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气虚血瘀型corti器毛细胞损伤动物模型的建立

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中国组织工程研究 2016年第49期20卷 7384-7390页

作者：彭桂原李松键杨黎杨朝杰谭串广东省中医院耳鼻喉科广东省广州市510120

背景:随着中医药对耳鸣耳聋的疗效越来越受到重视,但对其机制尚缺乏系统深入的研究,利用动物模型进行中医药治疗耳鸣耳聋的机制探索是非常有意义的研究方向。目的:建立一种气虚血瘀证型的corti器毛细胞损伤动物(豚鼠)模型并评价其效果... 详细信息

背景:随着中医药对耳鸣耳聋的疗效越来越受到重视,但对其机制尚缺乏系统深入的研究,利用动物模型进行中医药治疗耳鸣耳聋的机制探索是非常有意义的研究方向。目的:建立一种气虚血瘀证型的corti器毛细胞损伤动物(豚鼠)模型并评价其效果。方法:12只成年豚鼠按随机数字表法分为正常对照组和造模组。造模组首先采用改良耗气破气加饥饱失常法处理15 d进行气虚造模,之后以光化学反应法复制血瘀corti器毛细胞损伤模型;正常对照组不干预。造模后检测两组豚鼠血清的D-木糖浓度,行耳声发射DPOAE测试,并观察光镜下耳蜗组织形态。结果与结论:(1)与正常对照组相比,造模组血清D-木糖浓度较低(Pcorti器内毛细胞变性、坏死或缺失;(4)提示:模型成功模拟了豚鼠气虚血瘀型corti器毛细胞损伤的过程,未来可应用于中医药治疗耳鸣耳聋特别是突发性耳聋的机制研究。

关键词：毛细胞,听觉 corti器耳鸣豚鼠模型,动物组织工程实验动物细胞损伤与修复模型气虚血瘀 corti器毛细胞损伤动物模型

外柱细胞软化对corti器感音影响的生物力学研究

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中国医学物理学杂志 2022年第1期39卷 109-116页

作者：马文凯徐旭姚文娟上海大学力学与工程科学学院上海200444 上海市应用数学和力学研究所上海200444

corti器的感音过程容易受到内部结构属性变化的影响。外柱细胞血管舒张刺激磷蛋白缺失会减缓肌动蛋白丝的形成,从而产生听力延迟。本研究运用COMSOL建立三维有限元模型研究肌动蛋白缺失导致外柱细胞软化时,corti器感音过程中基底膜和外... 详细信息

corti器的感音过程容易受到内部结构属性变化的影响。外柱细胞血管舒张刺激磷蛋白缺失会减缓肌动蛋白丝的形成,从而产生听力延迟。本研究运用COMSOL建立三维有限元模型研究肌动蛋白缺失导致外柱细胞软化时,corti器感音过程中基底膜和外毛细胞与Deiters细胞结合点的力学行为变化。结果表明,外柱细胞软化会削弱外毛细胞主动力对基底膜位移增益的放大作用,但削弱作用并不会立即产生,corti器存在维持正常功能的"缓冲"阶段。在100 dB和120 dB之间可能存在一个声压级临界值,在该临界值两侧外柱细胞软化对基底膜应力变化的影响是截然相反的。另外外柱细胞软化对不同外毛细胞与Deiters细胞结合点力学行为的影响也不同,位移增益优先级会因此产生改变。

关键词： corti器外柱细胞软化生物力学三维数值模拟

豚鼠耳蜗corti器铺片方法改进与免疫荧光染色比较研究

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中华耳科学杂志 2018年第4期16卷 499-502页

作者：方舒胡一勇吕萍于宁川北医学院附属医院耳鼻咽喉科南充637000 解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科耳鼻咽喉研究所北京100853

目的提高本实验室豚鼠耳蜗基底膜免疫荧光染色铺片的实验效率,为内耳研究探索一种更为快捷的免疫荧光染色方法。方法 15只成年Dunkin Hartley豚鼠注射过量1%戊巴比妥钠处死,断头取双侧耳蜗,右侧为对照组,采用常规耳蜗基底膜免疫荧光染... 详细信息

目的提高本实验室豚鼠耳蜗基底膜免疫荧光染色铺片的实验效率,为内耳研究探索一种更为快捷的免疫荧光染色方法。方法 15只成年Dunkin Hartley豚鼠注射过量1%戊巴比妥钠处死,断头取双侧耳蜗,右侧为对照组,采用常规耳蜗基底膜免疫荧光染色铺片方法,左侧为实验组,采用减少了组织固定、免疫荧光染色一抗孵育及漂洗时间的改良耳蜗基底膜免疫荧光染色铺片方法,激光共聚焦扫描显微镜在20倍、40倍、63倍镜下观察并比较两组经荧光素标记的基底膜corti器上的肌球蛋白7a或神经丝蛋白的表达情况。结果对照组耗时37.5小时,实验组耗时5.25小时。两种染色方法均能清楚显示肌球蛋白7a或神经丝蛋白的表达情况,成像效果未见明显差异。结论快速耳蜗基底膜铺片免疫荧光染色方法耗时短、可重复性好,值得在耳科学基础研究尤其是内耳形态研究领域推广。

关键词：免疫荧光染色耳蜗 corti器豚鼠

豚鼠中耳感染致corti器P物质受体阳性细胞的表达

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中华耳鼻咽喉科杂志 2004年第2期39卷 93-96页

作者：邱建华刘顺利苏钰乔莉第四军医大学西京医院全军耳鼻咽喉专科中心西安710032

目的　应用P物质受体 (substancePreceptor,SPR)的多克隆抗体观察豚鼠中耳急性感染后内耳corti器SPR阳性细胞的表达。方法　豚鼠一侧耳经鼓膜注射 1× 10 8个 /L金黄色葡萄球菌液 ,制备急性化脓性中耳炎模型 ,3d后灌注固定 ,取耳蜗基底... 详细信息

目的　应用P物质受体 (substancePreceptor,SPR)的多克隆抗体观察豚鼠中耳急性感染后内耳corti器SPR阳性细胞的表达。方法　豚鼠一侧耳经鼓膜注射 1× 10 8个 /L金黄色葡萄球菌液 ,制备急性化脓性中耳炎模型 ,3d后灌注固定 ,取耳蜗基底膜铺片 ,行SPR免疫组织化学染色。结果　光镜下发现中耳急性感染后豚鼠耳蜗基底膜表达一种非正常耳蜗组织细胞本身的SPR阳性细胞 ,这些细胞与内、外毛细胞 ,支持细胞 ,血管内皮细胞 ,螺旋神经节细胞等在形态部位上存在明显的差异。阳性细胞呈散在分布 ,主要集中在基底膜的游离缘 ,体积较大 ,约为红细胞的 6～ 12倍 ,每个细胞均有多个突起 ,形成类神经元状。细胞呈SPR强阳性。在阳性细胞的胞质内可见空泡或颗粒状的结构。结论　中耳急性感染可诱发豚鼠corti器表达非正常基底膜所有的SPR阳性的非特异性反应细胞。

关键词：豚鼠中耳感染 corti器 P物质受体阳性细胞化脓性中耳炎

顺铂作用下沙鼠耳蜗螺旋神经节神经元和corti器细胞的凋亡

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中华耳鼻咽喉科杂志 2003年第2期38卷 98-100,I002页

作者：许辉杰黄魏宁卫生部北京医院耳鼻咽喉科 100730

目的　探讨顺铂是否可引起沙鼠耳蜗螺旋神经节 (spiralganglion ,SG)神经元和corti器细胞的凋亡。方法　对沙鼠进行顺铂连续腹腔注射 ,每日 4mg kg体重 ,分别于健康对照组及给药 4、5、6、7d各处死沙鼠 12只 ,取左侧耳蜗 ,每组动物取 1... 详细信息

目的　探讨顺铂是否可引起沙鼠耳蜗螺旋神经节 (spiralganglion ,SG)神经元和corti器细胞的凋亡。方法　对沙鼠进行顺铂连续腹腔注射 ,每日 4mg kg体重 ,分别于健康对照组及给药 4、5、6、7d各处死沙鼠 12只 ,取左侧耳蜗 ,每组动物取 10只耳蜗做平行蜗轴的石蜡切片 ,另 2只耳蜗做底回蜗轴及基底膜超薄切片。通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术 (terminaldeoxynucleotidyltransferase mediateddUTPnickendlabelingmethod ,TUNEL)及透射电镜检测连续用药不同时间后底回SG及corti器的细胞凋亡情况。结果　连续应用顺铂 5～ 7d ,在透射电镜下可以观察到底回SG神经元及外毛细胞中出现凋亡特征性病理改变 ,TUNEL标记的石蜡切片中可见给药 5d后SG和corti器出现的阳性细胞明显高于健康对照组 ,给药 6～ 7d阳性细胞进一步增加。

关键词：顺铂沙鼠耳蜗螺旋神经节神经元 corti器细胞凋亡脱噬作用原位缺口末端标记

新生SD大鼠G418耳蜗corti器离体损伤模型的建立

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陕西医学杂志 2008年第10期37卷 1275-1277,1326页

作者：吴保俊祝康韦俊荣郑国玺杨广笑王全颖西安交通大学医学院第二附属医院耳鼻喉科西安710004 西安华广生物工程有限公司

目的:建立毒性蛋白G418损坏新生大鼠耳蜗毛细胞的离体培养试验模型。方法:应用耳蜗基底膜分离取材技术,耳蜗器官离体培养技术和毛细胞免疫组化染色技术定量观察了G418对新生SD小鼠耳蜗毛细胞的损害。结果:G418对耳蜗毛细胞的有明显的损... 详细信息

目的:建立毒性蛋白G418损坏新生大鼠耳蜗毛细胞的离体培养试验模型。方法:应用耳蜗基底膜分离取材技术,耳蜗器官离体培养技术和毛细胞免疫组化染色技术定量观察了G418对新生SD小鼠耳蜗毛细胞的损害。结果:G418对耳蜗毛细胞的有明显的损害,200μg/ml的终浓度,内外毛细胞均有不同程度损害,以外毛细胞为著。结论:G418可用于建立耳蜗corti器离体损伤模型。

关键词：耳蜗 corti器 @G418

模拟失重和噪声对大鼠听功能及耳蜗corti器损伤的协同作用

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听力学及言语疾病杂志 2016年第2期24卷 162-166页

作者：吴玮陈娜韩浩伦王刚王鸿南周丽斌李保卫丁瑞英解放军306医院耳鼻咽喉头颈外科北京100101

目的探讨模拟失重和噪声对大鼠听功能及耳蜗corti器损伤的协同作用。方法 48只大鼠随机分为空白组、失重组、噪声组和失重+噪声组,每组12只。失重组以Morey-Holton法模拟失重环境,噪声组暴露的噪声环境为模拟航天载人飞船内复合噪声,包... 详细信息

目的探讨模拟失重和噪声对大鼠听功能及耳蜗corti器损伤的协同作用。方法 48只大鼠随机分为空白组、失重组、噪声组和失重+噪声组,每组12只。失重组以Morey-Holton法模拟失重环境,噪声组暴露的噪声环境为模拟航天载人飞船内复合噪声,包括72±2dB SPL的持续稳态噪声和160dB SPL的脉冲噪声,失重+噪声组则同时暴露于上述失重及噪声环境中,空白组常规饲养,不做任何处理。分别于暴露1周和2周后,每组随机选出6只大鼠行ABR阈值检测后取材行HE染色、免疫荧光(DAPI)染色及扫描电镜观察耳蜗的形态学变化。结果暴露2周后大鼠ABR阈值较暴露1周时升高,失重+噪声组ABR阈值最高(Pcorti器均有不同程度的损伤,失重+噪声组最严重。免疫荧光染色示暴露1周后大鼠耳蜗毛细胞死亡方式以肿胀坏死为主,失重+噪声组最严重(肿胀率10%),其次为噪声组(肿胀率3.33%);暴露2周后大鼠耳蜗外毛细胞以核缺失为主,失重+噪声组缺失率最高(缺失率13.6%),其次为噪声组(缺失率12.7%),失重组毛细胞缺失以内毛细胞为主。扫描电镜示,失重+噪声组毛细胞静纤毛损伤最严重,其次为噪声组,再次为失重组。结论模拟失重和噪声环境对大鼠听功能的影响有协同作用,且这种协同作用对耳蜗corti器有显著的损伤作用。

关键词：模拟失重噪声 corti器听性脑干反应

耳蜗corti器及微血管肾上腺素能神经纤维的分布特点

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第四军医大学学报 2002年第19期23卷 1776-1779页

作者：刘顺利乔莉陈福权苏钰黄维国邱建华第四军医大学西京医院全军耳鼻咽喉专科中心陕西西安710033

目的　探讨耳蜗 corti器及微血管肾上腺素能纤维的分布特点 .方法　采用免疫组化 ABC技术及针对肾上腺素能合成过程中不同酶的多克隆抗体 ,包括酪氨酸羟化酶(TH ) ,多巴胺β-羟化酶 (DBH)及苯乙醇胺 - N -甲基转移酶(PNMT) ,研究耳蜗 Co... 详细信息

目的　探讨耳蜗 corti器及微血管肾上腺素能纤维的分布特点 .方法　采用免疫组化 ABC技术及针对肾上腺素能合成过程中不同酶的多克隆抗体 ,包括酪氨酸羟化酶(TH ) ,多巴胺β-羟化酶 (DBH)及苯乙醇胺 - N -甲基转移酶(PNMT) ,研究耳蜗 corti器和蜗轴螺旋动脉及耳蜗微血管不同类型肾上腺素能神经的分布 .结果　蜗轴螺旋动脉及其放射状小动脉含有丰富的 TH免疫反应阳性的神经纤维 ,动脉近端 TH阳性纤维成致密的神经网 ,一些纵行的神经纤维聚集成神经束沿血管的长轴走行 ,但血管阳性纤维的数量及密度明显不同 .DBH阳性纤维的数量很少 ,未见 PNMT阳性纤维 .在耳蜗 corti器 ,TH阳性的纤维分成两类 ,一类阳性纤维定位于内螺旋束 ,隧道螺旋束及隧道横贯纤维组成类似“铁轨样”结构 .在外毛细胞区偶可见 TH阳性的终末 ;另一类纤维沿耳蜗 corti器的微血管走行 ,包绕血管形成致密的神经网 .corti器微血管较少见到 DBH阳性的纤维 ,未见 PNMT阳性纤维 .结论　耳蜗微血管的肾上腺素能神经支配主要是多巴胺 ,而肾上腺素、去甲肾上腺素的作用甚微 .

关键词：耳蜗毛细血管肾上腺素能免疫组织化学 corti器

一种快速简便的corti器扫描电镜样品制备法

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电子显微学报 1998年第4期17卷 343-344页

作者：李向党林顺长西安第四军医大学电镜室

一种快速简便的Ｃｏｒｔｉ器扫描电镜样品制备法李向党１林顺长２（西安第四军医大学电镜室１，西京医院耳鼻喉科２，西安７１００３２）有时我们必须用扫描电镜来观察新生小鼠Ｃｏｒｔｉ器的形态。由于新生小鼠的Ｃｏｒｔｉ器非常小，... 详细信息

一种快速简便的Ｃｏｒｔｉ器扫描电镜样品制备法李向党１林顺长２（西安第四军医大学电镜室１，西京医院耳鼻喉科２，西安７１００３２）有时我们必须用扫描电镜来观察新生小鼠Ｃｏｒｔｉ器的形态。由于新生小鼠的Ｃｏｒｔｉ器非常小，必须在光镜下定位取材。我们通常采用...

关键词：扫描电镜样品 corti器制备生物医学