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补肾固精方结合激素对BXSB狼疮小鼠肾脏基质金属蛋白酶表达的研究

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中国中医基础医学杂志 2005年第12期11卷 910-912页

作者：母小真陈湘君姜泉中国中医研究院广安门医院北京100053 上海中医药大学附属龙华医院上海200032

目的:探讨中药补肾固精方结合激素对BXSB狼疮小鼠肾脏基质金属蛋白酶表达的影响与治疗狼疮性肾炎的作用机制。方法:BXSB小鼠随机分为4组。检测尿蛋白定量及MMP-2、TIMP-2、col-ⅳ的阳性表达。结果:与模型组相比,补肾固精方组尿蛋白定量... 详细信息

目的:探讨中药补肾固精方结合激素对BXSB狼疮小鼠肾脏基质金属蛋白酶表达的影响与治疗狼疮性肾炎的作用机制。方法:BXSB小鼠随机分为4组。检测尿蛋白定量及MMP-2、TIMP-2、col-ⅳ的阳性表达。结果:与模型组相比,补肾固精方组尿蛋白定量显著减少,col-ⅳ表达显著降低;结合组MMP-2,TIMP-2,col-ⅳ均有显著差异。与其他两治疗组相比,结合组显著降低TIMP-2、col-ⅳ的阳性表达,促进MMP-2的表达。结论:补肾固精方可以降低尿蛋白定量和col-ⅳ在肾组织中的沉积。其与激素协同作用,可以通过调节肾组织中MMP-2/TIMP-2的表达,抑制col-ⅳ的聚集,延缓肾脏病变,从而达到治疗狼疮性肾炎的目的。

关键词：狼疮性肾炎补肾固精方 BXSB狼疮小鼠 MMP-2 TIMP-2 col-ⅳ

1,25(OH)2D3通过TGF-β1调节miR-130b、PAI-1、col-ⅳ影响糖尿病肾病大鼠肾纤维化的机制研究

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1,25(OH)2D3通过TGF-β1调节miR-130b、PAI-1、Col-Ⅳ影响糖尿病...

作者：刘玥彤新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:初步探索1,25(OH)D是否对糖尿病肾病大鼠肾脏miR-130b的表达具有影响作用,及进一步探讨1,25(OH)D是否可能通过调节TGF-β1影响miR-130b、PAI-1、col-ⅳ表达改善糖尿病肾病肾脏纤维化的过程。方法:初步探索过程涉及正常对照组,糖尿... 详细信息

目的:初步探索1,25(OH)D是否对糖尿病肾病大鼠肾脏miR-130b的表达具有影响作用,及进一步探讨1,25(OH)D是否可能通过调节TGF-β1影响miR-130b、PAI-1、col-ⅳ表达改善糖尿病肾病肾脏纤维化的过程。方法:初步探索过程涉及正常对照组,糖尿病肾病+1,25(OH)D组,糖尿病肾病+花生油组大鼠模型。进一步探讨过程主要涉及TGF-β1高表达+花生油组,TGF-β1高表达+1,25(OH)D组,TGF-β1低表达+花生油组,TGF-β1低表达+1,25(OH)D组糖尿病肾病大鼠模型。骨化三醇(活性维生素D3,1,25(OH)D;0.03ug/(kg·d))治疗、花生油对照处理。标本采集后,检测大鼠血糖、24小时尿微量白蛋白、BUN、SCr、TC、TG水平,采用qRT-PCR检测大鼠肾脏miR-130b的表达水平,采用qRT-PCR、Western Blot及免疫组化检测大鼠肾脏TGF-β1、PAI-1、col-ⅳ的表达水平,采用HE染色、Masson三色染色分析大鼠肾脏形态结构及纤维化程度。通过单因素方差分析及t检验分析比较各组数据。结果:1)糖尿病肾病+1,25(OH)D组及糖尿病肾病+花生油组大鼠血糖、24h尿微量白蛋白、BUN、SCr、TC、TG水平明显高于正常对照组(Pcol-ⅳmRNA及蛋白的表达水平明显高于TGF-β1低表达组(Pcol-ⅳmRNA及蛋白的表达水平明显降低(Pcol-ⅳ的表达水平具有正性调节作用。1,25(OH)D可能通过调节TGF-β1上调miR-130b的表达水平、降低PAI-1、col-ⅳ的表达水平改善糖尿病肾病肾脏纤维化的过程。

关键词：糖尿病肾病 1,25(OH)2D3 miR-130b PAI-1 col-ⅳ TGF-β1 肾脏纤维化

六味地黄汤对5/6肾切除大鼠残肾col-Ⅲ及col-ⅳ表达的影响

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六味地黄汤对5/6肾切除大鼠残肾Col-Ⅲ及Col-Ⅳ表达的影响

作者：周艳利湖南中医药大学

学位级别：硕士

实验目的：观察六味地黄汤对5/6肾切除大鼠残肾Ⅲ型胶原,Ⅳ型胶原表达的影响,探讨六味地黄汤保护肾功能,延缓肾损害的作用机制。实验方法：按照随机数字表法将60只SD大鼠分为5组：正常组、假手术组、模型组、依那普利组、六味地黄汤组... 详细信息

实验目的：观察六味地黄汤对5/6肾切除大鼠残肾Ⅲ型胶原,Ⅳ型胶原表达的影响,探讨六味地黄汤保护肾功能,延缓肾损害的作用机制。实验方法：按照随机数字表法将60只SD大鼠分为5组：正常组、假手术组、模型组、依那普利组、六味地黄汤组,每组12只。模型组、依那普利组、六味地黄汤组采用5/6肾切除术诱导大鼠肾衰模型,假手术组同期行两次手术,每次仅打开腹腔,暴露肾脏后,关腹。第二次手术后7天,对大鼠进行干预灌胃直至处死。于第8周分批处死大鼠,观察残肾组织形态学变化并用免疫组化法检测大鼠肾脏col-Ⅲ及col-ⅳ的表达。实验结果：1.通过采用HE及Masson染色观察5/6肾切除术大鼠残肾组织形态学的改变,说明5/6肾切除术诱导大鼠肾损害模型复制成功,六味地黄汤组和依那普利组可减轻肾间质损害及纤维化程度;2.免疫组化半定量分析显示六味地黄汤组肾皮质col-Ⅲ及col-ⅳ的表达少于模型组;3.六味地黄汤能降低血BUN、Scr水平,减少24小时尿蛋白定量等。实验结论：六味地黄汤可能通过减少细胞外基质的积聚,下调col-Ⅲ、col-ⅳ的表达,使细胞基质成分合成减少,从而减轻炎症反应和纤维化程度,达到防止肾间质纤维化、保护肾脏的作用。

关键词：六味地黄汤 5/6肾切除 col-Ⅲ col-ⅳ

基于TGF-β1-TIMPs-col-ⅳ通路探讨潜阳育阴颗粒对SHR肾损害的干预作用

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基于TGF-β1-TIMPs-Col-Ⅳ通路探讨潜阳育阴颗粒对SHR肾损害的干...

作者：张思奇南京中医药大学

学位级别：硕士

研究背景：长期严重高血压会引起肾脏纤维化,引发肾损害。在我国2011年新导入的透析患者中,约有9.9%的原发病是高血压病导致的肾脏损害,严重威胁着我国人民的身体健康与生活质量。潜阳育阴颗粒是导师方祝元教授继承江苏名老中医唐蜀华... 详细信息

研究背景：长期严重高血压会引起肾脏纤维化,引发肾损害。在我国2011年新导入的透析患者中,约有9.9%的原发病是高血压病导致的肾脏损害,严重威胁着我国人民的身体健康与生活质量。潜阳育阴颗粒是导师方祝元教授继承江苏名老中医唐蜀华先生的学术经验,结合自身临床实践,依据清肝泻热,滋肾活血法,精选药物而制成。目前已被申报成为江苏省中医院院内制剂(批准文号：苏药制字Z20100007)。前期临床研究表明,潜阳育阴颗粒联合贝那普利的中西医结合治疗对高血压肾损害患者有较好的降压作用,并且能降低患者尿蛋白,降低血管紧张素Ⅱ (Angiotensin Ⅱ, AngⅡ)的水平,改善肾脏功能,明显提高患者的生存质量。但是,其具体作用机制尚未充分阐明。TGF-β1-TIMPs-col-IV通路在高血压肾损害中被激活,促进肾脏损伤,在高血压肾损害的发病过程中扮演重要角色。转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1, TGF-β1)是一种多功能的多肽类生长因子,通过细胞表面复杂的受体信号传导途径调控细胞的增值、分化和凋亡。TGF-β1能刺激GMC合成Ⅳ型胶原(Type IV collagen, col-ⅳ)、蛋白多糖等细胞外基质(Extracellular matrix, ECM)成分,使ECM增多,促进肾小球硬化。同时TGF-β1有自我诱生作用的生物学特性,即在损伤部位释放的TGF-β1可诱导细胞产生更多的TGF-β1,从而在局部其生物学能够得到放大。基质金属蛋白酶抑因子-1(Tissue inhibitorof metalloproteinase-1, TIMP-1)与基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9, MMP-9)在肾脏局部维持相对平衡,调节肾脏胶原比例,保持肾脏结构与功能正常。本论文通过高盐饮食诱导的自发性高血压大鼠(Spontaneously Hypertensive Rat, SHR)高血压肾损害模型,采用生化法、ELISA、Western blot、Real time-PCR等方法,研究潜阳育阴颗粒对高血压肾损害的干预作用,并且进一步研究其对TGF-β1-TIMPs-col-ⅠV通路的影响,为中医药防治高血压肾损害提供实验依据,并为今后的研究提供思路。研究内容：第一部分高血压肾损害相关理论研究1.高血压肾损害的中医学理论研究2.高血压肾损害的现代医学研究第二部分实验研究12周龄雄性白发性高血压大鼠(SHR)32只按照完全随机方法分为4组(每组8只),即：高血压模型(SHR)组、潜阳育阴颗粒组、盐酸贝那普利(洛丁新)组、潜阳育阴颗粒+盐酸贝那普利(洛汀新)组;选择年龄、性别配对的12周龄雄性Wistar-Kyoto (WKY)大鼠8只作为正常对照组,均自由饮水,为期8周,并检测以下指标。1.评价潜阳育阴颗粒对SHR肾损害模型的血压及肾损害指标的实验研究。8周末,无创套尾法测量各组大鼠清醒状态下给药前后血压变化;代谢笼鼠接取24h尿液,采用全自动生化仪检测大鼠尿微量白蛋白(Microalbuminuria,尿m-Alb)、尿N-乙酰β-氨基葡萄糖酐酶(Urinary N-acetyl beta glucosamine anhydride enzyme,尿NAG)含量;HE染色评价肾脏病变;Masson染色评价肾脏纤维化程度。2. Western Blot法检测潜阳育阴颗粒对SHR肾损害模型肾组织TGF-β1、TIMP-1、 MMP-9、col-ⅳ蛋白表达的影响。3.免疫荧光技术标记肾脏组织TGF-β1, Real time-PCR法检测潜阳育阴颗粒对SHR肾损害模型TGF-β1mRNA基因表达的影响。结果：1.给药干预前,WKY组与其他各组血压比较均有显著统计学意义(P0.05),造模成功;给药8周后,与WKY组比,SHR模型组血压显著升高(P<0.01),有统计学意义;与SHR组比,潜阳育阴颗粒组、盐酸贝那普利组、潜阳育阴颗粒+盐酸贝那普利组血压显著降低(P<0.01或P<0.05),有统计学意义,其中联合用药组降低血压效果尤为显著(P<0.01)。2.与WKY组比,SHR模型组尿m-ALB、尿NAG含量均明显升高(P<0.01),有显著差异;与SHR组比,潜阳育阴颗粒组、盐酸贝那普利组、潜阳育阴颗粒+盐酸贝那普利组尿m-ALB、尿NAG含量均显著下降(P<0.01或P<0.05),有统计学意义,其中联合用药组尤为显著(P<0.01)。3.与WKY组比,HE染色提示SHR模型组肾脏病变积分显著增加(P<0.01),有显著差异;与SHR模型组比,潜阳育阴颗粒组、盐酸贝那普利组、潜阳育阴颗粒+

关键词：潜阳育阴颗粒高血压尿m-Alb 尿NAG TGF-β1 TIMP-1 MMP-9 col-ⅳ

芪蓟肾康汤对AngⅡ诱导人肾小球系膜细胞增殖及col-ⅳ、IL-6、Smads表达的影响

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芪蓟肾康汤对AngⅡ诱导人肾小球系膜细胞增殖及Col-Ⅳ、IL-6、Sma...

作者：栾佳辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:本实验研究以揭示芪蓟肾康汤(专利号:ZL 2011 1 0103377.6)防治IgA肾病的作用机理为目的,探讨芪蓟肾康汤抑制血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导人肾小球系膜细胞(Human Mesangial cell,HMC)增殖的作用途径及观察对Ⅳ型胶原蛋... 详细信息

目的:本实验研究以揭示芪蓟肾康汤(专利号:ZL 2011 1 0103377.6)防治IgA肾病的作用机理为目的,探讨芪蓟肾康汤抑制血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导人肾小球系膜细胞(Human Mesangial cell,HMC)增殖的作用途径及观察对Ⅳ型胶原蛋白(collageⅣ,col-ⅳ)、白介素6(Interleukin 6,IL-6)、Smads家族蛋白的影响。方法:1.含药血清制备:将40只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分成5组,分别为正常组、西药对照组、芪蓟肾康汤低剂量组、芪蓟肾康汤中剂量组、芪蓟肾康汤高剂量组,连续灌胃给药一周后,腹主动脉采集血液。血液使用离心机3000r离心20分钟,吸取上清液,经30分钟56℃水浴灭活处理,用过滤器过滤除菌后,放置在-20℃保存,以备后用。2.人肾小球系膜细胞的培养、增殖、分组:将人肾小球系膜细胞接种于75cm培养瓶中,加入含10%FBS的RPMI-1640培养液,放置于37℃、5%CO培养箱中进行培养;以血管紧张素Ⅱ作为诱导因子使人肾小球系膜细胞增殖;系膜细胞的分组如下:(1)正常组、(2)模型组、(3)西药对照组、(4)中药低剂量组、(5)中药中剂量组、(6)中药高剂量组。3.检测方法:(1)光学显微镜下观察及四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)观察细胞增殖;(2)酶联免疫吸附法(ELISA)检测各分组HMC上清液中col-ⅳ含量;(3)采用实时荧光定量PCR检测IL-6mRNA与Smad2mRNA、Smad7mRNA与的表达。结果:1.光学显微镜镜下观察显示:人肾小球系膜细胞明显增殖;2.MTT法显示:芪蓟肾康汤各剂量组能使HMC增殖减少,但低剂量组与模型组没有显着差异(p>0.05)、与西药对照组比较均有明显差异(pcol-ⅳ含量结果,与正常组相比,模型组中的col-ⅳ含量有明显差异(p0.05),中剂量组IL-6mRNA表达有差异(p0.05),中剂量组Smad2mRNA表达有差异(pcol-ⅳ、IL-6及Smads家族蛋白。3.阐明芪蓟肾康汤防治IgA肾病机理:通过抑制Smad2mRNA表达、促进Smad7mRNA表达,抑制了TGF-β1/Smads信号传导通路,使人肾小球系膜细胞中col-ⅳ含量减少,抑制IL-6mRNA的表达,抑制人肾小球系膜细胞增殖,改变IgA肾病的病理状态,防止IgA肾病进一步恶化。

关键词：芪蓟肾康汤人肾小球系膜细胞原发性免疫球蛋白A肾病 AngⅡ col-ⅳ IL-6mRNA Smad2mRNA Smad7mRNA

糖肾康饮治疗早期糖尿病肾病的临床疗效观察及对col-ⅳ、LN的影响

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糖肾康饮治疗早期糖尿病肾病的临床疗效观察及对Col-Ⅳ、LN的影响

作者：徐晓丹黑龙江中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察糖肾康饮治疗早期糖尿病肾病(DN)气阴两虚兼瘀型患者的临床疗效及对血清Ⅳ型胶原蛋白(col-ⅳ)、层粘连蛋白(LN)的影响,并探讨糖肾康饮治疗早期DN可能的作用机制。方法:选取80例符合临床纳入标准的早期糖尿病肾病患者,随机分为... 详细信息

目的:观察糖肾康饮治疗早期糖尿病肾病(DN)气阴两虚兼瘀型患者的临床疗效及对血清Ⅳ型胶原蛋白(col-ⅳ)、层粘连蛋白(LN)的影响,并探讨糖肾康饮治疗早期DN可能的作用机制。方法:选取80例符合临床纳入标准的早期糖尿病肾病患者,随机分为两组,对照组和治疗组,每组各40例。两组均给予基础治疗:包括强化糖尿病教育、干预饮食,拟定个体化运动方案,血糖、血压、尿蛋白的调整。治疗组另配合服用糖肾康饮,进行为期8周的治疗。观察比较治疗前后两组的中医证候积分、中医单项症状积分、尿白蛋白排泄率(UAER)、血脂、血清col-ⅳ、LN等指标的变化及总有效率,并对其加以统计学分析。结果:1.疗程结束后,对两组总有效率进行比较:对照组与治疗组分别为87.2%、55.3%,差异有显著统计学意义(Pcol-ⅳ、LN水平各自与自身疗前比较均下降,有统计学意义(Pcol-ⅳ、LN降低水平更优(Pcol-ⅳ、LN水平下降,且优于对照组。5.两组在治疗期间均无明显不良反应发生。结论:1.糖肾康饮能够明显降低早期DN患者的中医证候积分。2.糖肾康饮可改善倦怠乏力、咽干口燥、头晕耳鸣,腰膝酸软、自汗盗汗、多食易饥、口渴喜饮、心悸失眠、五心烦热、便秘溲赤等中医临床症状。3.糖肾康饮能够降低早期DN患者UAER水平,说明糖肾康饮可减轻肾脏受损程度。4.糖肾康饮能够改善血脂(TG、TC、LDL-C、HDL-C)相关指标。5.糖肾康饮可能通过降低患者血清col-ⅳ、LN水平发挥延缓DN进展的作用。

关键词：早期2型糖尿病肾病糖肾康饮 col-ⅳ LN

FAK信号通路调控col-ⅳ水解影响奶牛RFM发生机制的研究

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FAK信号通路调控Col-Ⅳ水解影响奶牛RFM发生机制的研究

作者：林宏甲黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

国内外学者普遍认为奶牛胎衣不下(retained fetal membrane,RFM)的主要病理学基础是母体胎盘和胎儿胎盘之间的黏连,而造成黏连的主要物质是Ⅳ型胶原蛋白(collagen-Ⅳ,col-ⅳ)。黏着斑激酶(Focal Adhesion Kinase,FAK)是一种125 kDa胞质... 详细信息

国内外学者普遍认为奶牛胎衣不下(retained fetal membrane,RFM)的主要病理学基础是母体胎盘和胎儿胎盘之间的黏连,而造成黏连的主要物质是Ⅳ型胶原蛋白(collagen-Ⅳ,col-ⅳ)。黏着斑激酶(Focal Adhesion Kinase,FAK)是一种125 kDa胞质内非受体型酪氨酸激酶,位于细胞间黏附处或细胞间基质黏附处,可调控MMP-2和MMP-9的活性,而MMP-2和MMP-9是col-ⅳ水解的关键酶,参与细胞之间的黏连过程。那么FAK在奶牛RFM过程中如何发挥作用,具体的作用机制如何尚不清楚。因此,本研究拟通过检测RFM奶牛母体胎盘组织中FAK信号通路各关键因子及col-ⅳ表达变化,明确FAK及col-ⅳ与奶牛RFM的关系,并在建立奶牛原代子宫内膜上皮细胞模型的基础上,以FAK信号通路和col-ⅳ为研究对象,运用分子生物学技术,通过过表达和基因沉默FAK,检测FAK信号通路相关因子和col-ⅳ的表达变化,阐明奶牛胎衣外排过程中FAK信号通路对col-ⅳ水解调控的分子机制,从而为丰富奶牛RFM病因学提供理论依据。选取胎次、体重、年龄和泌乳量都相近,且无其他疾病影响的胎衣不下和胎衣正常排出的奶牛各7头,产后12 h分别采取其母体胎盘组织。通过免疫组织化学检测了FAK信号通路关键分子(FAK、Src、MMP-2、MMP-9)以及col-ⅳ的表达情况,Q-PCR和Western blot方法检测RFM和胎衣正常排出奶牛母体胎盘组织中FAK信号通路关键分子(FAK、Src、MMP-2、MMP-9)以及col-ⅳ的表达水平。分离培养奶牛原代子宫内膜上皮细胞。在筛选确定FAK inhabit 14和Angiotensin II最佳添加浓度后,于添加后24h收集各组细胞,应用Q-PCR和Western blot法检测FAK信号通路关键分子(FAK、Src、MMP-2、MMP-9)以及col-ⅳ的表达水平。免疫组织化学结果显示,FAK信号通路关键分子(FAK、Src、MMP-2、MMP-9)以及col-ⅳ主要在胎盘组织上大量表达,并且与胎衣不下组相比FAK、Src、MMP-2、MMP-9表达较高,而col-ⅳ的较低;Q-PCR结果显示,与健康组奶牛相比,RFM奶牛母体胎盘组织中FAK、Src、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达水平显著下调(pcol-ⅳ的表达水平显著升高(pcol-ⅳ相对表达水平显著上调(pcol-ⅳ相对表达水平显著下调(pcol-ⅳ表达及水解过程,从而影响奶牛产后胎衣外排过程。

关键词：奶牛胎衣不下 FAK 信号通路 col-ⅳ

灸药结合对糖尿病肾病大鼠早期肾损害调控机制的实验研究

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灸药结合对糖尿病肾病大鼠早期肾损害调控机制的实验研究

作者：董玉君辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:本实验通过建立高糖高脂饲料喂养结合注射链脲佐菌素（STZ）引发的2型糖尿病肾病大鼠模型,检测模型大鼠血糖、血肌酐（Sur）、尿素氮（BUN）及肾重/体重值,探讨中药内外治法对模型大鼠防治和延缓糖尿病肾病的科学依据。检测模型... 详细信息

目的:本实验通过建立高糖高脂饲料喂养结合注射链脲佐菌素（STZ）引发的2型糖尿病肾病大鼠模型,检测模型大鼠血糖、血肌酐（Sur）、尿素氮（BUN）及肾重/体重值,探讨中药内外治法对模型大鼠防治和延缓糖尿病肾病的科学依据。检测模型大鼠肾组织中转换因子β 1（TGF-β1）、Ⅳ型胶原（col-ⅳ）的含量,探究中药内外治法对模型大鼠肾损害的作用机制。本实验基于“内治之理即外治之理”理论探讨糖尿病肾病的防治原则,旨在为临床开展糖尿病肾病的诊疗工作,提供实验依据和理论指导。材料与方法:雄性Wistar大鼠进行称重、编号,采用随机数字表法将50只大鼠随机选取10只作为空白对照组,采用普通饲料喂养,其余40只大鼠均给予高糖高脂饲料喂养,饲养4周,体重达到340g±10g,其中有4只体重未达标从实验中剔除。在禁食12h后,按50mg/kg剂量进行腹腔注射,72h后测空腹血糖≥16.7mmol/L,列入观察对象,若血糖不达标者进行补注STZ药品一次,空白对照组注入等量的无菌枸橼酸缓冲液,其中造模组有3只大鼠血糖偏低从实验中剔除,空白对照组普通饲料喂养,其余四组继续给予高糖高脂饲料喂养并继续喂养12周。从空白对照组和其余造模组中各随机抽取8只,进行眶静脉取血;定量检测Sur、BUN,进行统计学分析,若两组的数值P＜0.05,则有统计学意义,说明大鼠出现了肾损害,在糖尿病肾损害造模期间有5只大鼠由于不耐受而死亡。造模组中大鼠随机分为模型对照组、内治组、外治组、灸药结合组,每一组各7只。内治组给予金匮肾气丸和五子衍宗丸汤合方加减灌胃治疗,4ml/次,1次/d;外治法选用附子、肉桂等药物研磨黄酒调匀外敷神阙穴,1次/d;灸药结合组给予内治和外治两种治疗方法相结合;空白对照组和模型对照组给予相同量的蒸馏水灌胃,以上治疗周期为4周。治疗期间,各组大鼠按既定方式喂养。治疗结束后,测量大鼠血糖、血肌酐、尿素氮及肾重/体重值,蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测肾组织中TGF-β 1 及 col-ⅳ。结果:1.治疗后,模型大鼠的少动蜷缩、毛色晦暗、尿频等一般状态较治疗前得到改善。2.血糖:治疗后,模型对照组的血糖值明显升高,各治疗组的血糖值虽然高十空白对照组血糖值,但与模型对照组血糖值相比呈下降趋势,具有统计学差异（P＜0.01）。3.大鼠肾指数（肾重/体重值）:模型对照组的肾指数与空白对照组的肾指数相比较P＜0.05,具有统计学差异,说明大鼠肾脏出现肥大性病理性改变。各治疗组的肾指数又与模型对照组的肾指数比较P＜0.05,差异具有统计学意义,即提示各种治疗方法均有一定的效果。内治组和外治组的肾指数之间比较无统计学差异（P＞0.05）,但灸药结合组的肾指数比明显优于内治组和外治组（P＜0.05）。4.肾功能（血肌酐Sur、尿素氮BUN）:模型对照组的Sur与BUN值明显高于空白对照组,说明模型大鼠肾组织发生了滤过性和渗透性病理改变;且灸药结合组肾功能明显优于其余四组（P＜0.05）,而内治组和外治组之间比较无统计学差异（P＞0.05）。5.Western-Blot检测肾组织中的TGF-β 1及col-ⅳ:与空白对照组相比,模型对照组的TGF-β 1、colⅣ的表达水平升高,灰度值有统计学差异（P＜0.01）;各治疗组TGF-β 1及col-ⅳ因子表达含量与模型对照组相比较,均显著降低（P＜0.05）,具有统计学差异,即提示各种治疗方法均有一定的效果。内治组和外治组的TGF-β1及col-ⅳ因子表达含量比较无统计学差异（P＞0.05）,但与内治组和外治组相比较,灸药结合组的TGF-β1及col-ⅳ因子表达含量明显下调（P＜0.05）,说明灸药结合组的肾功能明显优于内治组和外治组。结论:1采用高糖高脂饲料喂养结合一定剂量STZ腹腔注射的方法可以准确复制出2型DM早期肾损害的动物模型,是中医研究DN的理想模型。2灸药结合法可以改变模型大鼠的一般状态,改善一定的临床症状。3灸药结合法可以降低血糖、肾重/体重、BUN及Sur的水平,能有效延缓DN的发展。4灸药结合法可以降低或下调TGF-β1蛋白及col-ⅳ的含量,有效抑制肾脏纤维化的进程,达到防治DN的作用。

关键词：糖尿病糖尿病肾病 TGF-β1 col-ⅳ

JAK/STATs信号转导通路在阿霉素肾脏纤维化大鼠模型中的研究及苦参碱对STAT3的影响

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JAK/STATs信号转导通路在阿霉素肾脏纤维化大鼠模型中的研究及苦...

作者：高健兰州大学

学位级别：硕士

背景肾脏纤维化是各种原因肾脏疾病进展到慢性肾衰竭的共同途径和主要病理基础,是各种肾小球病变发展至终末期的一种不可逆的病理改变,包括肾小球硬化、肾小管萎缩和毁损、细胞外基质(ECM)异常增多和过度沉积等病理过程,其发病机制尚未... 详细信息

背景肾脏纤维化是各种原因肾脏疾病进展到慢性肾衰竭的共同途径和主要病理基础,是各种肾小球病变发展至终末期的一种不可逆的病理改变,包括肾小球硬化、肾小管萎缩和毁损、细胞外基质(ECM)异常增多和过度沉积等病理过程,其发病机制尚未完全明晰,治疗难度大,预后较差,因此探讨肾小球硬化机制及防治措施在临床上有很重要的意义。肾小球硬化初期表现为局灶节段性,后期则表现为弥漫性球状分布,其病理演变过程分为肾小球肥大期、系膜硬化期、血管腔闭塞期,这一演变过程是许多肾脏疾病进展到肾衰竭的共同道路;JAKs/STATs信号转导途径是细胞因子实现生物学功能的主要途径之一,它已成为当前细胞因子研究领域的热点。信号转导与转录激活因子(STATs)作为JAKs的靶蛋白,是存在于胞质中的一个转录因子家族,STAT3是该家族的重要成员,是一类由细胞因子、生长因子等多肽类配体激活的转录因子。研究表明STAT3途径不仅是参与肾脏生理过程中是的一个很重要的信号转导途径,而且参与多种增生性肾小球疾病有关。苦参碱(matrine)是药用豆科槐属植物苦参(Sophora flavescens Ait)的干燥根分离提取的生物碱,有多方面的药理作用和功效,如抗菌、抗炎、抗风湿、抗肿瘤、抗过敏、抗心律失常、消肿利尿、免疫及生物反应调节作用等。研究发现苦参碱可降低肾病综合征大鼠的蛋白尿和管型尿,减轻肾脏病理改变、减少足细胞融合,对TGF-β1的产生及Smad信号通路有一定的影响。近年来研究发现苦参碱具有就抑制成纤维细胞及胶原合成,防治实验性大鼠肝纤维化的作用。但其对肾小球硬化作用及机制目前尚未完全明晰。阿霉素所致的肾小球硬化动物模型是一稳定的肾小球硬化模型,以大量蛋白尿为突出特点,具有慢性进展性肾损害的特点,与人类进行性肾脏疾病的表现非常类似。本课题拟观察肾小球硬化过程中大鼠肾脏STAT1、STAT3、转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅳ型胶原(col-ⅳ)的变化及JAK2、STAT1、STAT3mRNA的表达,考察JAKs/STATs信号转导通路在肾小球硬化进程中的变化;同时观察了该模型大鼠经苦参碱干预治疗后肾组织STAT3、TGF-β1蛋白表达及STAT3、PIAS3mRNA表达,探讨苦参碱在肾小球硬化治疗作用及其机制,为临床防治肾小球硬化寻找新的途径。第一部分JAK/STAT信号转导通路在阿霉素肾小球硬化大鼠模型中的研究目的:动态观察阿霉素肾小球硬化大鼠模型肾脏纤维化发生、发展过程中JAK/STAT信号转导通路各信号分子的表达,探讨JAK/STAT信号转导通路肾小球硬化发病机制中的作用。方法:30只健康雄性Wistar大鼠随机分为模型组和对照组各15只,模型组左侧肾切除及1周后尾静脉注射阿霉素5mg/kg制备肾小球硬化模型;对照组行假手术及1周后尾静脉注射同剂量蒸馏水,2、4、6周分批处死模型组及对照组各5只大鼠,检测血清肌酐、尿素氮和24小时蛋白尿变化,HE和Masson染色观察肾小球硬化指数变化,以免疫组化法观察肾脏纤维化过程中大鼠肾脏STAT1、STAT3、TGF-β1、col-ⅳ表达及采用荧光实时定量PCR的方法检测JAK2、STAT1、STAT3mRNA表达。结果:模型组血清肌酐(123.3±20.9μmol/L)、尿素氮(25.8±3.8μmol/L)和24小时蛋白尿(58.9±9.7mg/d)从2周起逐渐增高,至第6周明显高于正常对照组(68.3±8.3μmol/L)、(14.8±2.0μmol/L)和(9.6±1.1 mg/d)(p＜0.05);模型组肾小球硬化指数(71.7±11.2%)明显高于正常对照组(17.6±2.5%)(p＜0.05);TGF-β1、col-ⅳ在6周肾小球硬化大鼠模型肾皮质表达(TGF-β1:2.196±0.394%;col-ⅳ:5.26±1.66)明显多于对照组(TGF-β1:0.017±0.005%;STAT3:7.64±1.25%)(p＜0.05),呈逐渐升高趋势,模型制备成功;STAT3(19.6±2.6%)蛋白从4周起表达较正常对照组(7.64±1.2%)明显增高(p＜0.05),主要以胞浆表达阳性为主,部分呈胞核表达阳性;但STAT1蛋白表达模型组(6.76±1.1%)与对照组(5.73±1.0%)无明显差别;JAK2、STAT1、STAT3mRNA6周后模型组表达(7.28±1.53、4.13±0.34、5.06±0.26倍于对照组)明显多于对照组(p＜0.05)。小结:JAK/STAT信号转导通路参与了肾小球硬化形成的信号转导过程,伴随着JAK2、STAT1、STAT3信号分子表达的增多以及TGF-β1、col-ⅳ等蛋白表达增加,这条通路可能是介导肾脏细胞外基质大量沉积、肾脏纤维化发生及发展的细胞内信号转导途径之一

关键词：肾小球硬化 JAK/STAT信号转导通路大鼠阿霉素苦参碱抗纤维化 TGF-β1 col-ⅳ JAK2 STAT1 STAT3 PIAS3