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笛鲷鱼鳞源功能多肽对caco-2细胞氧化应激损伤的保护作用

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食品科学 2023年第7期44卷 10-17页

作者：蔡茜茜李晨陈旭黄渊楠付才力汪少芸福州大学生物科学与工程学院福建福州350108 新加坡国立大学苏州研究院江苏苏州215123

本实验利用650μmol/L H_(2)O_(2)构建caco-2细胞氧化应激损伤模型,探究笛鲷鱼鳞源功能多肽(crimson snapper scale peptides,CSSPs)对caco-2细胞氧化应激损伤的保护作用。通过测定细胞上清液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力和白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)质量浓度、胞内抗氧化酶活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)相对含量、相关凋亡基因(Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2)的相对表达量,从细胞氧化还原状态和细胞凋亡两方面阐明CSSPs对损伤caco-2细胞的抗氧化作用。结果显示,CSSPs能够通过抗氧化防御系统来减轻H_(2)O_(2)对caco-2细胞的损伤,主要包括增加胞内抗氧化酶活性以抑制LDH释放、胞内ROS积累、MDA及IL-8的生成。此外,CSSPs抑制氧化应激损伤诱导的细胞凋亡与线粒体介导的细胞凋亡途径有关,其可显著提高线粒体膜电位,下调Caspase-3、Caspase-9和Bax表达,上调Bcl-2表达。结果表明,CSSPs能够维持细胞氧化还原稳态和抑制细胞凋亡,有效减轻caco-2细胞的损伤程度。

关键词：海洋功能肽抗氧化 caco-2细胞氧化应激损伤细胞凋亡

利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除anxa6基因的caco-2细胞株

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微生物学报 2023年第3期63卷 1217-1229页

作者：陈汉宗梁颂黎新月方宇婷彭悦景张宝赵卫华颖万成松南方医科大学公共卫生学院生物安全研究中心广东广州510515 南方医科大学南方医院检验医学科广东广州510515 南方医科大学公共卫生学院、广东省热带病研究重点实验室BSL-3实验室广东广州510515

【目的】利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除anxa6基因的caco-2细胞株,为研究大肠杆菌O157:H7效应蛋白EspF与宿主膜联蛋白A6(ANXA6)相互作用及其致病机制奠定基础。【方法】根据CRISPR/Cas9靶向原理设计并合成3个特异性识别anxa6基因的向... 详细信息

【目的】利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除anxa6基因的caco-2细胞株,为研究大肠杆菌O157:H7效应蛋白EspF与宿主膜联蛋白A6(ANXA6)相互作用及其致病机制奠定基础。【方法】根据CRISPR/Cas9靶向原理设计并合成3个特异性识别anxa6基因的向导RNA(single guide RNA,sgRNA),基于LentiCRISPRv2载体构建LentiCRISPRv2-sgRNA重组质粒,转入293T细胞中,制备sgRNA-Cas9慢病毒,将慢病毒感染caco-2细胞,经嘌呤霉素筛选阳性细胞,有限稀释法分离培养单克隆细胞,提取单克隆细胞基因组DNA,并对敲除位点附近的DNA片段进行PCR扩增,测序并进行脱靶效应评估;免疫印记法检测ANXA6蛋白表达情况,细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK8)试剂盒检测细胞增殖能力,免疫荧光法检测细胞紧密连接分布情况。【结果】Western blotting及序列测序表明anxa6基因敲除单克隆细胞构建成功;脱靶效应评估结果显示预测的10个脱靶位点均无脱靶现象;基因敲除对细胞增殖能力无明显影响;免疫荧光结果显示,caco-2及caco-2anxa6‒/‒细胞紧密连接蛋白ZO-1均沿细胞膜连续分布,结构完整,转染EspF质粒后出现分布不完整、缺口等现象。【结论】成功构建anxa6基因稳定敲除的caco-2细胞株,初步探索ANXA6蛋白在紧密连接分布中的作用,为进一步研究大肠杆菌O157:H7通过EspF-ANXA6互作介导宿主肠屏障损伤分子机制提供技术支撑。

关键词： CRISPR/Cas9系统 anxa6 EspF蛋白 caco-2细胞紧密连接

艳山姜挥发油自乳化释药系统的毒性及对caco-2细胞单层细胞旁转运与P-糖蛋白的影响

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中草药 2023年第11期54卷 3568-3577页

作者：吴朝花何丽肖婷陈英甘诗泉沈祥春陶玲贵州医科大学第二附属医院贵州凯里556000 贵州医科大学药学院药用植物功能与应用国家重点实验室贵州省天然药用资源高效利用工程中心贵州贵安新区550025 贵州医科大学药学院药物药理教研室贵州省天然药物药理与可药性高等教育重点实验室贵阳市联合重点实验室天然药物资源优化利用重点实验室贵州贵安新区550025

目的考察艳山姜挥发油自乳化释药系统(essential oil of Fructus Alpinia zerumbet-self-emulsifying drug delivery system,EOFAZ-SEDDS)的毒性及其对人结直肠腺癌caco-2细胞单层通透性和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的影响。方法采用MTT法和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法测定EOFAZ-SEDDS的细胞毒性;荧光黄渗透率实验考察EOFAZ-SEDDS对caco-2单层通透性的影响;Western blotting考察EOFAZ-SEDDS对P-gp蛋白表达的影响;流式细胞仪检测EOFAZ-SEDDS对P-gp功能的影响。小鼠ig不同剂量EOFAZ-SEDDS,连续观察14 d,考察EOFAZ-SEDDS对小鼠的急性毒性作用。结果与EOFAZ组比较,EOFAZ-SEDDS处理培养1、3、5 d的caco-2细胞24 h后细胞存活率均显著升高(Pcaco-2细胞24 h后,P-gp蛋白表达显著降低(P细胞内罗丹明的荧光强度(P细胞毒性,对小鼠实际无毒,但改变了caco-2细胞单层屏障功能,同时诱导P-gp表达,在一定浓度范围内对其功能没有影响,为EOFAZ新剂型的研究提供了一定的实验基础。

关键词：艳山姜挥发油自乳化释药系统 caco-2细胞细胞毒性 P-糖蛋白急性毒性

黄芩汤通过Nrf2信号通路对caco-2细胞抗氧化应激作用的机制

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中国实验方剂学杂志 2023年第7期29卷 29-37页

作者：冯雪刘雅清刘滨马旭冉王敦方杨伟鹏中国中医科学院中药研究所北京100700 黑龙江中医药大学哈尔滨150040

目的:以caco-2细胞为载体,结合基因干扰(RNAi)技术,通过体外实验进一步验证黄芩汤基于核因子E2相关因子2(Nrf2)通路发挥的抗氧化应激作用。方法:将处于对数生长期的caco-2细胞,经siRNA转染,构建siRNA caco-2细胞;将正常caco-2细胞和siRN... 详细信息

目的:以caco-2细胞为载体,结合基因干扰(RNAi)技术,通过体外实验进一步验证黄芩汤基于核因子E2相关因子2(Nrf2)通路发挥的抗氧化应激作用。方法:将处于对数生长期的caco-2细胞,经siRNA转染,构建siRNA caco-2细胞;将正常caco-2细胞和siRNA caco-2细胞与不同浓度的黄芩汤共同孵育后,提取RNA和蛋白,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)技术检测血红素氧合酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)、接头蛋白Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)及Nrf2 mRNA和蛋白的表达;同时,采用比色法和探针法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力及丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)的表达水平。结果:与空白组比较,仅有黄芩汤400 mg·L^(-1)组与萝卜硫素(SFN)组可降低正常caco-2细胞内ROS、MDA含量(P细胞内SOD与GSH-Px活力均有增加的趋势,且黄芩汤400 mg·L^(-1)组和SFN组与空白组比较差异有显著统计学意义(P细胞HO-1、GST、Keap1、NQO1和Nrf2蛋白及mRNA的表达量均有明显升高的趋势(P细胞内MDA和ROS的含量升高,而GSH-Px和SOD的活力及HO-1、GST、Keap1和NQO1蛋白及mRNA的表达量均有不同程度地降低(P细胞内SOD活力和SFN组、黄芩汤各给药组GSH-Px活力显著升高(P200 mg·L^(-1)组和SFN组细胞内SOD和GSH-Px活力均有升高的趋势(P2的蛋白及mRNA表达均有不同程度增加(P2通路发挥抗氧化应激的作用。

关键词：黄芩汤氧化应激 caco-2细胞 RNA干扰核因子E_(2)相关因子2(Nrf2)信号通路

蒙药塔布森-2中9种苯丙素类成分在caco-2细胞中的吸收特性研究

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中国现代应用药学 2023年第15期40卷 2048-2055页

作者：李春燕王曦悦陆景坤董馨赵鹏伟马飞祥薛培凤内蒙古医科大学呼和浩特010110

目的研究蒙药塔布森-2(Tabson-2 decoction,TBD)中苯丙素类成分在caco-2细胞中的吸收特性,初步阐明TBD的口服吸收机制。方法采用caco-2细胞单层细胞模型,通过UPLC-MS/MS分析TBD在caco-2细胞中的摄取成分,并建立UPLC-MS/MS分析方法测定... 详细信息

目的研究蒙药塔布森-2(Tabson-2 decoction,TBD)中苯丙素类成分在caco-2细胞中的吸收特性,初步阐明TBD的口服吸收机制。方法采用caco-2细胞单层细胞模型,通过UPLC-MS/MS分析TBD在caco-2细胞中的摄取成分,并建立UPLC-MS/MS分析方法测定TBD中吸收最好的9种苯丙素类成分原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸、异绿原酸C、咖啡酸、二氢咖啡酸、3-羟基肉桂酸在caco-2细胞中的含量,分别考察时间、浓度和P糖蛋白抑制剂对各成分的吸收影响。结果研究发现咖啡酸、二氢咖啡酸的总摄取量在0~180 min为上升趋势,未呈现饱和;3-羟基肉桂酸在90 min左右吸收恒定趋于饱和;隐绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸、异绿原酸C、新绿原酸、绿原酸、原儿茶酸的摄取量约从90 min开始,随时间的增加先下降后上升。与苯丙素类成分相比,加入P-糖蛋白抑制剂维拉帕米及环孢菌素A后对二氢咖啡酸的吸收产生了影响,说明二氢咖啡酸是P-糖蛋白底物。结论 TBD主要苯丙素类成分进入caco-2细胞以被动扩散为主,主动转运为辅,且除二氢咖啡酸外其他8个成分的吸收过程不受P-糖蛋白的外排作用影响。

关键词：塔布森-2 苯丙素类 caco-2细胞 UPLC-MS/MS P-糖蛋白

千金子制霜前后提取物通过调控脂筏介导caco-2细胞中TLR4信号通路的作用机制研究

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中草药 2023年第22期54卷 7474-7481页

作者：王慧楠魏晓彤石双慧王梦琳马思媛胡宇峰姜明瑞张婧秋王英姿北京中医药大学中药学院北京102488

目的探究千金子Euphorbiae Semen制霜前后提取物通过调控脂筏介导caco-2细胞中Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)信号通路的作用机制。方法将caco-2细胞分为千金子生品低、中、高剂量(50、200、800μg/mL)组及千金子霜品低、中、... 详细信息

目的探究千金子Euphorbiae Semen制霜前后提取物通过调控脂筏介导caco-2细胞中Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)信号通路的作用机制。方法将caco-2细胞分为千金子生品低、中、高剂量(50、200、800μg/mL)组及千金子霜品低、中、高剂量(50、200、800μg/mL)组和对照组,利用流式细胞术检测caco-2细胞膜脂筏丰度;采用激光共聚焦实验检测caco-2细胞中TLR4与脂筏的共定位;利用Western blotting检测caco-2细胞中TLR4、核因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)、p-NF-κB p65和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3)的蛋白表达;ELISA检测caco-2细胞上清液中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量;caco-2细胞转染TLR4后检测IL-1β和TNF-α的含量变化。结果与对照组比较,千金子生品提取物可以显著增加caco-2细胞膜脂筏的丰度(Pcaco-2细胞膜脂筏丰度、TLR4向脂筏募集、TLR4介导的信号通路传导和促炎因子分泌的影响均明显减弱(Pcaco-2细胞转染TLR4后TNF-α和IL-1β的含量显著降低(P<0.05、0.01、0.001)。结论千金子制霜减毒的作用机制可能与通过调控脂筏丰度干扰TLR4向脂筏募集,最终影响脂筏中包含的TLR4信号蛋白的传导有关。

关键词：千金子制霜减毒脂筏 Toll样受体4 caco-2细胞千金子甾醇

caco-2细胞模型用于毒害污染物转运与吸收研究

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化学进展 2010年第4期22卷 740-747页

作者：王德庆余应新钟玉芳吴明红盛国英傅家谟上海大学环境与化学工程学院环境污染与健康研究所上海200444 中国科学院广州地球化学研究所有机地球化学国家重点实验室广东省环境资源利用与保护重点实验室广州510640

caco-2细胞来源于人类结肠癌细胞,其单层细胞模型常用于体外模拟肠道上皮细胞转运与吸收外源性物质的研究,并被广泛地应用于毒理学研究等方面。本文简要介绍了caco-2单层细胞模型的培养、细胞特性及常用功能指标;详细综述了环境毒害污... 详细信息

caco-2细胞来源于人类结肠癌细胞,其单层细胞模型常用于体外模拟肠道上皮细胞转运与吸收外源性物质的研究,并被广泛地应用于毒理学研究等方面。本文简要介绍了caco-2单层细胞模型的培养、细胞特性及常用功能指标;详细综述了环境毒害污染物在caco-2细胞中转运与吸收机制以及污染物细胞毒性对其转运与吸收的影响,并对caco-2单层细胞模型在环境毒害污染物的人体健康风险评估中的应用进行了展望。

关键词： caco-2细胞体外实验转运与吸收毒害污染物生物利用度环境风险评估

克拉霉素对caco-2细胞转运他克莫司的影响及机制研究

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中国现代应用药学 2022年第3期39卷 329-333页

作者：温金华孙文雄程晓华曹端文余路易李蒲南昌大学第一附属医院临床试验研究中心南昌330006

目的探讨克拉霉素对caco-2细胞转运他克莫司的影响及机制。方法用化学发光免疫分析法测定他克莫司药物浓度;建立caco-2细胞单层模型,计算表观渗透系数,比较不同浓度他克莫司在caco-2细胞单层中转运及不同浓度克拉霉素抑制他克莫司的转... 详细信息

目的探讨克拉霉素对caco-2细胞转运他克莫司的影响及机制。方法用化学发光免疫分析法测定他克莫司药物浓度;建立caco-2细胞单层模型,计算表观渗透系数,比较不同浓度他克莫司在caco-2细胞单层中转运及不同浓度克拉霉素抑制他克莫司的转运。结果他克莫司浓度为20,40和80μg·mL^(-1)时吸收渗透系数P_(appAP-BL)分别为(2.47±0.09)×10^(-6),(3.91±0.17)×10^(-6)和(4.49±0.16)×10^(-6)cm·s^(-1);分泌渗透系数P_(appBL-AP)分别为(6.05±0.21)×10^(-6),(9.86±0.70)×10^(-6)和(11.75±0.28)×10^(-6)cm·s^(-1);外流比(apparent permeability ratio,PDR)分别为2.45±0.03,2.52±0.12和2.62±0.11;加入不同浓度的克拉霉素(15,30,60μg·mL^(-1))后,分泌渗透系数显著降低,而吸收系数影响不大,PDR随着克拉霉素浓度增加显著降低。结论caco-2细胞外排转运体可能参与了他克莫司的转运,克拉霉素合用他克莫司可显著影响他克莫司的吸收。

关键词：他克莫司克拉霉素 caco-2细胞转运

儿童配方奶粉对caco-2细胞钙转运及对成骨细胞增殖、矿化的影响

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现代食品科技 2022年第10期38卷 56-61页

作者：何泽琪林倩如黄文刘果贺丽苹苗建银曹庸华南农业大学食品学院广东省功能食品活性物重点实验室广东省天然活性物工程技术研究中心广东广州510642 华南农业大学园艺学院广东广州510642

为评价某市售儿童成长配方奶粉的补钙和促进骨骼生长能力,以常见市售纯牛奶A作为对照,运用人结肠腺癌细胞(caco-2)单层模型,研究其对钙离子转运的作用;运用成骨细胞(MC3T3-E1)矿化模型,研究其对成骨细胞增殖与矿化的影响。caco-2细胞模... 详细信息

为评价某市售儿童成长配方奶粉的补钙和促进骨骼生长能力,以常见市售纯牛奶A作为对照,运用人结肠腺癌细胞(caco-2)单层模型,研究其对钙离子转运的作用;运用成骨细胞(MC3T3-E1)矿化模型,研究其对成骨细胞增殖与矿化的影响。caco-2细胞模型结果表明,各剂量组儿童配方奶粉组的钙转运量均高于市售纯牛奶A,但相较空白组无显著性差异(p细胞增殖实验结果表明,5~50μg/mL的儿童配方奶粉对成骨细胞均有促进增殖作用,增殖速度均在30%以上;并测定细胞碱性磷酸酶活性,当儿童配方奶粉质量浓度为50μg/mL时,酶活达7.79 U/g蛋白,相较空白组极显著提高(p细胞矿化结果表明,5~50μg/mL儿童配方奶粉能显著促进成骨细胞产生矿化结晶,50μg/mL时茜素红吸光值均为0.180,对比空白组提高50%以上,较市售纯牛奶A矿化程度更稳定。综上实验结果,儿童配方奶粉虽对钙在小肠上皮的转运吸收无明显促进作用,但很可能通过促进骨生长而对儿童生长发育起作用。

关键词： caco-2细胞钙转运 MC3T3-E1成骨细胞矿化