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第六届世界华人虾蟹类养殖研讨会

作者：虞晋晋黄辉洋叶海辉李少菁王桂忠厦门大学海洋学系

以长毛对虾和凡纳对虾的卵巢为材料,提取RNA,反转录合成出cDNA。根据已报道序列设计简并引物,扩增得到两种虾的cyclin b cDNA片段。利用cDNA末端快速扩增和基因克隆等分子生物学技术,分别克隆出长毛对虾和凡纳对虾cyclin b基因的全长cDN... 详细信息

以长毛对虾和凡纳对虾的卵巢为材料,提取RNA,反转录合成出cDNA。根据已报道序列设计简并引物,扩增得到两种虾的cyclin b cDNA片段。利用cDNA末端快速扩增和基因克隆等分子生物学技术,分别克隆出长毛对虾和凡纳对虾cyclin b基因的全长cDNA序列。序列分析表明,长毛对虾和凡纳对虾的cyclin b序列全长分别为1927bp和2326bp,均起始于一个包含在脊椎动物起始密码子ANNATG基元。长毛对虾开放阅读框长1428bp,编码475个氨基酸,基因5′端非编码区长81bp,3′端非编码区长418bp。3′端的信号AATAAA位于Poly(A)尾巴上游20bp处。凡纳对虾开放阅读框长1803bp,编码600个氨基酸,基因5′端非编码区长113bp,3′端非编码区长410bp。3′端的信号AATAAA位于Poly(A)尾巴上游21bp处。

关键词： cyclin b cDNA 长毛对虾凡纳对虾

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Effect of cis-9,trans-11-conjugated linoleic acid on cell cycle of gastric adenocarcinoma cell line(SGC-7901)

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World Journal of Gastroenterology 2002年第2期8卷 224-229页

作者： Jia-Ren Liu bai-Xiang Li bing-Qing Chen Ying-ben Xue Yan-Mei Yang Yu-Mei Zheng,Department of Toxicological Health,Public Health College,Harbin Medical University,Harbin 150001,Heilongjiang Province,China Xiao-Hui Han ICU of Cardiological Surgery,The Second Hospital,Harbin Medical University,Harbin 150001,Heilongjiang Province,China Rui-Hai Liu,Food Science and Toxicology,Department of Food Science,Cornell University,Ithaca,NY 14853-7201,USA Department of Toxicological Health Public Health College Harbin Medical University 199 Dongdazhi Street Nangang District Harbin 150001 Heilongjiang Province China. jiarenliu@***

AIM: To determine the effect of cis -9, trans -11-conjugated linoleic acid (c9, t11-CLA) on the cell cycle of gastric cancer cells (SGC-7901) and its possible mechanism in inhibition cancer growth. METHODS: Using cell culture and immunocytochemical techniques, we examined the cell growth, DNA synthesis, expression of PCNA, cyclin A, b(1), D(1), p16(ink4a) and p21(cip/waf1) of SGC-7901 cells which were treated with various c9, t11-CLA concentrations (25, 50, 100 and 200 micromol.L(-1))of c 9, t 11-CLA for 24 and 48h, with a negative control (0.1% ethane). RESULTS: The cell growth and DNA synthesis of SGC-7901 cells were inhibited by c9, ***-7901 cells. Eight day after treatment with various concentrations of c9, t11-CLA mentioned above, the inhibition rates were 5.92%, 20.15%, 75.61% and 82.44%, respectively and inhibitory effect of c9, t11-CLA on DNA synthesis (except for 25 micromol.L, 24h) showed significantly less (3)H-TdR incorporation than that in the negative controls (Pbated in media supplemented with different c9, t11-CLA concentrations at various times significantly decreased the expressions of PCNA (the expression rates were 7.2-3.0%, 24h and 9.1-0.9% at 48h, respectively), cyclin A (11.0-2.3%, 24h and 8.5-0.5%,48h), b(1) (4.8-1.8% at 24h and 5.5-0.6% at 48h)and D(1) (3.6-1.4% at 24h and 3.7%-0 at 48h) as compared with those in the negative controls(the expressions of PCNA, cyclin A, b(1) and D(1) were 6.5% at 24h and 9.0% at 48h, 4.2% at 24h and 5.1% at 48h, 9.5% at 24h and 6.0% at 48h,respectively)(Pcyclin-dependent kinases inhibitors(CDKI), were increased. CONCLUSION: The cell growth and proliferation of SGC-7901 cell is inhibited by c9, t11-CLA via blocking the cell cycle, with reduced expressions of cyclin A,b(1) and D(1) and enhanced expressions of CDKI(P16(ink4a) and p21(cip/waf1)).

关键词： Linoleic Acids, Conjugated Adenocarcinoma Animals Cell Cycle Cell Division cyclin A cyclin b cyclin D1 cyclin-Dependent Kinase Inhibitor p16 cyclin-Dependent Kinase Inhibitor p21 cyclins Enzyme Inhibitors Humans Immunohistochemistry Linoleic Acids Proliferating Cell Nuclear Antigen Research Support, Non-U.S. Gov't Stomach Neoplasms Tumor Cells, Cultured

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Impact of nuclear actin on the prophase chromosome construction of Physarum polycephalum

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Progress in Natural Science:Materials International 2004年第9期 37-41页

作者： JING Yuqi 1, WANG Xiaoguang 2, HAO Shui 1 and ZENG Xianlu 1*(1. Institute of Genetics and Cytology, Northeast Normal University, Changchun 130024, China 2. Department of biology, Changchun Normal College, Changchun 130032, China) Institute of Genetics and Cytology Northeast Normal University Changchun 130024 China Department of biology Changchun Normal College Changchun 130032 China

A cell free system efficiently promoting mitosis has been developed using the precise natural synchronous plasmodium of Physarum polycephalum . The content changes of nuclear cyclin b were exploited to represent the prophase process of Physarum polycephalum . The possible function of nuclear actin on chromosome construction was investigated by detecting the content changes of nuclear cyclin b in the late G 2 phase nuclei treated with cytochalasin b and incubated in the cell free system. Our results showed that nuclear actin plays an important role in the process of the chromosome construction.

关键词： Physarum polycephalum nuclear actin chromosome construction cyclin b cell-free system.

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Adenosine induces G2/M cell-cycle arrest by inhibiting cell mitosis progress

Adenosine induces G2/M cell-cycle arrest by inhibiting cell ...

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医药生物技术国际研讨会

作者： Jia Kun-Zhi~1,Tang bo~1,Yu Lu~1,Cheng Wei~1,Zhang Rong~1, Zhang Jian-Fa~2,Hua Zi-Chun~(1**) (1.Jiangsu Center of Hepatobiliary Diseases,the State Key Laboratory of Pharmaceutical biotechnology. the Affiliated Drum Tower Hospital of Nanjing University Medical School,Nanjing,210008,China 2.Center for Molecular Metabolism,School of Life Science,Nanjing University,Nanjing,210093,China)

＜正＞Adenosine is the product of ATP degradation when cell undergoes various stresses,and many researches focus on the anti-inflammation of *** papers about adenosine concern cell cycle. Cell cycle is the essential mechanism by which all living lives reproduce and it is also one key regulatory target machinery when cells encounter stresses,so it is necessary to examine the detail relationship between adenosine existence and cell *** the present study,adenosine was found to induce G2/M cell-cycle ***,adenosine was found to modulate the expression of some cell cycle decisive proteins such as cyclin b and p21,the phosphorylation of CDC2,and thus inhibit the transition of metaphase to anaphase of mitosis.

关键词： adenosine cell cycle mitosis cyclin b cdc2

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GLA/TMZ联合治疗脑胶质瘤效应及其机制研究

GLA/TMZ联合治疗脑胶质瘤效应及其机制研究

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作者：向海涛苏州大学

学位级别：硕士

目的:本课题以人脑胶质瘤U251、U87和SGH44细胞为模型,探讨蓝萼甲素（GlaucocalyxinA,GLA）与替莫唑胺（Temozolomide,TMZ）协同增敏作用及其潜在机制。方法:CCK8和集落形成实验检测细胞活力;Annexin V/PI双染流式法检测GLA/TMZ联合用... 详细信息

目的:本课题以人脑胶质瘤U251、U87和SGH44细胞为模型,探讨蓝萼甲素（GlaucocalyxinA,GLA）与替莫唑胺（Temozolomide,TMZ）协同增敏作用及其潜在机制。方法:CCK8和集落形成实验检测细胞活力;Annexin V/PI双染流式法检测GLA/TMZ联合用药对细胞的毒性作用;Hoechst 33258染色和流式细胞仪检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞周期;western blot和qPCR检测细胞凋亡和周期相关基因和蛋白的表达;动物实验检测体内GLA/TMZ联合治疗肿瘤的效应及其机制。结果:单独GLA可以抑制胶质瘤细胞的增殖,低浓度的GLA对胶质瘤细胞的抑制作用不明显;2 μM的GLA与不同浓度的TMZ联合作用明显抑制细胞增殖,增加细胞死亡率,且呈时间剂量依赖性;0.1 mM TMZ和2 μM GLA联合作用诱导了细胞凋亡,联合处理组凋亡小体表达增加,细胞核破碎,细胞被阻滞在G2/M期;western blot结果显示,细胞凋亡相关蛋白caspase 8,caspase 9和bax表达增加,抗凋亡蛋白bcl-2表达降低;细胞周期相关蛋白cyclin b表达降低,cdc25A表达降低;qPCR结果与western blot结果一致,表明GLA/TMZ的联合作用是通过调控细胞周期相关基因和蛋白实现的。裸鼠成瘤体内实验结果显示,GLA/TMZ联合处理组,裸鼠肿瘤体积明显减少,western blot检测发现细胞周期相关蛋白cyclin b和cdc25A的表达明显降低,与体外实验结果一致。结论:GLA/TMZ可以协同治疗脑胶质瘤,GLA可以明显增加TMZ的化疗敏感性,降低TMZ的用药浓度,这一过程主要与细胞周期相关蛋白cyclin b和cdc25A的调控有关。

关键词：脑胶质瘤 TMZ GLA 细胞凋亡细胞周期 cyclin b cdc25A

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前列腺癌细胞中AR通过CXCL13调节细胞周期和转移

前列腺癌细胞中AR通过CXCL13调节细胞周期和转移

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作者：宋炜南京师范大学

学位级别：硕士

CXCL13是CXC趋化因子家族的一员,最初被称为b细胞吸引趋化因子(bcell attracting chemokine 1,bCA-1),其配体为 CXC 趋化因子受体 5(C-X-C chemokine receptor type 5,CXCR5)。CXCL13-CXCR5信号通路已被证实参与淋巴细胞的调节,并促进炎症反应。另外,CXCL13-CXCR5信号被认为可能参与肿瘤的发展,有研究表明CXCL13及其受体CXCR5可作为淋巴瘤检测和治疗的新靶点。尽管如此,CXCL13的研究还是处于起步阶段,尤其是在肿瘤细胞中,CXCL13如何被调节,如何影响肿瘤的发生和发展,目前还不清楚。雄激素受体(androgen receptor,AR)作为一种转录因子在前列腺肿瘤的发生和发展中起了至关重要的作用,因此我们将采用细胞生物学以及分子生物学等研究方法,探究CXCL13与AR之间的关系以及CXCL13如何去发挥促癌的作用,这也许能为人们提供另一条通路去认识前列腺癌的发展。为验证上述猜想,解决其中的关键问题,本课题的实验内容主要按以下几方面进行:首先,在一种前列腺正常细胞和四种不同类型的前列腺癌细胞中分别检测CXCL13的mRNA水平和蛋白表达水平,发现CXCL13在四种前列腺癌细胞中的表达量普遍高于正常前列腺细胞。并且,与雄激素非依赖型的两种前列腺癌细胞相比,在雄激素依赖型的两种前列腺癌细胞中,CXCL13的表达量更高。这预示着CXCL13很可能受AR调控。其次,我们用一种人工合成类雄性激素米勃酮(Mibolerone,Mib)来刺激AR依赖型前列腺癌细胞LNCaP和CWR22Rv1,发现随着Mib浓度的递增,AR的活性标志物PSA表达量上升,与此同时,CXCL13的表达量也呈现上升趋势。这说明CXCL13的表达与AR的活性呈正相关性。随后,我们在雄激素非依赖型前列腺癌细胞PC3中过表达AR,发现CXCL13的表达量上升,同时在雄激素依赖型的前列腺癌细胞LNCaP中沉默AR,发现CXCL13的表达水平明显下降,这说明CXCL13的表达能够受转录因子AR的调控。再次,我们通过JASPAR启动子预测软件,在CXCL13的基因组序列上寻找AR的结合位点。经过预测发现,CXCL13的基因组序列上有多个位点与AR的结合位点高度相似。同时,我们做了 ChIP-seq实验,发现在CXCL13的增强子上确实存在两个AR的结合位点。这表明AR可能通过结合CXCL13的增强子从而调控CXCL13的表达。最后,我们做了 CXCL13功能方面的一些实验:我们首先构建了 CXCL13及其受体CXCR5的质粒,在LNCaP细胞中过表达CXCL13和CXCR5的质粒后,发现与细胞迁移相关的snail蛋白以及与细胞周期相关的cyclin b蛋白表达量上升,但是这种上升会被CXCL13和CXCR5的siRNA阻断。其次,我们在LNCaP细胞中过表达CXCL13,理论上CXCL13这种分泌蛋白会分泌到细胞外的培养基中,收集该培养基来培养LNCaP细胞,发现该培养基能够刺激snail和cyclinb的表达。随后,我们还设想在PC3细胞中,过表达AR,同时沉默CXCL13,以此探究AR是否通过CXCL13上调与前列腺肿瘤迁移和周期相关的基因。最后,我们做了Transwell,划痕及流式实验,结果表明CXCL13能够促进前列腺肿瘤细胞的迁移和侵袭,并且与前列腺癌细胞的周期相关。综上所述,在前列腺癌细胞中,AR能够结合CXCL13的增强子上调CXCL13,表达后的CXCL13通过上调snail和cyclin b来促进前列腺肿瘤的转移并影响前列腺肿瘤周期的运行。

关键词： CXCL13 AR snail cyclin b 前列腺癌

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