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cpne5 might play an important role in the development of central nervous system by interaction with calcium ion

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CPNE5 might play an important role in the development of cen...

中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第八届全国学术会议

作者： Xue-Feng DING~*,Yan-Rui WU,Fei WANG,Yan WU,Shu-Hong LIU,Yong-Qi ZHAO,Wen-Hong FAN~*,Ming FAN~* Department of Brain Protection & Plasticity Research,Beijing Institute of Basic Medical Sciences,Beijing 100850, China

Objective cpne5 is a member of Copines family,and is highly expressed in developing brain of mouse. Previously we found that both of cpne5 mRNA and protein are mainly expressed particularly in the ventricular *** has also been revealed the co-localization of cpne5 with Tuj1 and Nestin on embryonic brain sections and primary cultured ***,its exact role remains unclear,The present study is to explore the exact function of cpne5 in the development of central nervous *** The interaction between cpne5 and calcium ion was identified by detecting cpne5 protein in the supernatant by western blot,the organism was lysised by two kinds of different buffer, one was added EDTA to chelate Ca and the other contains no EDTA,and immunofluorescence analysis was also carried out to detect the localization of cpne5 in *** Both endogenous cpne5 and GFP-cpne5 fusion protein can bind membrane in the presence of Ca in vitro,otherwise it can not bind *** analysis on embryonic brain sections indicated that cpne5 distributes mainly on the *** cpne5 is a Ca- dependent phospholipd-binding protein and might play an important role in the development of central nervous system by interaction with calcium ion.

关键词： cpne5 development calcium Neurocytes

cpne5,a new Ca2+ dependent phospholipids binding protein,works as a negative factor in the neuronal migration

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Cpne5,a new Ca2+ dependent phospholipids binding protein,wor...

中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者： Xuefeng DING,Yan WU,Fei WANG,Yongqi ZHAO,Ying WU,Shuhong LIU,Wenhong FAN,Lingling ZHU,Ming FAN Department of Brain Protection & Plasticity Research,Beijing Institute of Basic Medical Sciences,Beijing 100850, China

cpne5 is a new Ca dependent phospholipids binding *** Previous studies on cpne5 showed that it was mainly expressed in the ventricular zone(VZ).Further investigation demonstrated that cpne5 was expressed both in the neural progenitor cells and newborn neurons in *** indicates that cpne5 might play an important role in neurogenesis of the ventricular *** confirm our presumption,we established in utero electroporation model. With the shRNA expression vector targeting cpne5 mRNA,we knocked down cpne5 expression in the neurocytes in VZ at embryonic day 16(E16d),and the human GFP-cpne5 expression vector was transfected into the neurocytes in VZ at embryonic day 16,and then Postnatal mouse brain at 3 days after birth(P3d,6d after electroporation) were fixed with 4%PFA and then sliced at 30μm *** analysis on slices showed that inhibiting cpne5 expression can remarkably increase the number of neuron migrating to the cortex surface,and overexpressed cpne5 protein can remarkably decrease the number of neuron migrating to the cortex *** indicates that cpne5 may work as a negative factor in the neuronal migration.

关键词： cpne5 neurodevelopment in utero electroporation neuronal migration

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cpne5对NF-κB转录调控活性的影响

军事医学科学院院刊 2009年第3期33卷 237-240页

作者：吴彦瑞王晓文靳雁斌丁学峰刘淑红吴燕范文红范明军事医学科学院基础医学研究所北京100850 空军总医院神经内科北京100036

目的:研究cpne5对TNF-α诱导的NF-κB转录激活活性的影响,并探讨其作用机制。方法:用10 ng/mlTNF-α处理转染了pcDNA3.1或pcDNA3.1-cpne5的HEK293细胞,用双荧光素酶报告基因实验检测不同转染组NF-κB的转录激活活性;Western印迹和细胞... 详细信息

目的:研究cpne5对TNF-α诱导的NF-κB转录激活活性的影响,并探讨其作用机制。方法:用10 ng/mlTNF-α处理转染了pcDNA3.1或pcDNA3.1-cpne5的HEK293细胞,用双荧光素酶报告基因实验检测不同转染组NF-κB的转录激活活性;Western印迹和细胞免疫荧光技术检测cpne5表达上调对NF-κB入核的影响;凝胶阻滞实验研究cpne5表达上调对NF-κB DNA结合能力的影响。结果:cpne5可以显著抑制TNF-α对NF-κB的转录激活活性(Pcpne5不影响TNF-α诱导的NF-κB(P65)入核;CPEN5过表达降低了TNF-α诱导的NF-κB与DNA结合的能力。结论:cpne5通过抑制NF-κB的DNA结合活性抑制TNF-α诱导的NF-κB转录激活活性。

关键词： cpne5 NF-κB DNA结合活性

cpne5蛋白在新生及成年小鼠各组织及其在不同胎龄胎鼠脑组织中的表达

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神经解剖学杂志 2014年第1期30卷 51-54页

作者：靳雁斌司慧远吴彦瑞丁学锋王晓文范文红空军总医院北京100142 解放军188医院潮州521000 军事医学科学院基础医学研究所认知科学研究室北京100850

目的:检测小鼠cpne5蛋白在脑发育过程及不同组织中的表达水平,为cpne5基因的功能研究提供线索。方法:提取新生、成年小鼠多种组织蛋白及11.5,12.5,13.5,14.5,15.5,17.5 d胎鼠脑组织蛋白,用免疫印迹法检测cpne5蛋白表达量。结果:cpne5蛋... 详细信息

目的:检测小鼠cpne5蛋白在脑发育过程及不同组织中的表达水平,为cpne5基因的功能研究提供线索。方法:提取新生、成年小鼠多种组织蛋白及11.5,12.5,13.5,14.5,15.5,17.5 d胎鼠脑组织蛋白,用免疫印迹法检测cpne5蛋白表达量。结果:cpne5蛋白表达于新生4 d小鼠的全部受检组织,大、小脑表达量最少,眼和肺的表达量高。成年小鼠检测结果相似,cpne5蛋白的组织分布广泛,但脑组织含量低,表达量以卵巢、睾丸为高,其次为肺和心脏。胎脑的cpne5蛋白表达量在胎鼠11.5、12.5 d较高,13.5 d降低,14.5至17.5 d再次升高,出生后又降低。结论:cpne5蛋白在新生和成年小鼠广泛表达于各种受检组织,脑组织表达量最低;小鼠胎脑发育过程中cpne5蛋白表达呈现先高后低,再升高再降低的变化趋势。

关键词：小鼠 cpne5 蛋白免疫印迹蛋白表达谱

cpne5的A结构域对肿瘤坏死因子α诱导核因子κB活化的影响

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肿瘤学杂志 2008年第12期14卷 985-988页

作者：吴彦瑞王晓文靳雁斌吴海涛丁学峰刘淑红吴燕范文红范明军事医学科学院基础医学研究所北京100850 空军总医院北京100036

[目的]研究cpne5的A结构域(AD)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)激活核因子κB(NF-κB)转录活性的调控作用。[方法]用PCR法扩增AD序列,将其构建EGFP-N1载体上,在真核细胞中表达融合蛋白AD-GFP。以连有κB序列和表达水平受κB序列调控的荧光素... 详细信息

[目的]研究cpne5的A结构域(AD)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)激活核因子κB(NF-κB)转录活性的调控作用。[方法]用PCR法扩增AD序列,将其构建EGFP-N1载体上,在真核细胞中表达融合蛋白AD-GFP。以连有κB序列和表达水平受κB序列调控的荧光素酶基因的质粒为报告基因载体,将EGFP-N1、AD-GFP质粒分别与报告基因共转染到HEK293细胞中,经TNF-α处理后,用双荧光素酶报告基因系统测定荧光素酶的活性,检测它们对NF-κB转录活性的影响。[结果]构建了AD-GFP质粒;A结构域能够显著抑制NF-κB转录活性(P5);AD对NF-κB转录活性的抑制具有剂量依赖性。[结论]cpne5的A结构域能够剂量依赖性抑制NF-κB的转录激活活性。

关键词： cpne5 NF—κB 肿瘤坏死因子

外源表达人cpne5通过内质网应激反应诱导细胞凋亡

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外源表达人CPNE5通过内质网应激反应诱导细胞凋亡

中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第七届全国学术会议

作者：吴彦瑞王晓文丁学锋范文红范明军事医学科学院基础医学研究所

cpne5是在人胎脑中首次发现的一个基因。cpne5所属的Copines蛋白家族是新近发现的一类进化保守的Ca依赖性磷脂结合蛋白。Copines蛋白目前哺乳动物中共发现8个Copines家族成员,cpne5(copine V)是其中之一。目的探讨外源表达人cpne5诱导... 详细信息

cpne5是在人胎脑中首次发现的一个基因。cpne5所属的Copines蛋白家族是新近发现的一类进化保守的Ca依赖性磷脂结合蛋白。Copines蛋白目前哺乳动物中共发现8个Copines家族成员,cpne5(copine V)是其中之一。目的探讨外源表达人cpne5诱导细胞发生内质网应激反应的机制。我们在前期实验中发现,cpne5蛋白定位在HEK293细胞的细胞膜和内质网上,并可以引起细胞凋亡的现象。在此我们进一步研究了cpne5诱导细胞凋亡的具体机制。方法用脂质体介导法转染,共设两组,对照组转染空载体pcDNA4,实验组即cpne5组,转染重组质粒pcDNA4-cpne5。取60%-80%融合生长、状态良好的HEK293细胞,用无血清培养基清洗细胞2次。将质粒5μg与脂质体10μL分别与无血清培养基混合,室温静置5 min,再充分混匀两种混合物,室温静置20 min,均匀滴入相应培养皿中,摇匀;37℃培养5 h,换完全培养基。继续培养48 h后检测基因表达。细胞转染48 h后,收集5×106个细胞,用TRIzol试剂盒提取总RNA。取2μg总RNA以oligo dT18为引物进行反转录。以cDNA产物为模板进行PCR反应,使用特异性药物引物,检测GRP78、CHOP、JNK1以及内参18 S。产物在1.2%的琼脂糖凝胶上进行电泳和鉴定。用常规Western-blot方法检测各转染组的蛋白表达水平,ECL试剂显色在暗室进行X片曝光,显影、定影后观察结果。结果在蛋白水平上鉴定了外源cpne5融合蛋白在真核细胞中的表达;外源cpne5的表达上调内质网标志蛋白GRP78的表达;外源cpne5的表达上调内质网应激关键分子CHOP的表达;外源cpne5的表达上调JNK1的表达。结论外源表达人cpne5可以诱导HEK293细胞发生内质网应激反应,进而导致细胞凋亡。

关键词： cpne5 内质网应激 GRP78 JNK1 HEK293

Zfp326调控LncRNA NR030777在百草枯致神经退行性损害中的作用及机制

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Zfp326调控LncRNA NR030777在百草枯致神经退行性损害中的作用及...

作者：林清霞福建医科大学

学位级别：硕士

目的基于体外细胞层面,探讨Zfp326在PQ致神经细胞损害中对NR30777/cpne5表达变化中的作用以及Zfp326/NR30777/cpne5三者在百草枯致神经细胞损害中的作用机制方法(1)使用si-Zfp326转染N2a、MN9D后,以0、100、300μM PQ分别处理N2a、MN9D... 详细信息

目的基于体外细胞层面,探讨Zfp326在PQ致神经细胞损害中对NR30777/cpne5表达变化中的作用以及Zfp326/NR30777/cpne5三者在百草枯致神经细胞损害中的作用机制方法(1)使用si-Zfp326转染N2a、MN9D后,以0、100、300μM PQ分别处理N2a、MN9D细胞24、36 h,q RT-PCR、WB检测Zfp326、NR30777、cpne5基因m RNA及ZFP326、cpne5蛋白表达水平变化(n=3);(2)以放线菌素D(Actinomycin D,Act D)处理si-Zfp326转染后的N2a细胞,q RT-PCR检测不同时间点NR30777与cpne5 m RNA含量,回归分析其稳定性(n=3);(3)以si-Zfp326转染N2a、MN9D细胞,24 h后以0、100、300μM PQ处理N2a细胞24、36 h,CCK-8检测细胞增殖(n=6);(4)以si-Zfp326转染N2a细胞,24 h后以0、100、300μM PQ处理N2a细胞24 h,流式细胞术检测细胞凋亡;WB检测SEPTIN2、DBC-1蛋白表达水平变化(n=3);(5)使用TRAP技术下拉NR30777,采用MS、NGS检测与NR30777结合的蛋白质(RBPs)和RNA;应用GO、Pathway分析与NR30777结合的分子;(6)以si-Zfp326转染N2a细胞,24 h后以0、100、300μM PQ处理N2a细胞36 h,WB检测SF3B3蛋白表达水平变化(n=3);(7)以si-Sf3b3转染N2a细胞,24 h后以0、100、300μM PQ处理N2a细胞24 h,q RT-PCR检测Sf3b3、NR30777 m RNA表达水平变化(n=3)。结果(1)转染si-Zfp326,Zfp326基因m RNA及蛋白表达下调(Pcpne5基因m RNA及蛋白表达无变化。(2)转染si-Zfp326,NR30777稳定性下降,降解速率加快;cpne5 m RNA稳定性无变化。(3)PQ抑制N2a、MN9D增殖,并存在剂量反应关系;转染si-Zfp326,细胞增殖活性升高(P5)与NR30777结合的蛋白质和RNA广泛参与细胞的各种生命活动,其中主要参与亨廷顿病、帕金森病等神经退行性疾病以及细胞的氧化应激过程。(6)PQ促进SF3B3蛋白表达升高;转染si-Zfp326,SF3B3蛋白表达下调(P5)。(7)转染si-Sf3b3,Sf3b3 m RNA表达下调(P<0.01);NR30777表达下调(P<0.01)。结论根据以上结果,可得出以下结论(1)在PQ致神经细胞损害中,敲低Zfp326通过下调m RNA前体剪接因子SF3B3的表达以及降低NR30777稳定性来调控NR30777表达。(2)在PQ致神经细胞损害中,敲低Zfp326可逆转PQ引起的神经细胞增殖活力下降以及降低神经细胞凋亡的比例。(3)与NR30777结合的蛋白质和RNA主要参与亨廷顿病、帕金森病等神经退行性疾病以及细胞的氧化应激过程,NR30777在PQ致神经细胞损害中至关重要。

关键词：百草枯 Zfp326 NR030777 cpne5 表观遗传毒理学