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不同淋巴组织淋巴细胞培养上清诱导caco2细胞向微皱褶样细胞转分化

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第10期31卷 1311-1315页

作者：王丽虹罗霞郑冬生周联朱远洪吴秀广州中医药大学广东广州510405

目的复制微皱褶(M)样细胞体外诱导模型,从功能和基因水平两方面鉴定M样细胞,同时观察不同淋巴组织活化的淋巴细胞的培养上清对caco2细胞向M样细胞转化的影响。方法用3μg/m L伴刀豆球蛋白A(Con A)刺激Peyer结(PP)、肠系膜淋巴结(MLN)和... 详细信息

目的复制微皱褶(M)样细胞体外诱导模型,从功能和基因水平两方面鉴定M样细胞,同时观察不同淋巴组织活化的淋巴细胞的培养上清对caco2细胞向M样细胞转化的影响。方法用3μg/m L伴刀豆球蛋白A(Con A)刺激Peyer结(PP)、肠系膜淋巴结(MLN)和脾脏(Sp)的淋巴细胞3 d,收集细胞培养上清后,将其并与caco2细胞共培养。在TranswellTM上室加入微球,收集下室的培养液,流式细胞术分析荧光微球数量;反转录PCR检测M样细胞相关基因CC趋化因子配体20(CCL20)、密封蛋白基因4(CLDN4)、肿瘤坏死因子受体超家族成员9(TNFRSF9)、Ets家族转录因子Spi-B mRNA的水平,观察不同淋巴组织淋巴细胞培养上清对caco2细胞向M样细胞转化的诱导率的影响。结果与空白对照组相比,PP、MLN和Sp淋巴细胞培养上清诱导后,诱导后的caco2细胞转运的微球数量和CCL20、CLDN4、TNFRSF9、Spi-B的mRNA水平均显著增加;与未刺激组相比,Con A刺激后,诱导后的caco2细胞转运的微球数量和CCL20、CLDN4、TNFRSF9、Spi-B的mRNA水平均显著增加。结论 Con A刺激和未刺激的淋巴细胞培养上清,均可以诱导caco2细胞向M样细胞转分化。

关键词： M样细胞 caco2细胞 Peyer结肠系膜淋巴结脾脏基因表达

Bcl-2短发夹状RNA对BEL-7402、caco2细胞的生长抑制作用

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第二军医大学学报 2006年第9期27卷 995-997页

作者：何冬梅张洹刘革修暨南大学医学院血液病研究所广州510632

目的:研究Bcl-2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列的表达载体对肝癌细胞系BEL-7402和结肠癌细胞系caco2生长的抑制作用。方法:将Bcl-2 shRNA序列克隆到携带绿色荧光蛋白基因的质粒Pgenesil-1载体,采用脂质体介导的转染方法将构... 详细信息

目的:研究Bcl-2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列的表达载体对肝癌细胞系BEL-7402和结肠癌细胞系caco2生长的抑制作用。方法:将Bcl-2 shRNA序列克隆到携带绿色荧光蛋白基因的质粒Pgenesil-1载体,采用脂质体介导的转染方法将构建的Bcl-2shRNA表达质粒转入BEL-7402、caco2细胞,同时设立阴性shRNA组、空载体组、脂质体组、空白组作为对照。通过倒置荧光显微镜和流式细胞仪观察细胞的转染效率,Western印迹法检测Bcl-2蛋白表达水平,MTT法测定细胞增殖情况。结果:Bcl-2 shRNA转染组、阴性shRNA组、空载体组的转染效率无显著差异。转染Bcl-2 shRNA后BEL-7402、caco2细胞Bcl-2蛋白表达水平与转染阴性shRNA、空载体组、脂质体组和空白组相比均显著降低(Pcaco2细胞Bcl-2蛋白表达比BEL-7402细胞更为明显(Pcaco2细胞在729、6 h细胞生长明显受到抑制,分别与转染阴性shRNA、空载体组、脂质体组和空白组比较,差异有显著性(Pcaco2细胞生长。

关键词： Bcl-2 shRNA RNAI BEL-7402细胞 caco2细胞

低锌浓度培养基对caco2细胞二价金属离子转运体mRNA表达的影响

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中华预防医学杂志 2006年第1期40卷 55-57页

作者：沈慧秦海宏王福俤郭俊生第二军医大学军队卫生学教研室上海200433

锌是人体必需的微量营养素之一,锌缺乏或过量与多种机能紊乱相关.二价金属离子转运体(divalent metal transporter 1,DMT1)是近期发现的哺乳动物金属离子转运体,在机体所有组织几乎均有表达,具有对铁、锌等多种二价金属离子的转运功能[... 详细信息

锌是人体必需的微量营养素之一,锌缺乏或过量与多种机能紊乱相关.二价金属离子转运体(divalent metal transporter 1,DMT1)是近期发现的哺乳动物金属离子转运体,在机体所有组织几乎均有表达,具有对铁、锌等多种二价金属离子的转运功能[1].我们既往的实验结果显示膳食高锌可以导致断乳小鼠睾丸DMT1 mRNA表达显著降低,约为适锌时表达量的1/3～1/4,提示可能为哺乳期后幼鼠维持锌内稳态的一种反馈保护机制,但是脑组织中的DMT1 mRNA表达未见变化,提示在脑组织锌转运中DMT1可能不作为主要的转运体[2].小肠是锌吸收的重要场所,DMT1是否参与小肠锌吸收过程?我们以不同锌浓度培养的caco2细胞为模型,观察其对DMT1 mRNA表达的影响及其规律,探讨DMT1在小肠锌吸收中的可能作用。

关键词： mRNA表达二价金属离子 caco2细胞锌浓度转运体培养基 DMT1 微量营养素脑组织锌吸收

香菇多糖通过活化淋巴细胞促进caco2细胞向M样细胞转化

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香菇多糖通过活化淋巴细胞促进Caco2细胞向M样细胞转化

作者：王丽虹广州中医药大学

学位级别：硕士

目的:建立M细胞(membranous cell,M cell)体外诱导模型,从功能和基因水平这两方面鉴定M样细胞,同时观察淋巴细胞的活化对caco2细胞向M样细胞转化的影响;观察香菇多糖(Lentinan,LNT)协同ConA通过刺激不同部位的淋巴细胞,对caco2细胞向M... 详细信息

目的:建立M细胞(membranous cell,M cell)体外诱导模型,从功能和基因水平这两方面鉴定M样细胞,同时观察淋巴细胞的活化对caco2细胞向M样细胞转化的影响;观察香菇多糖(Lentinan,LNT)协同ConA通过刺激不同部位的淋巴细胞,对caco2细胞向M样细胞转化的诱导率的影响,从M细胞的分化探讨中药多糖调节肠道粘膜免疫可能的机制。方法:1.M样细胞模型的复制及建立将派氏结淋巴细胞(peyer’s patch lymphocytes,ppl)与caco2细胞共培养于Transwell体系中,复制M样细胞模型,通过caco2细胞层的荧光微球数量和M样细胞相关基因(Cldn4、Tnfrsf9、Spi-B、Ccl20基因)的表达情况从功能和基因水平两方面鉴定M样细胞;同时从两个方面观察肠系膜淋巴细胞(mesenteric lymph node lymphocytes,mlnl)、脾脏淋巴细胞(spleen lymphocytes,spl)是否对 caco2 细胞向 M 样细胞转化具有诱导作用。2.淋巴细胞的活化促进caco2细胞向M样细胞转化比较3μg/mLConA、5μg/mLConA对淋巴细胞表达早期活化标志CD3CD69及中期活化标志CD3CD25的影响,选择合适的ConA浓度刺激淋巴细胞活化;用该浓度下的ConA刺激不同部位的淋巴细胞并与caco2细胞共培养,从通过caco2细胞层的荧光微球数量和M样细胞相关基因的表达情况这两个方面观察不同部位淋巴细胞的活化对caco2细胞向M样细胞转化的诱导率的影响。3.淋巴细胞培养上清诱导caco2细胞向M样细胞转化用3μg/mL ConA刺激派式结、肠系膜、脾脏三个部位的淋巴细胞3d后,收集细胞培养上清后,将其与caco2细胞共培养,从通过caco2细胞层的荧光微球数量和M样细胞相关基因的表达情况观察淋巴细胞培养上清对caco2细胞向M样细胞转化的诱导率的影响,进而观察caco2细胞向M样细胞转化的诱导分化机制。4.香菇多糖对不同部位淋巴细胞体外增殖活化的影响通过MTT法检测,观察不同浓度的香菇多糖对小鼠派式结、肠系膜、脾脏淋巴细胞的体外活性的影响;观察不同ConA浓度对小鼠派氏结、肠系膜、脾脏淋巴细胞体外增殖作用;观察不同浓度的香菇多糖,在不同浓度ConA刺激下,对小鼠派氏结、肠系膜、脾脏淋巴细胞体外增殖活化的影响,以确定有效的香菇多糖的给药浓度和ConA浓度。5.香菇多糖协同ConA刺激淋巴细胞促进caco2细胞向M样细胞转化观察不同浓度香菇多糖对caco2细胞活性和增殖的影响;使用最适浓度ConA和香菇多糖协同刺激不同部位的淋巴细胞,并与caco2细胞共培养,从通过caco2细胞层的荧光微球数量和M样细胞相关基因的表达情况观察香菇多糖协同ConA刺激淋巴细胞,进而对caco2细胞向M样细胞转化的诱导率的影响。结果:1.经 ppl、mlnl 和 spl 诱导后,co-ppl 组、co-mlnl 组、co-spl 组通过 caco2 细胞层的荧光微球的数量均明显高于mono-culture组,其中,co-ppl组转运的荧光微球的数量高于co-spl、co-mlnl,差异均具有显著性(P细胞表达caco2细胞上没有的Tnfrsf9、Spi-B基因,同时高表达caco2细胞上低表达的Cldn4、Ccl20基因,其中,co-ppl组高于co-spl、co-mlnl,差异均具有显著性(P2.用3μg/mLConA刺激ppl、mlnl和spl,早期活化标志CD3CD69及中期活动标志CD3CD25的表达水平均高于5μg/mLConA差异,均具有统计学意义(P细胞活化。用3μg/mL ConA刺激ppl、mlnl和spl增殖活化,与caco2细胞共培养后,转运荧光微球的数量明显高于control组,其中,co-spl+ConA组、co-mlnl+ConA组高于co-ppl+ConA组,差异均具有统计学意义(P细胞上Tnfrsf9、Spi-B、Cldn4、Ccl20的表达量均高于 control 组。其中,co-spl+ConA 组、co-mlnl+ConA 组高于 co-ppl+ConA组,差异均具有统计学意义(Pcaco2细胞与ppl、mlnl和spl细胞培养上清培养后,通过caco2细胞层的荧光微球的数量以及M样细胞上M相关基因Tnfrsf9、Spi-B、Cldn4、Ccl20的表达量均高于mono-culture组,差异均具有显著性(Pcaco2细胞与淋巴细胞培养上清培养后,通过caco2细胞层的荧光微球的数量以及M样

关键词： M样细胞 caco2细胞淋巴细胞活化香菇多糖基因表达

ANXA2表达对caco2细胞运动有关的微形态和蛋白表达的调控的研究

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ANXA2表达对caco2细胞运动有关的微形态和蛋白表达的调控的研究

作者：谢楠陕西师范大学

学位级别：硕士

目的结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,其转移性是导致患者死亡的主要原因。目前,对结直肠癌的治疗多采用传统的手术切除及放疗和化疗方法,但这些方法副作用大,且肿瘤易复发。随着分子细胞生物学的发展,应用RNAi技术的基因治疗方法为恶性... 详细信息

目的结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,其转移性是导致患者死亡的主要原因。目前,对结直肠癌的治疗多采用传统的手术切除及放疗和化疗方法,但这些方法副作用大,且肿瘤易复发。随着分子细胞生物学的发展,应用RNAi技术的基因治疗方法为恶性肿瘤的根治带来了新的希望。RNAi技术依靠双链RNA以序列特异性的方式在mRNA层面上阻断相应基因的表达。大量证据表明,ANXA2在人结直肠癌细胞中高表达,且与结直肠癌的侵袭、转移密切相关。本课题应用RNAi技术抑制人结直肠癌细胞(caco2)内ANXA2基因表达,进而探究ANXA2表达对caco2细胞运动有关的微形态和细胞骨架相关蛋白表达及分布的调控,并探讨可能的作用机理。以期为以ANXA2为靶基因对人结直肠癌进行基因治疗积累实验资料。方法1.借助S-TranG转染试剂将靶向ANXA2的干扰重组质粒导入caco2细胞。2.利用扫描电镜在转染后不同时间点观察细胞形态及表面超微结构。3.利用透射电镜在转染后不同时间点观察细胞内部超微结构。4.分别采用直接荧光标记方法、间接免疫荧光方法及免疫细胞化学方法在转染后不同时间点检测细胞内F-actin、β-tubulin及Lamin B的表达及分布并分析Lamin B的平均光密度值。结果1.优化了caco2细胞的转染条件,确定在30mm培养皿中当细胞汇合率为60%-70%、质粒用量为4.5μg、S-TranG用量为10μl以及质粒/S-TranG复合物形成时间为10-15min时可得到80%以上的转染效率。2.扫描电镜观察结果显示：敲低ANXA2后,细胞形态改变,细胞微绒毛及伪足等结构受损,并随时间延长变化加剧。3.透射电镜观察结果显示：敲低ANXA2后,细胞的膜系统受损;线粒体、内质网的数量及分布改变;染色质凝集;且随时间延长变化加剧。4.敲低ANXA2后,细胞骨架系统重塑：呈束的F-actin变细、减少;β-tubulin分布组织性变差;Lamin B表达量减少,平均光密度值下降;且随时间延长变化加剧。结论利用RNAi技术抑制caco2内ANXA2基因的表达可引起细胞运动有关的微结构变化、细胞骨架系统重塑以及细胞恶性表型转变。因此,ANXA2有望成为结直肠癌基因治疗的靶基因。本课题为以ANXA2为靶基因对人结直肠癌进行基因治疗积累了实验资料。

关键词：膜连蛋白A2 RNA干扰 caco2细胞细胞超微结构细胞骨架细胞运动

胰岛素样生长因子-1对caco2细胞斯钙素1表达的影响

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胰岛素样生长因子-1对Caco2细胞斯钙素1表达的影响

作者：回琳华中农业大学

学位级别：硕士

斯钙素1(Stanniocalcinl, STC1)是一种首先在硬骨类鱼中发现的糖蛋白激素,由鱼类特有的内分泌腺斯坦尼氏小体(corpuscles of stannius, CS)所分泌。在鱼类体内,STC1通过降低鳃和肠对钙的吸收、增加肾脏对磷酸盐的重吸收,来维持体内矿物... 详细信息

斯钙素1(Stanniocalcinl, STC1)是一种首先在硬骨类鱼中发现的糖蛋白激素,由鱼类特有的内分泌腺斯坦尼氏小体(corpuscles of stannius, CS)所分泌。在鱼类体内,STC1通过降低鳃和肠对钙的吸收、增加肾脏对磷酸盐的重吸收,来维持体内矿物质代谢的动态平衡。研究表明STC1也在哺乳动物体内参与了钙磷稳态的调控,与已知多种钙磷代谢调节因子骨钙素(0C)、骨保护素(OPG)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)等有互为靶标的复杂联系。IGF-1是一具多种功能的调控因子,参与了机体细胞分化、增殖和成熟等有关的重要生理功能。研究表明,IGF-1与哺乳动物体内钙磷调节与代谢相关因子存在密切的联系。机体钙磷稳态的维持依赖于小肠、肾脏和骨骼三种器官以及维生素D、甲状旁腺素、降钙素等激素密切协调作用而实现的。因此,研究IGF-1在小肠上皮细胞中对STC1的影响,可以为钙磷代谢稳态的调控及代谢紊乱疾病防治提供新的理论基础和实验依据。本实验利用caco2细胞作为小肠上皮细胞模型,研究IGF-1对STC1表达的影响。通过不同浓度的外源IGF-1不同时间段的处理,然后利用荧光定量PCR(包括相对定量和绝对定量)和Western blot技术对caco2细胞中STC1表达量进行检测。实验结果如下：1.caco2细胞经不同浓度IGF-1处理12h后,只有10ng/mL和50ng/mL处理组中STC1mRNA表达量显著上调(Pcaco2细胞经50ng/mL IGF-1不同时间处理后,和对照比较STC1mRNA的表达量均有下调(Pcaco2细胞经此系列处理后,STC1蛋白表达量的变化与mRNA变化的趋势并不完全一致,但整体上表现为下调趋势。实验结果表明,caco2经一定的浓度的IGF-1处理后,STC1的表达是复杂的,并不简单的呈浓度或者时间依懒性,说明二者之间的相互影响可能还受到其他因素的调控,这还需要进一步的实验予以证明。

关键词：斯钙素1 胰岛素样生长因子-1 绝对定量PCR caco2细胞

蛇床子素抑制LPS诱导的肠上皮细胞株caco2的炎症反应

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南京医科大学学报（自然科学版） 2017年第7期37卷 814-817页

作者：孙武张欣欣周文博李皓南京医科大学病理生理学系江苏南京211166

目的:探讨蛇床子素(osthole)对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导的肠上皮细胞caco2中炎症因子表达的影响及机制。方法:培养caco2细胞,用LPS诱导炎症反应。在LPS刺激前给予细胞不同浓度的蛇床子素处理,通过real-time PCR检测白介素(in... 详细信息

目的:探讨蛇床子素(osthole)对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导的肠上皮细胞caco2中炎症因子表达的影响及机制。方法:培养caco2细胞,用LPS诱导炎症反应。在LPS刺激前给予细胞不同浓度的蛇床子素处理,通过real-time PCR检测白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的表达情况。分别用PKA抑制剂H89和KT5720处理细胞,观察cAMP/PKA信号通路对蛇床子素效应的影响;用Western blot检测细胞中p38、Erk和JNK的磷酸化水平。结果:LPS刺激可以显著增加caco2细胞中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达。蛇床子素预处理对LPS诱导的炎症反应有明显抑制作用,PKA抑制剂H89和KT5720不能逆转蛇床子素的抑制作用。LPS刺激后,caco2细胞中p38、Erk和JNK的磷酸化水平明显增加,蛇床子素可部分抑制它们的磷酸化。结论:蛇床子素具有抑制肠上皮细胞株caco2炎症反应的效应,该效应不依赖于cAMP/PKA,可能与抑制Erk、JNK和p38的磷酸化有关。

关键词：蛇床子素脂多糖炎症 MAPK caco2细胞

灯盏花素对肝癌细胞HepG2和结肠癌细胞caco2的体外抗肿瘤活性筛选

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中国现代医学杂志 2017年第10期27卷 1-5页

作者：曹昌娥赖泳杜一民大理大学药学与化学学院药理学教研室云南大理671000

目的观察灯盏花素对人肝癌细胞(HepG2)和人结肠癌细胞(caco2)的体外增殖抑制影响。方法以不同浓度的灯盏花素分别处理HepG2和caco2细胞24、48和72 h后采用MTT法检测灯盏花素对2种细胞活力的影响,以半数抑制浓度(IC50)及治疗指数(TI)作... 详细信息

目的观察灯盏花素对人肝癌细胞(HepG2)和人结肠癌细胞(caco2)的体外增殖抑制影响。方法以不同浓度的灯盏花素分别处理HepG2和caco2细胞24、48和72 h后采用MTT法检测灯盏花素对2种细胞活力的影响,以半数抑制浓度(IC50)及治疗指数(TI)作为评价其抗肿瘤活性及安全性指标。结果灯盏花素对HepG2表现高浓度抑制作用,浓度为20 000μmol/L时,对HepG2细胞24、48和72 h的抑制率分别为37%、63%和69%;对caco2细胞呈浓度依赖性,浓度为5 000μmol/L时,对caco2细胞24、48和72 h的抑制率分别为72%、95%和92%。灯盏花素对HepG2 24h的IC50值为24320.5μmol/L;48h的IC50值为30 667.7μmol/L;72 h的IC50值为15 586.1μmol/L。对caco2细胞24 h的IC50值为11 417.0μmol/L;48 h的IC50值为832.2μmol/L;72 h的IC50值为1 369.2μmol/L。结论灯盏花素对HepG2和caco2细胞均有不同程度的抑制作用,对caco2的抑制效果更明显。

关键词：灯盏花素 HepG2细胞 caco2细胞 MTT法抗肿瘤活性

长双歧杆菌NCC2705与宿主细胞caco2相互作用的研究

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长双歧杆菌NCC2705与宿主细胞Caco2相互作用的研究

作者：陈宣男吉林大学

学位级别：硕士

双歧杆菌被认为是人肠道内最重要的益生菌,是评价人健康状况的指标之一。它能够调节并维持肠道微生态平衡,调节机体免疫,拮抗致病菌,合成营养物质,调节血脂,防治肿瘤等,具有保健、防病、治病的三重功效,一直倍受关注。双歧杆菌的粘附是... 详细信息

双歧杆菌被认为是人肠道内最重要的益生菌,是评价人健康状况的指标之一。它能够调节并维持肠道微生态平衡,调节机体免疫,拮抗致病菌,合成营养物质,调节血脂,防治肿瘤等,具有保健、防病、治病的三重功效,一直倍受关注。双歧杆菌的粘附是其定植和发挥生理作用的前提,近年来许多学者进行了双歧杆菌粘附机制的相关研究,但尚未有定论。本研究采用比较蛋白质组学的研究方法,筛选出长双歧杆菌NCC2705与宿主细胞caco2相互作用前后差异表达的蛋白,通过质谱鉴定和生物信息学分析,最后确定目标蛋白Enolase、Tuf作为本研究的对象。构建重组质粒并在大肠杆菌中进行了GST融合表达,利用GST pull down技术证明纯化蛋白Enolase、Tuf能够与真核细胞表达的Plg相互作用,证明表达的目标蛋白具有Plg受体的功能。最后通过竞争性抑制实验,证明Enolase和Tuf蛋白能抑制双歧杆菌的粘附。本研究利用比较蛋白质组学筛选出34个长双歧杆菌NCC2705与宿主细胞caco2相互作用的差异蛋白,为双歧杆菌粘附机制的研究提供了新的角度;从34个差异蛋白中筛选出两个细胞壁蛋白Enolase和Tuf作为研究对象,并证明是粘附相关蛋白,为进一步阐明双歧杆菌粘附机制奠定了基础。

关键词：长双歧杆菌NCC2705 caco2细胞粘附竞争性抑制蛋白质双向电泳