检索结果-南通市图书馆

热带作物学报 2022年第3期43卷 582-588页

作者：王娜王记圆李潇张宇刘文波林春花缪卫国海南大学植物保护学院/热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室海南海口570228

暹罗炭疽菌(Colletotrichum siamense)是一种重要的病原真菌,是我国橡胶树炭疽病(Colletotrichum leaf disease,CLD)的田间优势病原种,也是热带、亚热带地区许多其他农林作物炭疽病的主要病原种。脂滴是细胞的中性脂,存在于绝大多数真... 详细信息

暹罗炭疽菌(Colletotrichum siamense)是一种重要的病原真菌,是我国橡胶树炭疽病(Colletotrichum leaf disease,CLD)的田间优势病原种,也是热带、亚热带地区许多其他农林作物炭疽病的主要病原种。脂滴是细胞的中性脂,存在于绝大多数真核细胞中,是细胞内甘油三酯的主要贮存形式。脂滴在细胞内可以参与脂质代谢、膜转运、蛋白降解和信号传导等。包被蛋白(perilipin)是脂滴表面最丰富的脂质相关蛋白,主要存在于动植物体内,对细胞内脂滴代谢起着重要的调控作用。Cap20是暹罗炭疽菌中包被蛋白的同源蛋白,前期证实Cap20是一个致病相关蛋白,它参与了炭疽菌附着胞膨压形成、脂滴数量和致病性。了解其互作蛋白和互作的生物学意义可能为深入了解脂滴包被蛋白参与的致病分子机制具有重要意义。课题组前期通过酵母双杂交技术在暹罗炭疽菌cDNA文库中筛选到一个与Cap20互作的候选蛋白乙酸激酶,本研究克隆了该乙酸激酶的编码基因,并进行了蛋白结构和同源蛋白聚类分析。结果表明,乙酸激酶编码基因的DNA大小为1312 bp,包括一个内含子,cDNA为1248 bp,编码415个氨基酸,含有一个乙酸激酶结构域,命名为csack。然后构建含6×his标签的原核表达载体PET32a-csack,利用其和含GST标签的pGEX6p-1-Cap20(先前构建)进行蛋白表达和纯化,获得含有6×His标签的融合蛋白csack和含有GST标签的Cap20。通过Pull down验证了Cap20和csack蛋白之间的体外互作。最后,构建含有潮霉素转移酶基因HPH的表达载体PXY203-csack-S和含有氯嘧磺隆抗性基因ILV1的表达载体pCB1532-GFP-Cap20,将它们共同转化暹罗炭疽菌野生型菌株获得转化子。Co-IP(Co-immunoprecipitation)的结果证实Cap20和csack在暹罗炭疽菌中可以相互作用。该结果证实了致病性相关蛋白Cap20和乙酸激酶csack在体外和体内均可发生蛋白互作,可为进一步研究Cap20在暹罗炭疽菌中的致病功能和调控机制奠定基础。

关键词：暹罗炭疽菌 Cap20 csack 蛋白互作验证 Pull down CO-IP

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暹罗炭疽菌（Colletotrichum siamense）中脂滴包被蛋白CsCap20与乙酸激酶csack的互作验证

暹罗炭疽菌（Colletotrichum siamense）中脂滴包被蛋白CsCap20与...

引用

中国植物病理学会2021年学术年会

作者：王娜王记圆宋苗刘文波李志刚李潇林春花缪卫国海南大学热带农林学院热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室

附着胞是炭疽菌等许多重要病原真菌的重要侵染结构,能否形成成熟附着胞与病原菌穿透寄主表皮形成寄生关系具有重要作用。暹罗炭疽菌是我国橡胶树田间优势病原种类,前期研究显示该病原菌的脂滴包被蛋白（CsCap20）与病原真菌附着胞膨压... 详细信息

附着胞是炭疽菌等许多重要病原真菌的重要侵染结构,能否形成成熟附着胞与病原菌穿透寄主表皮形成寄生关系具有重要作用。暹罗炭疽菌是我国橡胶树田间优势病原种类,前期研究显示该病原菌的脂滴包被蛋白（CsCap20）与病原真菌附着胞膨压的形成有关,影响病菌穿透寄主能力和致病力。为了进一步了解该脂滴包被蛋白的调控机制,本课题组前期通过酵母双杂交技术从橡胶树炭疽菌cDNA文库中筛选到16个与CsCap20互作的候选蛋白,本研究从中选取了乙酸激酶csack （Acetate kinase）利用Pull-down和Co-IP （Co-Immunoprecipitation）技术进行体外和体内互作验证。研究结果进一步证明了脂滴包被蛋白CsCap20与乙酸激酶csack确实存在互作关系,为进一步研究炭疽菌脂滴包被蛋白CsCap20是否受到乙酸激酶csack的调控提供基础。

关键词：暹罗炭疽菌 CsCap20 csack 蛋白互作 Pull-down Co-IP

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