断。

关键词：甲状腺微小乳头状癌 CyclinD1 Bax 免疫组织化学

LZTS2及CyclinD1在上皮性卵巢癌中的表达及意义

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LZTS2及Cyclind1在上皮性卵巢癌中的表达及意义

作者：刘秋芬泰山医学院

学位级别：硕士

目的:本研究通过检测亮氨酸拉链肿瘤抑制因子2(LZTS2)和细胞周期素D1(CyclinD1)在上皮性卵巢癌、交界性卵巢肿瘤、卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织中的表达水平,来探讨LZTS2及CyclinD1在不同上皮性卵巢组织中的表达水平及其与卵巢癌患者临... 详细信息

目的:本研究通过检测亮氨酸拉链肿瘤抑制因子2(LZTS2)和细胞周期素D1(CyclinD1)在上皮性卵巢癌、交界性卵巢肿瘤、卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织中的表达水平,来探讨LZTS2及CyclinD1在不同上皮性卵巢组织中的表达水平及其与卵巢癌患者临床病理诸因素之间的关系。为LZTS2及CyclinD1关于上皮性卵巢肿瘤的产生和发展提供临床指导。研究方法:采用免疫组化(S-P)法,检测LZTS2及CyclinD1在12例正常卵巢组织、18例良性卵巢组织、16例交界性卵巢肿瘤和42例上皮性卵巢癌中的表达情况。分析LZTS2及CyclinD1在不同卵巢组织中的表达差异;分析卵巢癌患者中LZTS2及CyclinD1的表达与临床分期、组织学类型、病理分级、淋巴结转移等临床诸病理因素之间的关系;以及分析LZTS2及CyclinD1在上皮性卵巢癌组织中表达的相关性;应用SPSS22.0统计学软件进行统计分析。结果:统计学结果显示,LZTS2在上皮性卵巢癌胞浆中低表达或不表达。LZTS2在上皮性卵巢癌的阳性表达率为19.0%、在交界性卵巢肿瘤中的阳性表达率为25%,卵巢良性肿瘤中的阳性表达率为33.3%,正常卵巢组织中阳性表达率为58%。LZTS2在上皮性卵巢癌中的阳性表达率明显低于正常卵巢组织,经统计学分析差异具有统计学意义(P0.05)。LZTS2在上皮性卵巢癌中的阳性表达率与患者的组织学类型,临床分级,病理分级和淋巴结转移等临床诸病理因素之间差异均不具有统计学意义(P>0.05)。CyclinD1在正常卵巢组织中的阳性表达率为8.3%、在卵巢良性肿瘤组织中的阳性表达率为22.2%、在交界性卵巢肿瘤中的阳性表达率为37.5%、在上皮性卵巢癌中的阳性中的表达率为71.4%。结果显示CyclinD1在上皮性卵巢癌中的阳性表达率最高,其与正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤组织、交界性卵巢肿瘤组织比较差异均具有统计学意义(PCyclinD1的阳性表达率与患者的临床分期、组织学分级和淋巴结转移差异均具有统计学意义(PCyclinD1的表达可能具有相关关系,可能呈正相关(r=0.526 P=0.000)。结论:1.LZTS2的低表达或表达缺失及CyclinD1的过表达都可能与上皮性卵巢癌的发生有一定相关性。2.LZTS2的异常表达与上皮性卵巢癌的临床诸病理因素差异均无统计学意义(P>0.05)。3.CyclinD1的过表达与上皮性卵巢癌的临床分期、组织学分级和淋巴结转移差异均具有统计学意义(PCyclinD1与LZTS2表达可能具有相关性(r=0.526)。5.Lzts2和CyclinD1有可能成为新的肿瘤标志物,为上皮性卵巢癌的临床诊断提供一定的指导意义。

关键词： CyclinD1 LZTS2 上皮性卵巢癌免疫组化

甲状腺微小乳头状癌Ki67、CyclinD1、p27表达及超声特征与中央区淋巴结转移的关系

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甲状腺微小乳头状癌Ki67、CyclinD1、p27表达及超声特征与中央区...

作者：叶丹宁波大学

学位级别：硕士

目的全球甲状腺微小乳头状癌(PTMC)的发病率越来越高,但目前对于PTMC术前检查提示颈部淋巴结转移阴性(c N0)的患者是否需行预防性中央区淋巴结清扫(PCND)存在较大的争议。本研究分析PTMC患者中央区淋巴结转移(CLNM)的危险因素,拟通过使... 详细信息

目的全球甲状腺微小乳头状癌(PTMC)的发病率越来越高,但目前对于PTMC术前检查提示颈部淋巴结转移阴性(c N0)的患者是否需行预防性中央区淋巴结清扫(PCND)存在较大的争议。本研究分析PTMC患者中央区淋巴结转移(CLNM)的危险因素,拟通过使用超声特征及分子学标志物建立预测模型,为中央区淋巴结转移风险高的PTMC患者的手术治疗提供指导依据。方法收集2019年3月至2019年8月在我院行中央区淋巴结清扫术的PTMC患者60例。记录所有病例的超声特征,通过免疫组化的方法检测甲状腺肿瘤组织标本Ki67、CyclinD1、p27的表达。依照中央区淋巴结的病理结果将60例病患分为转移组和未转移组。单因素分析Ki67、CyclinD1、p27的表达及超声特征与CLNM的关系。采用多因素logistic回归方式建立预测模型;绘制ROC曲线,依靠AUC值评价模型的诊断价值;Hosmer-Lemeshow检验评价模型的校准能力。结果年龄(P=0.013)、边界(P=0.010)、钙化(P=0.003)、纵横比(P=0.004)、原发病灶数(P=0.002)、p27的表达(P=0.038)及CyclinD1高表达联合p27低表达(P=0.038)与PTMC发生CLNM有关。而性别(P=0.371)、形态(P=0.222)、血流(P=0.080)、Ki67的表达(P=1)、CyclinD1的表达(P=0.47)与PTMC发生CLNM无关。对超声特征进行多因素logistic分析显示,年龄(B:-0.087,P:0.015)是PTMC中央区发生转移的保护因素;而它的独立危险因素是边界不清(B:2.448,P:0.04)、存在钙化(B:2.204,P:0.01)、纵横比≥1(B:1.694,P:0.046)。根据logistic结果建立超声预测模型。绘制ROC曲线,年龄(AUC=0.687),结节边界(AUC=0.65),钙化(AUC=0.683),纵横比(AUC=0.7)、超声预测模型(AUC=0.869,灵敏度=70.0%,特异度=96.7%),说明超声预测模型有较好的诊断价值且拟合度较高(Hosmer-Lemeshow检验P=0.993)。结合CyclinD1、p27及超声特征进行分析,CyclinD1+p27+年龄(AUC=0.786),CyclinD1+p27+边界(AUC=0.777),CyclinD1+p27+钙化(AUC=0.794),CyclinD1+p27+纵横比(AUC=0.775),说明CyclinD1及p27表达联合四个超声特征(年龄、边界、钙化、纵横比)之一,就具有一定的诊断价值。A:超声预测模型+CyclinD1(AUC=0.874,灵敏度70%,特异度97.6%),B:超声预测模型+p27(AUC=0.896,灵敏度76.7%,特异度为90%)。C:超声预测模型+CyclinD1+p27(AUC=0.898,灵敏度80%,特异度86.7%)。A、B、C预测模型的AUC比超声预测模型稍大,其中C预测模型的特异度虽然较其他模型稍偏低,但其灵敏度可达80%。结论本研究建立的预测模型具有诊断价值,可为c N0期PTMC患者是否有必要行PCND提供指导依据。结节边界不清、存在钙化、纵横比≥1且年龄较小的PTMC患者,其中央区出现转移的概率较高,建议积极行清扫术。若还伴有CyclinD1高表达和(或)p27低表达者更应行PCND。CyclinD1高表达伴p27低表达联合四个超声特征(年龄、边界、钙化、纵横比)之一的PTMC患者,其中央区出现转移的概率也较高,建议行PCND。

关键词：甲状腺微小乳头状癌超声特征预测模型 Ki67 CyclinD1 p27 中央区淋巴结转移

miR-486-3p调控CyclinD1在氟致成骨细胞增殖活化中的作用研究

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miR-486-3p调控CyclinD1在氟致成骨细胞增殖活化中的作用研究

作者：欧阳婷贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:氟诱导的成骨细胞异常增殖和活化与氟骨症息息相关,但其机制尚未完全阐明。MicroRNAs(miRNAs)作为重要的表观遗传调控因子,参与骨代谢及细胞周期的调控。本研究在既往发现CyclinD1高表达参与氟暴露成骨细胞增殖活跃基础上,结合课... 详细信息

目的:氟诱导的成骨细胞异常增殖和活化与氟骨症息息相关,但其机制尚未完全阐明。MicroRNAs(miRNAs)作为重要的表观遗传调控因子,参与骨代谢及细胞周期的调控。本研究在既往发现CyclinD1高表达参与氟暴露成骨细胞增殖活跃基础上,结合课题组前期miRNA测序结果,进一步探讨miR-486-3p对CyclinD1的调控机制及其在氟诱导的成骨细胞增殖活化中的作用,为miRNA在氟骨症防治中的应用提供新思路。方法:1.miR-486-3p与CyclinD1、TGF-β1在燃煤污染型氟暴露人群的表达及相关性分析:依据地方性氟中毒病区划分标准(GB 17018-2011),在贵州省燃煤污染型氟中毒病区毕节市织金县荷花村及非氟中毒地区安顺市双堡镇张官村选择调查对象。依据调查对象纳入、排除标准,追踪既往调查对象共248例,知情同意原则下取其血样及尿样,课题组前期通过氟离子选择电极法测定调查人群体内氟负荷并进行分组,根据测定的尿氟浓度(UF),将调查对象分为三组:(1)UF1.96mg/g Cr,117例;(2)1.96 mg/g Cr≤UF3.92 mg/g Cr,66例。使用miRWalk3.0数据库的四种不同算法(miRDB、miRWalk、Target Scan和miRTar Base)预测靶向CyclinD1的miRNA,结合课题组前期的miRNA-seq结果和筛选标准,预测出氟暴露人群中表达下调且靶向调控CyclinD1的miRNAs,包括miR-4755-5p,let-7c-5p和miR-486-3p。生物信息学分析显示miR-486-3p还靶向TGF-β1/Smad通路中的TGF-β1,本论文选择miR-486-3p进一步研究。在课题组前期检测血清中碱性磷酸酶活性(ALP)和骨钙素(BGP)含量、外周血单个核细胞(PBMCs)中CyclinD1表达的基础上。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证调查对象血浆中miR-486-3p表达;qRT-PCR、ELISA法检测PBMCs中TGF-β1mRNA转录及血浆中TGF-β1蛋白表达;Spearman相关性分析评估外周血中miR-486-3p和CyclinD1、TGF-β1之间的相关性。2.氟对miR-486-3p、CyclinD1、TGF-β1/Smad2/3/CyclinD1轴的影响:酶消法分离人原代成骨细胞,通过形态学观察、碱性磷酸酶及茜素红染色鉴定人原代成骨细胞。根据课题组前期实验及预实验结果以0、600、1200μmol/L NaF处理人成骨细胞72 h进行后续试验。qRT-PCR检测miR-486-3p、CyclinD1及TGF-β1 mRNA转录;免疫印迹法(Western blotting)检测CyclinD1、TGF-β1表达和核内外Smad2/3表达及磷酸化水平;细胞免疫荧光检测Smad2/3入核情况;染色质免疫共沉淀法(ChIP)法检测Smad2/3在CyclinD1转录调控区富集情况。3.miR-486-3p调控CyclinD1参与氟诱导的人成骨细胞增殖活化机制研究:(1)miR-486-3p参与氟诱导的人成骨细胞增殖活化:在课题组前期证实氟诱导人原代成骨细胞增殖活化的基础上,采用miR-486-3p mimic转染人成骨细胞24 h后进一步用1200μmol/L NaF处理人成骨细胞72 h。qRT-PCR检测miR-486-3p表达;使用CCK-8、Ed U、流式细胞术、ALP活性和BGP含量检测miR-486-3p对成骨细胞增殖活化的影响。(2)miR-486-3p可直接靶向CyclinD1在转录后水平调控氟诱导的CyclinD1的上调。miR-486-3p mimic转染人成骨细胞24 h后,使用1200μmol/L NaF处理人成骨细胞72 h,qRT-PCR检测CyclinD1 mRNA转录,Western blotting检测CyclinD1蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-486-3p与CyclinD1的靶标关系。(3)miR-486-3p可通过TGF-β1/Smad2/3通路在转录水平调控氟诱导的CyclinD1的上调。双荧光素酶报告基因实验验证miR-486-3p与TGF-β1的靶标关系。采用miR-486-3p mimic转染人成骨细胞24 h后进一步采用1200μmol/L NaF处理人成骨细胞72 h,qRT-PCR检测TGF-β1 mRNA转录,Western blotting检测TGF-β1蛋白表达、核内外Smad2/3表达及磷酸化水平,细胞免疫荧光检测Smad2/3入核情况,以及ChIP检测Smad2/3在CyclinD1转录调控区富集情况。4.248例调查对象CyclinD1表达与相关miRNAs的多重线性回归分析:在248例调查对象中,分别以Cyc

关键词： miR-486-3p CyclinD1 TGF-β1/Smad2/3信号通路氟骨症成骨增殖与活化

前列腺癌中PCDH9与CyclinD1 C-myc表达的相关性及意义

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西部医学 2022年第2期34卷 260-264页

作者：龙琼先伍季彭勇张旭乾刘欣雅南充市中心医院·川北医学院第二临床医学院病理科四川南充637000 南充市中心医院·川北医学院第二临床医学院泌尿外科四川南充637000 南充市中心医院·川北医学院第二临床医学院妇产科四川南充637000

目的探讨前列腺癌组织中原钙黏蛋白9(PCDH9)与细胞周期调控基因CyclinD1和C-myc蛋白表达的相关性,分析前列腺癌中PCDH9在调节肿瘤细胞周期及促进肿瘤进展中的作用。方法收集南充市中心医院2018~2020年间存档的92例前列腺癌及36例良性前... 详细信息

目的探讨前列腺癌组织中原钙黏蛋白9(PCDH9)与细胞周期调控基因CyclinD1和C-myc蛋白表达的相关性,分析前列腺癌中PCDH9在调节肿瘤细胞周期及促进肿瘤进展中的作用。方法收集南充市中心医院2018~2020年间存档的92例前列腺癌及36例良性前列腺的石蜡包埋组织,采用免疫组织化学染色检测前列腺癌和良性前列腺组织中PCDH9和细胞周期调控基因CyclinD1和C-myc的表达情况,并分析其与临床病理特征的关系。结果PCDH9蛋白在前列腺癌组织中的阳性率明显低于良性前列腺组织(PCyclinD1及C-myc的阳性表达率明显高于良性前列腺组织(P20ng/mL及Ⅲ+Ⅳ期前列腺癌患者PCDH9阳性率明显降低(P0.05)。前列腺癌患者CyclinD1和C-myc表达与WHO/ISUP分级分组、脉管侵犯、PSA水平及临床分期等相关(P0.05)。在有CyclinD1或C-myc表达的前列腺癌组织中存在PCDH9表达的缺失,PCDH9的表达与CyclinD1、C-myc的表达呈负相关(r=0.414~0.457,P1)。结论前列腺癌组织中PCDH9呈低表达,且与细胞周期调控基因CyclinD1和C-myc的表达呈负相关,PCDH9可能通过调节细胞周期蛋白,进而促进肿瘤的进展和转移。

关键词：前列腺癌 PCDH9 CyclinD1 C-myc

氧化苦参碱对人结肠癌SW620细胞p16/CyclinD1/CDK4通路的影响

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中草药 2014年第15期45卷 2201-2205页

作者：张绪慧郑堰心张丽邓虹珠梁磊广东省第二人民医院肿瘤二科广东广州510317 南方医科大学中医药学院广东广州510515 广州军区广州总医院药剂科广东广州510010

目的观察氧化苦参碱诱导人结肠腺癌细胞株SW620凋亡的作用并探讨其可能机制。方法采用MTT法检测氧化苦参碱对SW620细胞的增殖抑制作用;Hoechst33258荧光染色检测氧化苦参碱对SW620细胞凋亡的影响;流式细胞仪检测氧化苦参碱对SW620细胞... 详细信息

目的观察氧化苦参碱诱导人结肠腺癌细胞株SW620凋亡的作用并探讨其可能机制。方法采用MTT法检测氧化苦参碱对SW620细胞的增殖抑制作用;Hoechst33258荧光染色检测氧化苦参碱对SW620细胞凋亡的影响;流式细胞仪检测氧化苦参碱对SW620细胞周期的影响;实时定量PCR法检测细胞内p16、CyclinD1及CDK4基因表达水平;免疫印迹法检测细胞内p16、CyclinD1及CDK4蛋白表达水平。结果氧化苦参碱抑制SW620细胞增殖作用呈剂量依赖性,其作用24 h的IC50为4.02μmol/L;与对照组相比,苦参碱处理后的SW620细胞G1期比例明显增高,G2期细胞比例下降(P16基因和蛋白水平升高(PCyclinD1及CDK4基因和蛋白表达水平显著降低(P1)。结论氧化苦参碱在体外能抑制SW620细胞的增殖,诱导细胞在G1期阻滞,其诱导作用与其调控p16、CyclinD1及CDK4基因和蛋白表达有关。

关键词：氧化苦参碱细胞周期 SW620细胞 p16 CyclinD1 CDK4

MicroRNA-155介导TGF-β1/SMAD2-CyclinD1通路负性调控胃癌及清热化湿方的干预研究

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MicroRNA-155介导TGF-β1/SMAD2-CyclinD1通路负性调控胃癌及清热...

作者：敖先伟广西中医药大学

学位级别：硕士

目的:从在体动物实验层面,构建mi RNA-155过表达胃癌荷瘤裸鼠模型,在中医药理论指导下,应用Western-blot、Quantitative Real-time PCR等现代分子生物学技术,研究mi RNA-155介导TGF-β1/SMAD2-Cyclin D1通路负性调控胃癌中相关指标变化... 详细信息

目的:从在体动物实验层面,构建mi RNA-155过表达胃癌荷瘤裸鼠模型,在中医药理论指导下,应用Western-blot、Quantitative Real-time PCR等现代分子生物学技术,研究mi RNA-155介导TGF-β1/SMAD2-Cyclin D1通路负性调控胃癌中相关指标变化及清热化湿类方药的干预可能机制。方法:依据筛选慢病毒最佳MOI值,通过慢病毒转染构建mi RNA-155过表达AGS细胞。36只SPF级裸鼠随机平均分为6组,mi RNA-155过表达组于右侧腋部皮下注射mi RNA-155过表达AGS细胞,其余组皮下注射AGS细胞。从造模第2天起,开始分组灌胃给药:过表达组和模型组不予给药,自然生长;治疗组分别予以5%、10%、20%的清热化湿方灌胃;对照组予化疗药腹腔注射;连续干预3周后处死裸鼠,取肿瘤并观察其大小体积,进行拍照,计算抑瘤率;瘤体标本行后续病理切片了解瘤体组织细胞形态及结构,Western-blot技术检测SMAD2及Cyclin D1蛋白表达水平,Quantitative Real-time PCR检测mi RNA-155、SMAD2及Cyclin D1的m RNA表达水平。结果:1.与AGS模型组相比,清热化湿方治疗各组、化疗对照组和mi RNA-155过表达组均可抑制肿瘤生长,mi RNA-155过表达组的抑瘤率最高,清热化湿方治疗各组的抑瘤率具有剂量依赖性。2.HE染色切片模型组瘤体组织光镜下表现为细胞排列紧实,核大且染色较深;mi RNA-155过表达组、化疗对照组及清热化湿方治疗后各组瘤块细胞相对模型组细胞出现不同程度排列疏松、核染色较浅及坏死灶,其中以mi RNA-155过表达组的坏死灶最为明显,对照组次之,清热化湿方治疗各组坏死灶的表现呈明显剂量依赖性。3.RT-PCR实验结果显示,在mi RNA-155表达方面,与模型组相比,mi RNA-155过表达组、对照组和清热化湿方治疗各组均可使mi RNA-155的表达水平升高,清热化湿方治疗各组mi RNA-155的表达升高程度有明显的剂量依赖性;在mi RNA-155过表达组、对照组、清热化湿方治疗高及中剂量组与模型组相比均具有统计学意义(P0.05)。在SMAD2及Cyclin D1的m RNA表达水平方面,呈现于与mi RNA-155表达相反的结果,与模型组相比,mi RNA-155过表达组、对照组和清热化湿方治疗各组均可使SMAD2及Cyclin D1的m RNA表达水平下降,清热化湿方治疗各组m RNA下降程度有明显的剂量依赖性;在mi RNA-155过表达组、对照组、清热化湿方治疗高及中剂量组与模型组相比均具有统计学意义(P0.05)。4.Western Blot结果显示,与模型组相比,mi RNA-155过表达组、化疗对照组和清热化湿方治疗各组均可降低肿瘤组织内SMAD2及Cyclin D1蛋白表达水平。与模型组比较,mi RNA-155过表达组、化疗对照组及清热化湿方治疗高剂量组在SMAD2及Cyclin D1蛋白表达均具有统计学意义(P0.05)。结论:mi RNA-155的过表达可通过介导TGF-β1/SMAD2-Cyclin D1通路负性调控胃癌,抑制胃癌进展。清热化湿方可通过上调mi RNA-155表达,从而介导TGF-β1/SMAD2-Cyclin D1通路,降低SMAD2及Cyclin D1的表达,达到抑制胃癌进展的作用。

关键词：胃癌 miRNA-155 TGF-β1/SMAD2信号通路 CyclinD1 清热化湿方