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Ca^(2+)/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ在心力衰竭中的作用机制及中医药治疗应用进展

中国现代应用药学 2023年第14期40卷 2023-2031页

作者：柏婷燕易希善赵信科刘凯蒋虎刚李应东甘肃中医药大学兰州730000 甘肃中医药大学附属医院兰州730000

心力衰竭是一种常见的多发病,是各种心脏疾病发展的终末阶段,发病机制十分复杂,严重危害着人类健康。大量研究表明Ca^(2+)/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca^(2+)/Calmodulin dependent protein kinase Ⅱ,camkⅡ)在心力衰竭的发生发展中起着重... 详细信息

心力衰竭是一种常见的多发病,是各种心脏疾病发展的终末阶段,发病机制十分复杂,严重危害着人类健康。大量研究表明Ca^(2+)/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca^(2+)/Calmodulin dependent protein kinase Ⅱ,camkⅡ)在心力衰竭的发生发展中起着重要的作用。中医药在防治心力衰竭方面具有独特优势和良好前景,其中有不少可靶向调节camkⅡ的复方和中药有效成分。本文就camkⅱ信号通路在衰竭心脏中的作用机制以及近年来中医药通过靶向调节camkⅡ信号防治心力衰竭研究进展作主要阐述,以期为临床中医药防治心力衰竭方面提供参考意见并拓展思路。

关键词：心力衰竭 camkⅱ信号通路作用机制中医药研究进展

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甘草次酸拮抗乌头碱心肌毒性的体外实验研究

甘草次酸拮抗乌头碱心肌毒性的体外实验研究

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作者：何苗湖南中医药大学

学位级别：硕士

目的:1.复制衰竭心肌细胞模型。2.探索乌头碱对模型细胞的毒性作用与氧化应激、线粒体能量代谢障碍及钙超载的相关性。3.研究甘草次酸拮抗乌头碱对模型细胞毒性作用与缓解氧化应激、调节线粒体能量代谢及维持钙稳态的关联。4.验证甘草... 详细信息

目的:1.复制衰竭心肌细胞模型。2.探索乌头碱对模型细胞的毒性作用与氧化应激、线粒体能量代谢障碍及钙超载的相关性。3.研究甘草次酸拮抗乌头碱对模型细胞毒性作用与缓解氧化应激、调节线粒体能量代谢及维持钙稳态的关联。4.验证甘草次酸是否通过AMPK、Ca MKⅡ通路拮抗乌头碱对模型细胞的毒性作用。方法:1.复制衰竭H9c2心肌细胞模型:采用不同浓度的戊巴比妥钠、过氧化氢、阿霉素分别处理H9c2心肌细胞后,通过CCK-8法,测定H9c2心肌细胞存活率。2.确定乌头碱、甘草次酸在模型细胞的给药浓度:将H9c2心肌细胞分空白对照组、模型组、乌头碱组（15、30、60、120、240、360、480、720μmol/L）、甘草次酸组（15、30、60、120、240μmol/L）,除空白对照组,各组首先用100μL的2μmol/L阿霉素处理24 h以复制衰竭H9c2心肌细胞模型,各药物组分组给予100μL相应浓度的药物处理24 h后,采用CCK-8法,检测各组衰竭H9c2心肌细胞存活率。3.乌头碱配伍甘草次酸前后对模型细胞氧化应激反应、线粒体及钙离子的影响:将H9c2心肌细胞分为15组,即空白组,模型组,30μmol/L甘草次酸组,15、30、60、120、240、480μmol/L乌头碱组,及30μmol/L甘草次酸分别配伍15、30、60、120、240、480μmol/L乌头碱组。上述细胞除空白组外,均先用2μmol/L阿霉素处理24 h造模,各药物组模型细胞加1 m L相应浓度的药物孵育24 h。显微观察细胞形态、线粒体微观结构,CCK-8法测定细胞存活率,酶联免疫法检测乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase,LDH）、ATP酶、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、谷胱甘肽（glutathione,GSH）、三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）,荧光探针法测定活性氧（reactive oxygen species,ROS）、膜电位、线粒体内外Ca浓度。4.测定乌头碱配伍甘草次酸前后模型细胞AMPK、PGC-1α,Ca MKⅡ、SERCA2a、Ry R2蛋白的表达:1)将H9c2心肌细胞为7组,即空白对照组、模型组、AMPK抑制剂（Compound c）组、甘草次酸组（30μmol/L）、乌头碱组（480μmol/L）、甘草次酸配伍乌头碱组、Compound c与甘草次酸乌头碱共同干预组。各组细胞处理流程如下:除空白对照组外,其余各组均先用2μmol/L阿霉素处理24 h造模,Compound c组及Compound c与甘草次酸乌头碱共同干预组再给予5μmol/L Compound c处理2 h;甘草次酸组（30μmol/L）、乌头碱组（480μmol/L）、甘草次酸配伍乌头碱组、Compound c与甘草次酸乌头碱共同干预组分别给予1 m L相应浓度的药物处理24 h后,采用蛋白免疫印迹法,检测各组AMPK、PGC-1α蛋白表达。2)将H9c2心肌细胞分为7组,即空白对照组、模型组、Ca MKⅡ抑制剂（KN-93）组、甘草次酸组（30μmol/L）、乌头碱组（480μmol/L）、甘草次酸配伍乌头碱组、KN-93与甘草次酸乌头碱共同干预组。各组细胞处理程序如下:除空白对照组外,其余各组先用2μmol/L阿霉素处理24 h造模,KN-93组、KN-93与甘草次酸乌头碱共同干预组再给予5μmol/L KN-93处理2 h;甘草次酸组（30μmol/L）、乌头碱组（480μmol/L）、甘草次酸配伍乌头碱组、KN-93与甘草次酸乌头碱共同干预组分别给予1 m L相应浓度的药物处理24h后,以蛋白免疫印迹法检测各组Ca MKⅡ、SERCA2a、Ry R2蛋白表达水平。结果:1.阿霉素、戊巴比妥钠、过氧化氢均可降低H9c2心肌细胞存活率:CCK-8法检测发现,H9c2心肌细胞经2μmol/L阿霉素、0.8%戊巴比妥钠及400μmol/L过氧化氢处理后细胞存活率均约为50%,且与空白组比较具有极显著差异（P<0.01）。2.乌头碱在模型细胞的梯度给药浓度为15、30、60、120、240、480μmol/L,甘草次酸在模型细胞的给药浓度为30μmol/L:通过CCK-8法检测15、30、60、120、240、360、480、720μmol/L乌头碱组及15、30、60、120、240μmol/L甘草次酸组衰竭H9c2心肌细胞的存活率变化,实验结果显示,15、30、60μmol/L乌头碱组细胞存活率与模型组比较,呈现下降趋势,无显著差异,120、240、360、480、720μm

关键词：乌头碱甘草次酸组分配伍氧化应激线粒体能量代谢钙稳态 AMPK信号通路 camkⅱ信号通路

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