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HPLC考察和厚朴酚在caco-2细胞模型的转运特征

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中国中药杂志 2011年第10期36卷 1286-1290页

作者：曾宝吴安国陈建南赖小平东莞广州中医药大学中医药数理工程研究院广东东莞523808 广州中医药大学新药开发研究中心广东广州510006

目的:研究和厚朴酚在caco-2细胞模型中的转运机制。方法:Kromasil 100-5 C18色谱柱(4.5 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水(70∶30),检测波长203 nm。以caco-2细胞模型研究和厚朴酚的双向转运,考察时间、药物浓度、抑制剂、pH、温度对和... 详细信息

目的:研究和厚朴酚在caco-2细胞模型中的转运机制。方法:Kromasil 100-5 C18色谱柱(4.5 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水(70∶30),检测波长203 nm。以caco-2细胞模型研究和厚朴酚的双向转运,考察时间、药物浓度、抑制剂、pH、温度对和厚朴酚转运的影响。运用HPLC检测药物浓度,计算其表观渗透系数。结果:和厚朴酚标准曲线为Y=24 044X-3 763.6(r=0.999 8),检测限0.04μmol.L-1。和厚朴酚在caco-2细胞模型中,从细胞层底端到顶端的转运量小于顶端到底端的转运,在相同浓度条件下和厚朴酚在AP→BP和BP→AP方向的转运量随时间呈增长趋势;维拉帕米可以显著提高和厚朴酚AP→BL的转运量;pH对和厚朴酚在AP→BL方向的转运影响不明显;和厚朴酚在AP→BL和BL→AP方向对温度有依赖性。结论:和厚朴酚在caco-2细胞模型中的转运主要为被动转运,兼有载体介导的主动转运,同时还受到P-gp糖蛋白的外排作用。

关键词：和厚朴酚 caco-2 HPLC 表观渗透系数 P-gP糖蛋白被动转运

caco-2 cells recognize and respond to Cryptosporidium parvum via TLR2 and TLR4

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Caco-2 cells recognize and respond to Cryptosporidium parvum...

甲状旁腺素、维生素D_3对caco-2细胞钙结合蛋白D9k mRNA表达的影响

第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者： Yuqiang Yu Zhengtao YANG Pengtao Gong Jianhua Li He Li Li Liu Ju Yang Guocai Zhang Xichen ZHANG Key Laboratory of Zoonosis Research Ministry of Education College of Veterinary Medicine Jilin University Norman Bethune College of Medicine Jilin University

Cryptosporidium parvum(***) is an intestinal parasite that can widespread among humans and animals by polluting drinking water, it can cause diarrhea in newborn baby and even cause a death in immunosuppressed patients such as AIDS. The innate immune system is crucial for recognizing and responding to ***, key to alert the adaptive immune system, a family of proteins called Toll-like receptors(TLRs) partly responsible for this function. However, the role of TLRs response to *** has not been elucidated in human intestinal epithelial cells. caco-2 cell resembles the human intestinal epithelial cells in phenotype, morphologically and functionally that has been used for culturing ***. Therefore, we evaluated the role of TLRs response to *** in human intestinal epithelial cells by using caco-2 cells. In this study, three experiments have been done, experiment 1:*** infected the caco-2 cells directly;experiment 2: *** infected the caco-2 cells that were TLRs-inhibited;experiment 3: *** infected the HEK293 cells that transfected with TLRs. The expression level of TLRs and IL-8 and activation level of NF-κB were detected, results showed that caco-2 cells express all known TLRs of human, both expression level of TLR2 and TLR4 and activation level of NF-κB were up-regulated in experiment 1;both expression level of IL-8 and activation level of NF-κB were down-regulated in experiment 2;expression level of IL-8 were up-regulated in experiment 3. Those results demonstrate that TLR2 and TLR4 mediate human intestinal epithelial cells recognizing and responding to *** via activation of NF-κB.

关键词： C.parvum caco-2 human intestinal epithelial cells TLR4 TLR2 NF-κB

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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卫生研究 2007年第3期36卷 372-375页

作者：毛雪丹毛泽斌霍卓平中国疾病预防控制中心营养与食品安全所北京100021 北京大学医学部生物化学与分子生物学系北京大学医学部儿少卫生与妇幼保健学系

目的探讨甲状旁腺素（PTH）对小肠细胞钙结合蛋白（CaBP）D9k mRNA表达的影响以及探讨PTH是否影响1，25-（OH）2-D3，对caco-2细胞钙结合蛋白D9k mRNA表达的促进作用。方法以人结肠癌上皮细胞株caco-2细胞作为小肠细胞体外模型，PTH... 详细信息

目的探讨甲状旁腺素（PTH）对小肠细胞钙结合蛋白（CaBP）D9k mRNA表达的影响以及探讨PTH是否影响1，25-（OH）2-D3，对caco-2细胞钙结合蛋白D9k mRNA表达的促进作用。方法以人结肠癌上皮细胞株caco-2细胞作为小肠细胞体外模型，PTH分三个剂量：10^-8、10^9和10^-12。mol／L分别干预caco-2细胞5、10、20、40和80min；10^-8mol/L 1，25-（OH）2，-D3，干预caco-2细胞2、4、8、16和24h，溶剂时照为0．1％乙醇；10^-8mol／L 1，25-（OH）2，-D3，联合以上三剂量PTH干预caco-2细胞2、4、8、16和24h，溶剂对照亦为0．1％乙醇。运用RT-PCR方法进行CaBP-D9k mRNA测定，以GAPDH作为内对照。结果 10^-8mol／LPTH作用20rain，10^12mol／L作用10min，CaBP-D9k mRNA表达量高于空白组，其余时间点低于空白组；10^-8mol／L 1，25-（OH）2．D，干预caco-2细胞2、4、8、16和24h，CaBP．D9kmRNA的表达均高于溶剂对照（0、1％乙醇）；与10^-8mol／L1，25．（OH）2-D3单独作用比较，10^-8mo/L 1，25-（OH）2-D3，联合以上三剂量PTH作用，CaBP-D9k mRNA相对表达量均低于单独作用的表达量。结论 10^-8mol／L、10^-12mol/L PTH可能促进caco-2细胞CaBP-D9k mRNA瞬时（1～20min）合成增加；10^-8mol／L 1，25-（OH）2，-D3，可明显诱导caco-2细胞CaBP-D9k mRNA的表达；PTH可能抵消或者抑制1，25-（OH）2，-D3，促进caco-2细胞CaBP-D9k mRNA表达的作用。

关键词：甲状旁腺素 1,25-(OH)2-D3 钙结合蛋白D9k caco-2

千金子甾醇在caco-2细胞单层模型中的吸收研究

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中草药 2014年第21期45卷 3136-3140页

作者：段飞鹏王英姿李韶菁文丽梅王军玲黄志英李彩霞张秀婷王晴冯艾灵孙秀玉张胜海北京中医药大学中药学院北京100102 中国中医科学院中药研究所北京100700 西南交通大学生命科学与工程学院四川成都610031 河北大学药学院河北保定071002 中国药科大学药学院江苏南京210009

目的研究千金子甾醇在caco-2细胞单层模型中的吸收和转运.方法用caco-2细胞模型研究千金子甾醇在caco-2细胞模型中的双向转运,考察时间、药物浓度和P-糖蛋白抑制剂对千金子甾醇跨膜转运的影响.采用UPLC-MS/MS法测定药物浓度,计算表观... 详细信息

目的研究千金子甾醇在caco-2细胞单层模型中的吸收和转运.方法用caco-2细胞模型研究千金子甾醇在caco-2细胞模型中的双向转运,考察时间、药物浓度和P-糖蛋白抑制剂对千金子甾醇跨膜转运的影响.采用UPLC-MS/MS法测定药物浓度,计算表观渗透系数（Papp）以及表观渗透率（PDR）.结果在caco-2细胞中的转运过程中,不同浓度千金子甾醇的Papp值介于1×10-6^-1×10^-5,其累积转运量随时间和浓度的增加而增加,具有浓度依赖性.10、30、50 μmol/L千金子甾醇的PDR分别为1.35、0.83、0.65.盐酸维拉帕米可以促进千金子甾醇由AP侧→BL侧的转运.结论千金子甾醇在肠道中的吸收中等,以被动转运为主,可能存在肠道转运蛋白的外排机制.

关键词：千金子千金子甾醇 caco-2 肠吸收转运外排

用体外消化／caco-2细胞模型观察维生素C和柠檬酸对铁生物利用的影响

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南方医科大学学报 2008年第10期28卷 1743-1747页

作者：雷激张明秋黄承钰白琳何中虎四川大学华西公共卫生学院四川成都610041 西华大学生物工程学院四川成都610039 中国农科院作物所北京100081

目的采用体外消化/caco-2细胞模型来观察维生素C和柠檬酸对铁生物利用的影响,并验证在本实验室建立的体外消化/caco-2细胞模型的有效性。方法利用一个带透析膜的插入环将体外消化和caco-2细胞培养结合在一起,模拟体内环境,使食物的消化... 详细信息

目的采用体外消化/caco-2细胞模型来观察维生素C和柠檬酸对铁生物利用的影响,并验证在本实验室建立的体外消化/caco-2细胞模型的有效性。方法利用一个带透析膜的插入环将体外消化和caco-2细胞培养结合在一起,模拟体内环境,使食物的消化和吸收在该模型中能同时进行。并在含铁样品液中分别加入维生素C和柠檬酸,以caco-2细胞的铁蛋白形成量作为反映铁生物利用率的指标。结果在样品液铁浓度caco-2细胞模型是成功的,维生素C对铁生物利用的促进作用高于柠檬酸。

关键词：铁生物利用体外消化 caco-2 维生素C 柠檬酸

HPLC考察小檗碱和黄连提取物中小檗碱在caco-2细胞模型的转运

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中国药理学通报 2011年第7期27卷 1007-1011页

作者：吴安国曾宝王春玲陈建南赖小平广州中医药大学新药开发研究中心广东广州510006 东莞广州中医药大学中医药数理工程研究院广东东莞523808

目的同时考察小檗碱和黄连提取物中小檗碱在Ca-co-2细胞模型的转运。方法以caco-2细胞单层模型研究药物的双向转运,首先系统考察时间、药物浓度、抑制剂、pH、温度对小檗碱单体吸收转运的影响,然后比较相同浓度的小檗碱单体与黄连提取... 详细信息

目的同时考察小檗碱和黄连提取物中小檗碱在Ca-co-2细胞模型的转运。方法以caco-2细胞单层模型研究药物的双向转运,首先系统考察时间、药物浓度、抑制剂、pH、温度对小檗碱单体吸收转运的影响,然后比较相同浓度的小檗碱单体与黄连提取物中的小檗碱在caco-2细胞模型的转运差异。运用高效液相色谱法检测药物浓度,计算其表观渗透系数。结果相同浓度的小檗碱从底端(BL)到顶端(AP)的转运量大于顶端(AP)到底端(BL)的转运量,在AP→BP和BP→AP方向,其转运量随时间呈增长趋势。维拉帕米可以明显降低其在BL→AP方向的转运量;在AP→BL方向,其在pH=5的HBSS中的转运量最大;在BL→AP方向的转运对温度有较高的依赖性。在AP→BL和BL→AP方向,提取物中的小檗碱比单一的小檗碱的转运量要低。结论小檗碱在AP→BL方向以被动转运为主,在BL→AP方向以主动转运为主;同时还受到P-gp糖蛋白的调节。提取物中的小檗碱在caco-2模型中转运的影响因素呈多样化。

关键词：小檗碱 caco-2 高效液相色谱法表观渗透系数被动转运主动转运 P-gp

caco-2细胞模型在口服药物吸收研究中的应用

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沈阳药科大学学报 2005年第6期22卷 469-474页

作者：高坤孙进何仲贵沈阳药科大学药学院辽宁沈阳110016

目的对caco-2细胞模型在口服药物肠吸收研究中的应用作一综述.方法在引用了自1974～2004年的32篇文献的基础上,通过介绍并比较体外caco-2模型和体内药物吸收转运的不同途径,讨论caco-2单层细胞模型在预测不同类药物体内吸收中的作用.结... 详细信息

目的对caco-2细胞模型在口服药物肠吸收研究中的应用作一综述.方法在引用了自1974～2004年的32篇文献的基础上,通过介绍并比较体外caco-2模型和体内药物吸收转运的不同途径,讨论caco-2单层细胞模型在预测不同类药物体内吸收中的作用.结果 caco-2细胞模型可以预测不同转运途径的药物体内吸收,尤其适用于被动转运药物,这一细胞模型在药物吸收机制、处方组成透膜性和黏膜毒性、药物吸收过程中的相互作用、药物的化学结构和体内转运关系、药物吸收限速因素、药物代谢稳定性及pH对药物吸收的影响等研究中均有较广泛的应用.结论 caco-2细胞模型用于预测各种途径的药物吸收,在细胞水平上提供了大量与吸收相关的信息,是口服药物高通量筛选的良好工具.

关键词：药物转运药物吸收 caco-2 单细胞层

Permeation of vanadium(III,IV,V)-dipicolinate complexes across MDCK cell monolayer and comparison with caco-2 cells

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Science Bulletin 2005年第17期 40-45页

作者： ZHANG Yue1, YANG Xiaoda1,2 & WANG Kui1,2 1. Department of Chemical Biology, Laboratory of Preventive Pharma-ceutics, School of Pharmaceutical Science, Peking University, Beijing 100083, China 2. National Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs, School of Pharmaceutical Science, Peking University, Beijing 100083, China

The permeation and cytotoxicity of three insu-lin-mimetic vanadium(III, IV, V)-dipicolinate complexes were studied using the MDCK cell monolayer in comparison with the caco-2 cells. On MDCK cell monolayer, the appar-ent permeation coefficients (Papp) were estimated to be (7.5 ± 1.0)×10?6, (1.0 ± 0.2)×10?6, (1.7±0.4)×10?6 cm/s for V(V), V(IV), and V(III)-dipic complexes, respectively. The perme-ability of V(V)-dipic complexes is much better than the oth-ers, which is in agreement with its better hypoglycemic effect in animal tests. On caco-2 cell monolayer, Papp were found to be in the range of 1-3×10?6 cm/s and not to be affected by excessive amounts of dipicolinate ligand. By contrast, the permeability in the AP→BL direction across the MDCK monolayer increased greatly in the presence of free ligands, suggesting existence of active transport mechanism of vana-dium complex anions on the MDCK cells. The cytotoxicity of the three complexes was found similar and the IC50 were measured in the range of 0.6―0.9 mmol/L for MDCK cells and 1.6―2 mmol/L for caco-2 cells. The cytotoxicity of three vanadium complexes was conceivably in consistence with their permeability, suggesting that the toxicity, permeation and cellular metabolism of vanadium complexes are closely related.

关键词： vanadium complex MDCK caco-2 intestinal absorp-tion diabetes.

caco-2细胞TLR2和TLR4对微小隐孢子虫刺激信号的识别

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中国病原生物学杂志 2015年第2期10卷 148-151页

作者：余裕强宫鹏涛孙铭飞李建华杨举李赫张国才张西臣吉林大学动物医学学院吉林长春130062 广东省农业科学院动物卫生研究所广东广州510640

目的研究caco-2细胞在微小隐孢子虫感染后TLRs的激活情况。方法微小隐孢子虫子孢子刺激caco-2细胞后,通过qRT-PCR检测TLRs mRNA的表达水平,采用Western blot检测NF-κB激活情况,采用ELISA检测IL-8的分泌量。同时,在微小隐孢子虫子孢子感... 详细信息

目的研究caco-2细胞在微小隐孢子虫感染后TLRs的激活情况。方法微小隐孢子虫子孢子刺激caco-2细胞后,通过qRT-PCR检测TLRs mRNA的表达水平,采用Western blot检测NF-κB激活情况,采用ELISA检测IL-8的分泌量。同时,在微小隐孢子虫子孢子感染caco-2细胞前加入TLR2或TLR4的抑制剂,检测NF-κB激活情况以及IL-8的分泌情况。结果将caco-2细胞感染微小隐孢子虫子孢子2h后,提取的RNA反转成cDNA,采用普通PCR进行检测,结果表明caco-2能够表达所有10种人TLRs;qRT-PCR检测刺激组与对照组TLRs表达量,经spss分析,p2和TLR4的表达量较对照组显著上调。对caco-2细胞感染微小隐孢子虫子孢子1h后提取的细胞全蛋白进行Western blot,显示NF-κB激活水平较对照组显著上调;caco-2细胞感染微小隐孢子虫子孢子12h后收集的细胞培养上清经ELISA检测,IL-8分泌量由刺激前的65.23pg/ml显著上调至488.23pg/ml。而在微小隐孢子虫子孢子感染caco-2细胞前加入TLR2或TLR4的抑制剂,NF-κB激活水平和IL-8的分泌量较未加抑制剂感染组均显著下调,IL-8的分泌量分别降至204.02pg/ml(抑制TLR2活性后)和142.79pg/ml(抑制TLR4活性后)。结论 caco-2细胞的TLR2和TLR4参与对微小隐孢子虫子孢子的识别。

关键词：微小隐孢子虫 caco-2 TLR NF-Κb