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cx31 is assembled and trafficked to cell surface by ER-Golgi pathway and degraded by proteasomal or lysosomal pathways

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Cell Research 2005年第6期15卷 455-464页

作者： Li Qiang HE*, Fang CAI, Yu LIU, Mu Jun LIU, Zhi Ping TAN, Qian PAN, Fai Yan FANG, De Sheng LIANG,Ling Qian WU, Zhi Gao LONG, He Ping DAI, Kun XIA**, Jia Hui XIA, Zhuo Hua ZHANGNational Laboratory of Medical Genetics, Central South University, Changsha 410078, China. National Laboratory of Medical Genetics Central South University Changsha China Institute of Medical Genetics Medical School of Shanghai Jiao Tong University Shanghai China

Gap junctions, consisting of connexins, allow the exchange of small molecules (<1 kD) between adjacent cells, thusproviding a mechanism for synchronizing the responses of groups of cells to environmental stimuli. Conn... 详细信息

Gap junctions, consisting of connexins, allow the exchange of small molecules (31 is amember of the connexin family. Mutations on connexin 31 are associated with erythrokeratodermia variabilis, hearingimpairment and peripheral neuropathy. However, the pathological mechanism for connexin 31 mutants in these diseasesare still unknown. In this study, we analyzed the assembly, trafficking and metabolism of connexin 31 in HeLa cellsstably expressing connexin 31. Calcein transfer assay showed that calcein transfer was inhibited when cells weretreated with Brefeldin A or cytochalasin D, but not when treated with nocodazole or α-glycyrrhetinic acid, suggestingthat Golgi apparatus and actin filaments, but not microtubules, are crucial to the trafficking and assembly of connexin31, as well as the formation of gap junction intercellular communication by connexin 31. Additionally, α-glycyrrhetinicacid did not effectively inhibit gap junctional intercellular communication formed by connexin 31. Pulse-chase assayrevealed that connexin 31 had a half-life of about 6 h. Moreover, Western blotting and fluorescent staining demonstratedthat in HeLa cells stably expressing connexin 31, the amount of connexin 31 was significantly increased after these cellswere treated with proteasomal or lysosomal inhibitors. These findings indicate that connexin 31 was rapidly renewed,and possibly degraded by both proteasomal and lysosomal pathways.

关键词： connexin cx31 assembly trafficking metabolism.

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Connexin31相互作用蛋白筛选、证实与功能研究

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生物化学与生物物理进展 2005年第1期32卷 18-24页

作者：刘宇谭志平潘乾贺立强蔡芳邬玲仟梁德生夏昆夏家辉张灼华中南大学医学遗传学国家重点实验室长沙410078

筛选间隙连接蛋白31 (connexin31,cx31) 相互作用蛋白并研究其在cx31运输中的功能. 运用制备的抗cx31多克隆抗体免疫沉淀,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,蛋白质条带回收,蛋白质胶块酶解,电喷雾-四极杆-飞行时间质谱分析,数据库扫描筛选可... 详细信息

筛选间隙连接蛋白31 (connexin31,cx31) 相互作用蛋白并研究其在cx31运输中的功能. 运用制备的抗cx31多克隆抗体免疫沉淀,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,蛋白质条带回收,蛋白质胶块酶解,电喷雾-四极杆-飞行时间质谱分析,数据库扫描筛选可能相互作用蛋白,可能互作蛋白经免疫共沉淀、细胞免疫共定位等证实,确定actin为cx31相互作用蛋白. 用药物处理细胞,抑制actin的功能,观察cx31定位与间隙连接通道的通透性,确定actin在cx31运输中的功能. 当药物抑制actin的功能时,cx31很少能到达细胞膜上形成间隙连接通道,cx31主要分布在胞质中;当药物抑制tublin的功能时,cx31能到达细胞膜上形成间隙连接通道,细胞免疫荧光实验显示间隙连接斑有增多的现象,但染料转移实验表明细胞膜上间隙连接通道并没有增加. Actin在cx31运输至细胞膜上形成间隙连接通道的过程中具有重要作用.

关键词： cx31 间隙连接蛋白相互作用蛋白细胞免疫共定位免疫共沉淀

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Connexin31显性听力下降相关突变体研究

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生物化学与生物物理进展 2005年第5期32卷 403-407页

作者：谭志平刘宇蔡芳潘乾贺立强黄亮群戴和平夏昆夏家辉张灼华中南大学医学遗传学国家重点实验室长沙410078

cx31突变可以导致常染色体显性听力下降、常染色体隐性听力下降、周围神经疾病伴听力丧失,以及变性红皮肤病角化病,其导致不同疾病的机理一直是研究的重点.利用定点突变技术(site-directed mutagenesis,SDM)构建connexin31显性听力下降... 详细信息

cx31突变可以导致常染色体显性听力下降、常染色体隐性听力下降、周围神经疾病伴听力丧失,以及变性红皮肤病角化病,其导致不同疾病的机理一直是研究的重点.利用定点突变技术(site-directed mutagenesis,SDM)构建connexin31显性听力下降相关突变体cx31R180X,cx31E183K并插入到真核表达载体pEGFP-N1,转染HeLa细胞,转染cx31R180X-pEGFP-N1和cx31E183K-pEGFP-N1cx31突变体质粒的HeLa细胞质膜上没有出现斑块状染色和聚集现象,分别用内质网染料conA和高尔基体染料WGA进行免疫荧光染色,结果显示cx31显性听力下降相关突变体蛋白主要分布在细胞质内,且大部分定位在内质网和高尔基体上.同时分别用抗cx31和抗GFP抗体进行蛋白质印迹检测,证实cx31R180X,cx31E183K在转染的HeLa细胞中都有表达.研究发现Connexin31显性耳聋相关突变体cx31R180X,cx31E183K不能正常地形成间隙连接通道,这与connexin31 EKV(变性红皮肤病角化病)相关突变体能够运输到细胞膜上形成间隙连接通道的报道不相同,提示connexin31不同部位突变导致不同疾病的致病机理可能不一样,从而为解释“one connexin two diseases”提供分子水平的依据.

关键词： cx31 定点突变技术突变体绿色荧光蛋白

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cx31自动变速器行星变速机构速比配置研究

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机械传动 2014年第6期38卷 142-147页

作者：许爱芬贾巨民温秉权军事交通学院军事物流系天津300161

速比配置是影响汽车动力性和燃油经济性的关键因素。以cx31自动变速器的行星齿轮变速机构为研究对象,基于等比级数阶法,对其速比配置进行深入分析。在保证变速器结构尺寸和速比配置大致不变的条件下,对比分析了三排单级式行星变速机构... 详细信息

速比配置是影响汽车动力性和燃油经济性的关键因素。以cx31自动变速器的行星齿轮变速机构为研究对象,基于等比级数阶法,对其速比配置进行深入分析。在保证变速器结构尺寸和速比配置大致不变的条件下,对比分析了三排单级式行星变速机构的速比配置及其可行性。为自主设计重型车辆自动变速器提供了一种新的思路和理论依据。

关键词： cx31 行星变速机构速比配置等比级数阶自动变速器

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一种特异性多用途抗人Connexin31抗体的获得与应用

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激光生物学报 2005年第2期14卷 81-86页

作者：刘宇蔡芳谭志平贺立强蒋泰文黄亮群夏昆夏家辉中南大学医学遗传学国家重点实验室中国湖南长沙410078

间隙连接蛋白31(Connexin31,cx31)是间隙连接蛋白(Connexin)家族的一员,目前对于cx31的功能及其调节方式知之甚少。本实验利用Fmoc固相多肽合成的方法合成cx31羧基端一个多肽片段(250 266AA),经HPLC纯化后偶联到匙孔槭血蓝蛋白,免疫新... 详细信息

间隙连接蛋白31(Connexin31,cx31)是间隙连接蛋白(Connexin)家族的一员,目前对于cx31的功能及其调节方式知之甚少。本实验利用Fmoc固相多肽合成的方法合成cx31羧基端一个多肽片段(250 266AA),经HPLC纯化后偶联到匙孔槭血蓝蛋白,免疫新西兰雄兔后采血检测、并纯化,采用cx31myc表达蛋白进行Westernblotting、细胞免疫荧光染色、免疫沉淀实验,证实得到的抗体为抗间隙连接蛋白31的特异抗体。

关键词： cx31 多肽合成 Western blotting 免疫荧光免疫沉淀

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抗人cx31第234位磷酸丝氨酸抗体的制备

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湖南理工学院学报（自然科学版） 2008年第3期21卷 52-55页

作者：寻晓红刘宇湖南理工学院化学化工系湖南岳阳414006

利用磷酸化多肽合成技术合成cx31羧基端磷酸多肽片段(CSPSSSApSRAST),经HPLC纯化、质谱证实后偶联到匙孔槭血蓝蛋白,免疫新西兰雄兔后采血检测、并经过特异性纯化、经Western blotting检测,证实得到的抗体为抗间隙连接蛋白31第234位丝... 详细信息

利用磷酸化多肽合成技术合成cx31羧基端磷酸多肽片段(CSPSSSApSRAST),经HPLC纯化、质谱证实后偶联到匙孔槭血蓝蛋白,免疫新西兰雄兔后采血检测、并经过特异性纯化、经Western blotting检测,证实得到的抗体为抗间隙连接蛋白31第234位丝氨酸的特异抗体.

关键词： cx31 磷酸多肽合成 Western blotting

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母子共患KID综合征患者皮损中连接蛋白的检测及分析

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皮肤性病诊疗学杂志 2019年第5期26卷 267-270页

作者：柳莉丹姜亚楠刘家蕊陈永锋南方医科大学皮肤病医院广东广州510091 深圳市人民医院广东深圳518020 河南科技大学第二附属医院河南洛阳471002

目的:探讨KID综合征患者皮损中连接蛋白cx31、cx43、cx50表达与KID综合征发病的相关性。方法:选择一家系中母子共患KID综合征患者作为病例组,采用免疫组化检测皮损中连接蛋白cx31、cx43、cx50的表达,并以该家系中1例正常成员及我院1例... 详细信息

目的:探讨KID综合征患者皮损中连接蛋白cx31、cx43、cx50表达与KID综合征发病的相关性。方法:选择一家系中母子共患KID综合征患者作为病例组,采用免疫组化检测皮损中连接蛋白cx31、cx43、cx50的表达,并以该家系中1例正常成员及我院1例美容门诊手术正常人作为对照进行比较分析。结果:病例组cx31均在表皮棘层和基底层表达,而对照组2例均在表皮基底层表达,病例组cx31表达水平上调。cx43、cx50在病例组及对照组皮肤中分布一致,表达水平无明显变化。结论:KID综合征患者皮损中cx31表达水平上调,cx43、cx50表达水平变化不明显,三者是否参与KID综合征的发病有待进一步研究。

关键词： KID综合征 cx31 cx43 cx50

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抗人Connexin31单克隆抗体的获得与应用

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湖南理工学院学报（自然科学版） 2006年第3期19卷 71-73,80页

作者：刘宇寻晓红聂东宋湖南理工学院化学化工系湖南岳阳414006

间隙连接蛋白31(Connexin31,cx31)是间隙连接蛋白(Connexin)家族的一员,目前对于cx31的功能及其调节方式知之甚少。本实验利用多肽合成的方法合成cx31羧基端一个多肽片段(250-266AA),经HPLC纯化后偶联到匙孔槭血蓝蛋白,免疫Balb/c小鼠... 详细信息

间隙连接蛋白31(Connexin31,cx31)是间隙连接蛋白(Connexin)家族的一员,目前对于cx31的功能及其调节方式知之甚少。本实验利用多肽合成的方法合成cx31羧基端一个多肽片段(250-266AA),经HPLC纯化后偶联到匙孔槭血蓝蛋白,免疫Balb/c小鼠、采血检测产生阳性抗体、脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合、筛选阳性克隆建株、分泌的抗体经Westernblotting、细胞免疫荧光染色证实得到的抗体为抗间隙连接蛋白31的特异抗体。

关键词： cx31 多肽合成单克隆抗体

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