检索结果-南通市图书馆

作者：梁金连广东海洋大学

学位级别：硕士

collagen ⅵ(COLⅥ)是胶原蛋白家族的重要成员,广泛分布于动物体细胞外基质,在脊椎动物骨骼形成过程发挥重要作用。根据本课题组前期建立的马氏珠母贝贝壳基质蛋白数据库,筛选出六个在贝壳含量较高的COLⅥ蛋白。为了探究COLⅥ在马氏珠... 详细信息

collagen ⅵ(COLⅥ)是胶原蛋白家族的重要成员,广泛分布于动物体细胞外基质,在脊椎动物骨骼形成过程发挥重要作用。根据本课题组前期建立的马氏珠母贝贝壳基质蛋白数据库,筛选出六个在贝壳含量较高的COLⅥ蛋白。为了探究COLⅥ在马氏珠母贝贝壳形成中的作用,本实验运用聚合酶链式反应(PCR)和cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得COLⅥ基因的cDNA全长,利用荧光定量PCR技术检测基因的表达量分布,并采用原位杂交技术对COLⅥ进行精确定位。通过RNAi技术促使基因表达沉默,探究COLⅥ对贝壳结晶的影响。并利用原核表达技术获得了Pm COLⅥA4-1的重组蛋白。1.本实验成功克隆得到COLⅥ基因Pm COLⅥA4-1、Pm COLⅥA6-1、Pm COLⅥA6-2的cDNA全长。Pm COLⅥA4-1序列全长3136bp,其中开放阅读框(ORF)长2841bp,编码946个氨基酸,5’非翻译区(5’UTR)长93bp,3’非翻译区(3’UTR)长202bp。Pm COLⅥA6-1序列全长2100bp,其中开放阅读框(ORF)长1875bp,编码624个氨基酸,5’非翻译区(5’UTR)长56bp,3’非翻译区(3’UTR)长169 bp。Pm COLⅥA6-2序列全长2192bp,其中开放阅读框(ORF)长1941bp,编码646个氨基酸,5’非翻译区(5’UTR)长41 bp,3’非翻译区(3’UTR)长210bp。并验证了Pm COLⅥA3、Pm COLⅥA4-2、Pm COLⅥA5基因的编码区。通过序列分析发现六个COLⅥ均缺失collagen结构域,而v WA结构域较为保守。2.珍珠囊和外套膜中央区及套膜区是分泌珍珠质的器官,本研究通过荧光定量PCR检测发现Pm COLⅥA3、Pm COLⅥA6-1和Pm COLⅥA6-2在珍珠囊的表达量最高(P<0.05),Pm COLⅥA4-1和Pm COLⅥA4-2在外套膜中央区的表达量最高(P<0.05),Pm COLⅥA5在珍珠囊和外套膜边缘区都有较高的表达(P<0.05)。原位杂交实验结果发现Pm COLⅥA4-1、Pm COLⅥA6-1、Pm COLⅥA6-2均定位于马氏珠母贝外套膜中央区和套膜区外侧上皮细胞。表明COLⅥ可能参与马氏珠母贝贝壳珍珠质的形成。3.合成RNAi探针,对闭壳肌进行注射,分别促使六个COLⅥ基因表达沉默。利用扫描电子显微镜(SEM)观察贝壳内表面结构,发现Pm COLⅥA3、Pm COLⅥA4-1、Pm COLⅥA4-2、Pm COLⅥA5、Pm COLⅥA6-1和Pm COLⅥA6-2基因表达沉默后,贝壳珍珠层内表面超微结构出现不同程度的紊乱,棱柱层结构正常,证明COLⅥ参与马氏珠母贝贝壳珍珠质的形成。4.本研究构建了p ET30a-Pm COLⅥA4-1的原核表达载体,成功地表达Pm COLⅥA4-1蛋白的v WA结构域区域。为了获得大量高纯度重组蛋白,本研究在IPTG浓度为0.5m M,诱导温度为15℃的条件下诱导过夜,对Pm COLⅥA4-1重组蛋白进行扩大培养,通过Ni-IDA亲和层析从包涵体中体中纯化得到3.5mg的Pm COLⅥA4-1融合蛋白。并通过Western blotting检测,鉴定重组蛋白的分子量在20k Da左右,与理论的分子量20.9k Da相一致。综上所述,Pm COLⅥA3、Pm COLⅥA4-1、Pm COLⅥA4-2、Pm COLⅥA5、Pm COLⅥA6-1和Pm COLⅥA6-2参与马氏珠母贝珍珠质的形成,本研究首次证明了COLⅥ参与软体动物贝壳的矿化,丰富了珍珠层基质蛋白数据库。

关键词： collagen ⅵ vWA结构域外套膜珍珠层

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Matrix-derived serum markers in monitoring liver fibrosis in children with chronic hepatitis B treated with interferon alpha

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World Journal of Gastroenterology 2006年第21期12卷 3338-3343页

作者： Dariusz Marek Lebensztejn Maria Elzbieta Sobaniec-Lotowska Maciej Kaczmarski Michael Voelker Detlef Schuppan Ⅲrd Department of Pediatrics Medical University of Bialystok Poland Department of Clinical Pathomorphology Medical University of Bialystok Poland Bayer Research Krefeld Germany Department of Medicine Ⅰ University of Erlangen-Nuemberg Germanyand Division of Gastroenterology and HepatologyBeth Israel Deaconess Medical CenterHarvard Medical SchoolBostonUnited States

To evaluate prospectively 4 selected serum fibrosis markers （tenascin, hyaluronan, collagen ⅵ, TIMP-1） before, during and 12 mo after IFN treatment of children with chronic hepatitis B. METHODS： Forty-seven consecutive patients with chronic hepatitis B （range 4-16 years, mean 8 years） underwent IFN treatment （3 MU tiw for 20 wk）. Fibrosis stage and inflammation grade were assessed in a blinded fashion before and 12 mo after end of treatment. Serum fibrosis markers were determined using automated ***： IFN treatment improved histological inflammation but did not change fibrosis in the whole group or in subgroups. Only hyaluronan correlated significantly with histological fibrosis（r = 0.3383, P = 0.022）. Basal fibrosis markers did not differ between responders （42.5%） and nonresponders（57.5%）. During IFN treatment only serum tenascin decreased significantly in the whole group and in nonresponders. When pretreatment values were compared to values 12 mo after therapy, TIMP-1 increased in all patients and in nonresponders, and hyaluronan decreased in all patients and in ***： Tenascin reflects hepatic fibrogenesis and inflammation which decreases during IFN treatment of children with chronic hepatitis B. TIMP-1 correlates with nonresponse and hyaluronan with histological fibrosis.

关键词： Biopsy collagen ⅵ Fibrogenesis Fibrosis Hepatitis B virus Hyaluronan Serum marker Tenascin TIMP-1

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