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Th17/Treg balance and factors related to autoimmune hepatitis

Rheumatology & Autoimmunity 2022年第4期2卷 221-229页

作者： Miao Xue Junshuai Feng Aimin Yang Liping Gao Xuebin Peng Ni Jiang Xiaorong Mao Department of Rheumatology and Immunology The First Hospital of Lanzhou UniversityLanzhouChina Department of Infectious Diseases Gansu Provincial HospitalLanzhouChina Department of Medicine&Therapeutics The Chinese University of Hong KongHong KongChina Department of Infectious Diseases The First Hospital of Lanzhou UniversityLanzhouChina

Background:Although Th17 cells and regulatory T cells play critical roles in autoimmune hepatitis,the balance between them in acute and chronic immune hepatitis is not well‐studied.The objective of this study was to explore the role of Th17/Treg balance in autoimmune hepatitis.Methods:Thirty female Wistar rats were randomly divided into the following three groups:acute model(AC),chronic model(CC),and healthy control(HC).Aspartate aminotransferase,alanine aminotransferase,and bilirubin levels were measured.Peripheral blood interleukin(IL)‐17,IL‐6,IL‐10,and transforming growth factor‐βcytokine levels were also assessed.Flow cytometry was used to detect changes in the Th17 cell and Treg cell frequency,and the Th17/Treg ratio was calculated.Results:The frequency of Th17 cells and Treg cells were both increased(p<0.05)and the Th17/Treg ratio was higher in the AC group compared with those in the HC group(p<0.05).Th17 cell levels were significantly lower and Treg cell levels were significantly higher in the CC group,compared with those in the AC group(p<0.05).In addition,the Th17/Treg ratio was lower in the CC group compared with that in the HC group(p<0.05).Conclusion:The Th17/Treg ratio was increased in the acute immune liver injury model and decreased in the chronic liver injury model.Th17/Treg imbalance may play a critical role in liver injury occurrence and development.

关键词： α‐galcer autoimmune hepatitis ConA Th17 cells Treg cells

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覆盆子提取物对ConA致小鼠急性肝损伤的保护作用研究

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中国中药杂志 2019年第4期44卷 774-780页

作者：季宇彬包晓威单宇杨淑贤张丽梅侯思远李立勇曹丽哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心黑龙江哈尔滨150076 中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所北京100193 新时代健康产业(集团)有限公司北京102206

该实验研究了覆盆子提取物的抗氧化能力及其对ConA致小鼠肝损伤的保护作用。将雄性Balb/C小鼠随机分为6组:正常组,模型组,双环醇阳性对照组(200 mg·kg^(-1))及覆盆子提取物低(200 mg·kg^(-1))、中(400 mg·kg^(-1))、高(800 mg·kg^(-... 详细信息

该实验研究了覆盆子提取物的抗氧化能力及其对ConA致小鼠肝损伤的保护作用。将雄性Balb/C小鼠随机分为6组:正常组,模型组,双环醇阳性对照组(200 mg·kg^(-1))及覆盆子提取物低(200 mg·kg^(-1))、中(400 mg·kg^(-1))、高(800 mg·kg^(-1))剂量组。各组按照体质量灌胃给药,1次/d,7 d后,除正常组外其余各组尾静脉注射ConA溶液(20 mg·kg^(-1))建立急性肝损伤模型,8 h后处取血、取材。计算脏器指数;检测血清中ALT,AST,LDH活性及肝组织中SOD,MDA,CAT,GSH水平; HE染色观察肝组织病理变化; Western blot法检测Bax,Bcl-2,Nrf2,Keap-1蛋白的表达; CAA法测定覆盆子提取物抗氧化活性。结果表明,与模型组相比,覆盆子提取物给药组可明显改善肝脏病理变化,可显著降低肝损伤小鼠血清中ALT,AST,LDH活性(PConA所致小鼠急性肝损伤有明显的保护作用,并与其抗氧化活性相关。

关键词：覆盆子 ConA 急性肝损伤保护作用抗氧化

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六味五灵片对刀豆蛋白A诱导的小鼠急性免疫性肝损伤的保护作用研究

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中国药理学通报 2017年第1期33卷 133-140页

作者：刘慧敏韩延忠郭玉明牛明张雅铭沈宏辉王伽伯柏兆方肖小河解放军第三〇二医院全军中医药研究所&中西医结合诊疗与研究中心北京100039 承德医学院河北承德067000

目的研究六味五灵片(Liuweiwuling Tables,LWWL)对刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的小鼠急性免疫性肝损伤的保护作用及机制。方法将小鼠随机分成正常组对照组、模型组、双环醇组(Bicyclol,39 mg·kg^(-1))、六味五灵片低剂量组(8 ... 详细信息

目的研究六味五灵片(Liuweiwuling Tables,LWWL)对刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的小鼠急性免疫性肝损伤的保护作用及机制。方法将小鼠随机分成正常组对照组、模型组、双环醇组(Bicyclol,39 mg·kg^(-1))、六味五灵片低剂量组(8 g·kg^(-1))、六味五灵片高剂量组(16 g·kg^(-1)),各给药组每天给药1次,连续7 d,末次给药1 h后,除正常对照组外,其他各组尾静脉注射Con A(15 mg·kg^(-1))制备小鼠急性免疫性肝损伤模型。HE染色观察小鼠肝组织病理变化;比色法检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL);实时定量RT-q PCR测定法检测肝组织中白介素-12(IL-12)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)mRNA的表达;流式细胞术(FCM)观察脾脏Th1(IFN-γ)/Th2(IL-4)细胞的变化;免疫印迹(Western blot)法检测肝组织中Th1/Th2转录因子T-bet/GATA-3的表达。结果与正常对照组相比,模型组小鼠血清中ALT、AST、TBIL明显升高,小鼠肝组织病理损伤严重,肝细胞大量坏死、凋亡,表明造模成功。与模型组比较,六味五灵片低、高剂量组小鼠血清中ALT、AST、TBIL的水平明显降低;脾脏中Th1细胞减少,Th2细胞增多。肝组织中IL-12、IFN-γ、TNF-α的mRNA表达下降,IL-4、IL-10的mRNA表达上升,GATA-3蛋白表达上调,T-bet蛋白表达无明显变化。结论六味五灵片通过调节Th1/Th2的平衡,保护Con A诱导的急性免疫性肝损伤。

关键词：六味五灵片 ConA 急性免疫性肝损伤 Th1/Th2免疫平衡保肝 T-bet/GATA-3

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Anti-CD24抗体促进刀豆蛋白A诱导的小鼠急性肝损伤的实验研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第4期36卷 281-287页

作者：刘宏宇海蕾项杰樊亚童李雄飞张华龚菊贞张学军天津医科大学基础医学院免疫学系天津市细胞和分子免疫重点实验室国家教育部免疫微环境与疾病重点实验室300070

目的：探究anti-CD24中和抗体对刀豆蛋白A（ ConA）诱导急性肝损伤的调节作用及其可能的分子机制。方法建立ConA诱导小鼠急性肝损伤的实验模型,观察anti-CD24中和抗体（200μg/鼠）和ConA（10 mg/kg）联合注射组小鼠肝脏解剖学上的改变... 详细信息

目的：探究anti-CD24中和抗体对刀豆蛋白A（ ConA）诱导急性肝损伤的调节作用及其可能的分子机制。方法建立ConA诱导小鼠急性肝损伤的实验模型,观察anti-CD24中和抗体（200μg/鼠）和ConA（10 mg/kg）联合注射组小鼠肝脏解剖学上的改变；HE染色观察小鼠肝组织损伤程度；血清学方法检测小鼠肝功能指标谷丙转氨酶（ ALT）的变化；流式细胞术分析anti-CD24中和抗体对小鼠肝内Kupffer细胞（ KC）亚型分布的影响；胞内染色分析anti-CD24中和抗体对M1型KC细胞分泌TNF-α的影响。结果从解剖学上,anti-CD24中和抗体和ConA联合注射组（实验组）肝组织肿大；HE染色观察实验组小鼠肝脏出现明显的肝细胞点状坏死和炎性细胞浸润；实验组小鼠血清ALT水平显著高于对照组（P〈0.001）。流式细胞术分析表明：实验组小鼠M1型KC细胞百分数显著增加（P〈0.01）,M2型KC细胞百分数变化不明显。胞内染色流式细胞术表明：anti-CD24中和抗体显著促进小鼠KC细胞分泌TNF-α（P〈0.001）。结论 Anti-CD24中和抗体可促进ConA诱导的小鼠急性肝损伤,这可能与CD24中和抗体促进M1型KC细胞分泌TNF-α有关,其免疫机制与信号传导通路正在进一步探讨之中。

关键词： CD24分子 ConA 急性肝损伤 Kupffer细胞肿瘤坏死因子-α

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左旋紫草素对ConA诱导小鼠免疫性肝损伤的保护作用

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中成药 2021年第10期43卷 2841-2845页

作者：努力比亚·阿不都克尤木胡利萍秦冬梅鲁晓擘新疆医科大学第一附属医院感染科新疆乌鲁木齐830000 石河子大学药学院新疆石河子832002

目的研究左旋紫草素对ConA诱导小鼠免疫性肝损伤保护作用。方法采用LPS刺激RAW264.7细胞,建立体外炎症模型,检测细胞培养液上清中NO水平。采用ConA尾静脉注射法建立小鼠免疫性肝损伤模型,将小鼠随机分为正常组,模型组,阳性药组(甘草酸二... 详细信息

目的研究左旋紫草素对ConA诱导小鼠免疫性肝损伤保护作用。方法采用LPS刺激RAW264.7细胞,建立体外炎症模型,检测细胞培养液上清中NO水平。采用ConA尾静脉注射法建立小鼠免疫性肝损伤模型,将小鼠随机分为正常组,模型组,阳性药组(甘草酸二铵),左旋紫草素低、中、高剂量组,每组10只,检测脾脏指数,血清AST、ALT、AKP、GST水平,肝脏组织匀浆T-SOD活性及MDA、白蛋白水平,ELISA法检测小鼠血清IFN-γ、TNF-α、IL-1β水平,观察小鼠肝脏组织病理切片。结果左旋紫草素可改善小鼠肝脏、脾脏指数,降低小鼠血清AST、ALT、AKP、GST水平(P<0.05),降低肝脏组织匀浆MDA水平,增加T-SOD活性,升高白蛋白水平,减少炎症因子IFN-γ、TNF-α释放,改善小鼠肝脏组织病理性损伤。结论左旋紫草素体外具有抗炎活性,同时对小鼠肝损伤有一定保护作用,其机制可能与减少TNF-α释放有关。

关键词：左旋紫草素免疫性肝损伤 ConA TNF-α

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ConA对CD4^+CD25^+调节性T细胞早期活化和功能的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第2期26卷 118-120,124页

作者：胡义平李晓娟刘叔文南方医科大学药学院广东广州510515

目的:观察常用丝裂原ConA对CD4+CD25+调节性T细胞抑制功能的影响与早期活化标志CD69之间的关系。方法:用免疫磁珠分离BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞、CD4+CD25-效应性T细胞,加入不同浓度的ConA,12 h后收集细胞,流式细胞术分析其C... 详细信息

目的:观察常用丝裂原ConA对CD4+CD25+调节性T细胞抑制功能的影响与早期活化标志CD69之间的关系。方法:用免疫磁珠分离BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞、CD4+CD25-效应性T细胞,加入不同浓度的ConA,12 h后收集细胞,流式细胞术分析其CD69的表达。CFSE标记CD4+CD25-效应性T细胞,按2∶1比例与CD4+CD25+调节性T细胞共同培养,培养同时加ConA,3 d后流式细胞仪分析ConA对CD4+CD25+调节性T细胞抑制CD4+CD25-效应性T细胞增殖的影响。结果:ConA能剂量依赖性地升高CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-效应性T细胞CD69的表达,对两群细胞CD69的升高表现出了相似的作用;另外,ConA在上述浓度能剂量依赖激活CD4+CD25+调节性T细胞的抑制功能。结论:ConA在体外对CD4+CD25+调节性T细胞活化和功能具有促进作用。ConA能一定程度模拟抗原,因而可用于评价药物对调节性T细胞的活化和功能影响。

关键词： ConA CD4+CD25+调节性T细胞 CD69 免疫抑制

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巴戟天多糖分离、理化性质及对人肝细胞影响

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国际药学研究杂志 2020年第7期47卷 566-573页

作者：谷枫徐慧琳刘桂馨麻浩赵妍单俊杰高月求中央民族大学体育学院北京100081 军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所北京100850 解放军总医院第五医学中心信息科北京100071 上海中医药大学曙光医院肝病科上海201203

目的对巴戟天粗多糖MOP-60和MOP-60-100进行分离和纯化获得多糖组分和成分,测定其理化性质,研究其对人LO2细胞的增殖和抗损伤作用。方法 MOP-60和MOP-60-100分别采用DEAE-纤维素柱色谱分离得到MOP-60-A、MOP-60-B、MOP-60-100-A、MOP-60... 详细信息

目的对巴戟天粗多糖MOP-60和MOP-60-100进行分离和纯化获得多糖组分和成分,测定其理化性质,研究其对人LO2细胞的增殖和抗损伤作用。方法 MOP-60和MOP-60-100分别采用DEAE-纤维素柱色谱分离得到MOP-60-A、MOP-60-B、MOP-60-100-A、MOP-60-100-B和MOP-60-100-C共5个多糖组分;MOP-60-A又经透析获得均一多糖MOP-60-I;MOP-60-100-B又经Sephadex G-100柱色谱分离和纯化,得到MOP-60-100-Ⅰ和MOP-60-100-Ⅱ2个均一多糖。采用凝胶渗透色谱法测定多糖组分的相对分子质量分布和成分的峰高相对分子质量;采用酸水解、PMP衍生及毛细管电泳法测定单糖组成;采用MTT法,评价这些多糖组分和成分对人LO2肝细胞的细胞增殖及抗ConA(concanavalin A)和H2O2诱导LO2细胞损伤的作用。结果MOP-60-A、MOP-60-100-A和MOP-60-Ⅰ均由果糖(果聚糖)组成;MOP-60-Ⅰ峰高相对分子质量为2339;MOP-60-B、MOP-60-100-B、MOP-60-100-C 3种组分和MOP-60-100-Ⅰ和MOP-60-100-Ⅱ2种成分均是由多种单糖组成的杂多糖;MOP-60-100-Ⅰ和MOP-60-100-Ⅱ峰高相对分子质量分别为62 828和7783。体外活性评价结果显示,与溶剂组相比,MOP-60-B、MOP-60-100-B和MOP-60-100-C在250 mg/L浓度下显示明显的促肝细胞增殖活性(PConA组相比,显示对肝细胞有明显的保护作用(P<0.01);仅MOP-60-100-C在100和250 mg/L浓度对H2O2引起的损伤显示较强的保护作用(P<0.05和P<0.01);多糖成分MOP-60-Ⅰ有一定促肝细胞增殖活性(P<0.05),而MOP-60-100-Ⅰ和MOP-60-100-Ⅱ作用不明显。结论巴戟天中酸性较强的多糖组分MOP-60-100-B和MOP-60-100-C对肝细胞有明显的促增殖和抗损伤作用。

关键词：巴戟天多糖肝损伤 ConA

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栀子油对ConA诱导的小鼠急性免疫性肝损伤的保护作用

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中国油脂 2019年第2期44卷 99-103页

作者：朱梓豪罗光明张风波张俊逸柴华文刘培培王得运艾永强江西中医药大学药学院南昌330004

研究栀子油对刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠免疫性肝损伤的保护作用,并探讨其作用机制。将小鼠随机分成空白组、模型组、联苯双酯组,栀子油低、中、高剂量组,各给药组每天给药1次,连续给药10 d,末次给药1 h后,除空白组外,其他各组尾静脉注... 详细信息

研究栀子油对刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠免疫性肝损伤的保护作用,并探讨其作用机制。将小鼠随机分成空白组、模型组、联苯双酯组,栀子油低、中、高剂量组,各给药组每天给药1次,连续给药10 d,末次给药1 h后,除空白组外,其他各组尾静脉注射ConA(15 mg/kg),制备小鼠急性免疫性肝损伤模型。测定小鼠血清中ALT、AST和LDH的含量及肝脏组织匀浆中SOD活性和NO、MDA的含量,RT-PCR检测肝组织中TNF-α、CXCL-10 mRNA和IFN-γmRNA的表达量,HE染色观察肝组织的病理学变化。结果表明:与模型组相比,栀子油各剂量组均能降低血清ALT、AST和LDH的含量,提高SOD活性,降低肝组织NO、MDA的产生,下调TNF-α、CXCL-10mRNA和IFN-γmRNA的相对表达量,肝组织变性及坏死等病理症状明显改善,尤以栀子油高剂量组效果最佳。栀子油对ConA诱导小鼠免疫性肝损伤有明显的保护作用,其保肝的机制可能与提高抗氧化酶体系活力,抑制氧化应激反应及炎性因子表达有关。

关键词：栀子油 ConA 肝损伤保肝

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IL-1Ra保护ConA诱导肝细胞凋亡的分子机制研究

IL-1Ra保护ConA诱导肝细胞凋亡的分子机制研究

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作者：杨卓一上海交通大学

学位级别：硕士

背景和目的肝损伤是指肝脏受到毒性药物、病毒、自身免疫性缺陷等引起的肝细胞炎症或死亡的现象,其中肝细胞死亡的主要形式是细胞凋亡和细胞坏死。伴刀豆球蛋白A（Concanavalin A,ConA）是一种多克隆有丝分裂原,可以直接诱导肝细胞凋亡... 详细信息

背景和目的肝损伤是指肝脏受到毒性药物、病毒、自身免疫性缺陷等引起的肝细胞炎症或死亡的现象,其中肝细胞死亡的主要形式是细胞凋亡和细胞坏死。伴刀豆球蛋白A（Concanavalin A,ConA）是一种多克隆有丝分裂原,可以直接诱导肝细胞凋亡。动物模型中已经证实白介素1受体拮抗剂（Interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra）可以保护ConA诱导的肝损伤。磷酸化是研究最广泛,最受关注的翻译后修饰之一,它可以协调多种细胞功能,例如细胞生长、分化和凋亡,在肝细胞增殖、再生等方面也发挥着重要作用。纤维蛋白原样蛋白1（Fibrinogen like 1,FGL1）是纤维蛋白原家族中的一员,由肝细胞分泌。研究表明,FGL1通过促进受损的肝组织再生并下调促凋亡因子的表达参与肝细胞损伤的修复。本研究利用ConA诱导小鼠肝细胞AML12（Alpha mouse liver 12,AML12）细胞损伤建立磷酸化蛋白质组学模型,同时研究rhIL-1Ra对ConA诱导的肝细胞凋亡的保护作用及机制。方法采用磷酸化组学的方法,在ConA诱导AML12细胞损伤的情况下,定位定量相关磷酸化修饰蛋白的变化,并确定磷酸化修饰位点信息。构建ConA诱导的AML12细胞和HepG2细胞损伤模型;在不同浓度的ConA作用下,通过观察两种细胞的形态变化,检测细胞存活率及肝细胞的凋亡情况,考察rhIL-1Ra对ConA诱导的肝细胞凋亡的保护作用。采用双荧光酶报告基因法、实时荧光-聚合酶链反应（Real Time Polymerase Chain Reaction,RT PCR）法和western blot分别从转录水平、信使RNA（messenger RNA,mRNA）水平和蛋白水平检测rhIL-1Ra对AML12细胞内FGL1表达的影响;构建FGL1过表达质粒,瞬时转染进AML12细胞并在ConA诱导的损伤条件下检测FGL1过表达对肝细胞损伤的影响。结果本研究成功构建了ConA诱导AML12细胞损伤的磷酸化蛋白质组学模型,定量检测到82条磷酸化修饰肽段和77个磷酸化修饰蛋白。对它们进行了生物进程、分子功能、细胞成分的基因本体（Gene ontology,GO）分析以及蛋白互作关系网络构建,并得到了特定的磷酸化修饰位点信息。在ConA对AML12细胞和HepG2细胞的损伤模型中可以看出,ConA对这两个细胞都具有浓度依赖性的杀伤抑制作用。rhIL-1Ra能明显降低ConA诱导的肝损伤细胞的凋亡率,提高肝细胞的存活率,有效保护肝细胞损伤。RT PCR结果显示rhIL-1Ra可以提高FGL1 mRNA的水平;双荧光素酶报告基因结果表明rhIL-1Ra提高了AML12细胞中FGL1基因的转录水平。Western blot结果发现模型细胞中的FGL1表达量随着拮抗剂的浓度升高而升高。过表达的FGL1质粒也在损伤模型中对肝细胞起到了保护作用。研究结果表明rhIL-1Ra和FGL1均能保护ConA诱导的肝细胞损伤,并且rhIL-1Ra可以提高肝细胞中FGL1的水平。

关键词：肝细胞损伤模型磷酸化修饰 ConA FGL1 rhIL-1Ra AML12

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Altered distribution of regulatory lymphocytes by oraladministration of soy-extracts exerts a hepatoprotectiveeffect alleviating immune mediated liver injury,non-alcoholic steatohepatitis and insulin resistance

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World Journal of Gastroenterology 2015年第24期21卷 7443-7456页

作者： TawfikKhoury AmiBenYa'acov YehuditShabat LidyaZolotarovya RamSnir YaronIlan GastroeneterologyandLiverUnits DepartmentofMedicineHadassah-HebrewUniversityMedicalCenterJerusalemIL-91120Israel

AIM To determine the immune-modulatory and thehepatoprotective effects of oral administration of twosoy extracts in immune mediated liver injury and nonalcoholicsteatohepatitis （NASH）.METHODS： Two soy extracts, M1 and OS, were orallyadministered to mice with concanavalin A （ConA）immune-mediated hepatitis, to high-fat diet （HFD） miceand to methionine and choline reduced diet combinedwith HFD mice. Animals were followed for disease andimmune biomarkers.RESULTS： Oral administration of OS and M1 had anadditive effect in alleviating ConA hepatitis manifestedby a decrease in alanine aminotransferase and aspartateaminotransferase serum levels. Oral administration ofthe OS and M1 soy derived fractions, ameliorated liverinjury in the high fat diet model of NASH, manifested bya decrease in hepatic triglyceride levels, improvementin liver histology, decreased serum cholesterol andtriglycerides and improved insulin resistance. In themethionine and choline reduced diet combined withthe high fat diet model, we noted a decrease inhepatic triglycerides and improvement in blood glucoselevels and liver histology. The effects were associated with reduced serum tumor necrosis factor alpha andalteration of regulatory T cell distribution.CONCLUSION： Oral administration of the combinationof OS and M1 soy derived extracts exerted an adjuvanteffect in the gut-immune system, altering the distributionof regulatory T cells, and alleviating immune mediatedliver injury, hyperlipidemia and insulin resistance.

关键词： Non-alcoholic steatohepatitis Fatty liver Regulatory T cells Soy Type 2 diabetes ConA hepatitis

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