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Gap-free genome assembly and CYP450 gene family analysis reveal the biosynthesis of anthocyanins in Scutellaria baicalensis

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Horticulture Research 2023年第12期10卷 217-231页

作者： Tianlin Pei Sanming Zhu Weizhi Liao Yumin Fang Jie Liu Yu Kong Mengxiao Yan Mengying Cui Qing Zhao Shanghai Key Laboratory of Plant Functional Genomics and Resources CAS Center for Excellence in Molecular Plant Sciences Chenshan Plant Science Research CenterShanghai Chenshan Botanical GardenShanghai201602China State Key Laboratory of Plant Molecular Genetics CAS Center for Excellence in Molecular Plant SciencesChinese Academy of SciencesShanghai200032China National Key Laboratory of Wheat Improvement College of Life SciencesShandong Agricultural UniversityTaian271018China Shanghai Key Laboratory of Plant Molecular Sciences College of Life SciencesShanghai Normal UniversityShanghai200234China

Scutellaria baicalensis Georgi,a member of the Lamiaceae family,is a widely utilized medicinal plant.The flavones extracted from S.baicalensis contribute to numerous health benefits,including anti-inflammatory,antiviral,and anti-tumor activities.However,the incomplete genome assembly hinders biological studies on S.baicalensis.This study presents the first telomere-to-telomere(T2T)gap-free genome assembly of S.baicalensis through the integration of Pacbio HiFi,Nanopore ultra-long and Hi-C technologies.A total of 384.59 Mb of genome size with a contig N50 of 42.44 Mb was obtained,and all sequences were anchored into nine pseudochromosomes without any gap or mismatch.In addition,we analysed the major cyanidin-and delphinidin-based anthocyanins involved in the determination of blue-purple flower using a widely-targeted metabolome approach.Based on the genome-wide identification of Cytochrome P450(CYP450)gene family,three genes(SbFBH1,2,and 5)encoding flavonoid 3′-hydroxylases(F3′Hs)and one gene(SbFBH7)encoding flavonoid 3′5′-hydroxylase(F3′5′H)were found to hydroxylate the B-ring of flavonoids.Our studies enrich the genomic information available for the Lamiaceae family and provide a toolkit for discovering CYP450 genes involved in the flavonoid decoration.

关键词： CYP450 incomplete utilized

Cocktail探针药物法评价红禾麻提取物对大鼠CYP450酶活性的影响

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中国中药杂志 2022年第23期47卷 6320-6332页

作者：杨惠林李莹陈艺陈思颖李月婷黄勇郑林黄静王永林巩仔鹏贵州医科大学药学院、贵州省药物制剂重点实验室、民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

采用Cocktail探针药物法评价红禾麻提取物对大鼠CYP450不同亚型酶活性的影响,为其临床合理用药提供依据。首先将大鼠随机分为红禾麻高(0.45 g·kg^(-1)·d^(-1))、低(0.09 g·kg^(-1)·d^(-1))剂量组,分别连续灌胃红禾麻提取物溶液7、1... 详细信息

采用Cocktail探针药物法评价红禾麻提取物对大鼠CYP450不同亚型酶活性的影响,为其临床合理用药提供依据。首先将大鼠随机分为红禾麻高(0.45 g·kg^(-1)·d^(-1))、低(0.09 g·kg^(-1)·d^(-1))剂量组,分别连续灌胃红禾麻提取物溶液7、14 d后尾静脉注射探针药物咖啡因、咪达唑仑、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、美托洛尔和氯唑沙宗,不同时间点尾静脉取血,建立超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS)测定大鼠血浆中6种探针药物的浓度,运用DAS 2.0软件计算其药动学参数,考察红禾麻对大鼠体内cyp1A2、cyp2C9、cyp2C19、cyp2D6、cyp2E1、cyp3A46种亚型酶活性的影响。结果表明,与空白对照组相比,奥美拉唑指标下7 d给药组和14 d高剂量组的AUC_(0-t)、AUC_(0-∞)显著减小,CLz、Vz明显增大;咪达唑仑指标下7 d低剂量组和14 d给药组的AUC_(0-t)、AUC_(0-∞)显著减小,CLz显著增大,另外7 d高剂量组的AUC_(0-∞)也显著减小;美托洛尔指标下各实验组的AUC_(0-t)、AUC_(0-∞)显著减小,7 d低剂量组的CLz以及14 d低剂量组CLz、Vz显著增大;咖啡因指标下7 d给药组的AUC_(0-t)、AUC_(0-∞)显著增大,CLz显著降低,14 d高剂量组t_(1/2z)明显增大;氯唑沙宗指标下7 d低剂量组的AUC_(0-t)、AUC_(0-∞)显著增大,CLz显著降低;甲苯磺丁脲指标下,各药动学参数差异无统计学意义。以上结果提示红禾麻提取物可诱导cyp2C19、cyp3A4、cyp2D6的活性,抑制cyp1A2、cyp2E1的活性,不影响cyp2C9的活性。

关键词：红禾麻提取物 Cocktail探针药物法 CYP450 药物相互作用

补骨脂素与异补骨脂素对雌雄小鼠肝脏CYP450、UGT、SULT酶mRNA的影响

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时珍国医国药 2023年第6期34卷 1329-1333页

作者：孟昭君王昭昕翟玉霞张玥周昆天津中医药大学中医药研究院天津301617 组分中药国家重点实验室天津301617

目的探究补骨脂素和异补骨脂素给药对小鼠肝脏CYP450、UGT、SULT酶mRNA水平的影响。方法使用不同浓度补骨脂素及异补骨脂素给雌、雄ICR小鼠连续灌胃14d,提取小鼠肝脏中总RNA,Realtime-PCR法测定肝脏中cyp1A1,cyp2A4,cyp2C29,cyp2D9,cyp2... 详细信息

目的探究补骨脂素和异补骨脂素给药对小鼠肝脏CYP450、UGT、SULT酶mRNA水平的影响。方法使用不同浓度补骨脂素及异补骨脂素给雌、雄ICR小鼠连续灌胃14d,提取小鼠肝脏中总RNA,Realtime-PCR法测定肝脏中cyp1A1,cyp2A4,cyp2C29,cyp2D9,cyp2E1,cyp3A11,UGT1A1,UGT1A6,UGT1A9及SULT1A1的mRNA转录水平。结果与对照组相比,雌鼠补骨脂素80mg/kg剂量组cyp2C29 mRNA表达显著上调,160mg/kg剂量组cyp2A4、cyp2C29、UGT1A6 mRNA表达显著上调,而雄鼠20mg/kg剂量组cyp3A11、UGT1A1、UGT1A6,40mg/kg剂量组cyp2C29、UGT1A6 mRNA表达显著上调,80mg/kg剂量组cyp2A4,160mg/kg剂量组cyp1A1、cyp2A4、cyp2C29 mRNA水平显著上调;雌鼠异补骨脂素20mg/kg剂量组cyp1A1 mRNA显著下调,40mg/kg剂量组cyp1A1、cyp2A4、cyp2C29、UGT1A1、UGT1A6、UGT1A9 mRNA显著上调,而雄鼠40mg/kg剂量组cyp2A4 mRNA显著上调,UGT、SULT酶未见明显差异。结论补骨脂素与异补骨脂素灌胃给药均可影响小鼠肝脏中药物代谢酶的mRNA转录水平,且雌雄动物变化存在一定差异。

关键词：补骨脂素异补骨脂素 CYP450 UGT SULT mRNA 雌雄差异

高效氯氰菊酯胁迫下冈田绕眼果蝇CYP450基因筛选及功能分析

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高效氯氰菊酯胁迫下冈田绕眼果蝇CYP450基因筛选及功能分析

作者：汤红日遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:通过筛选高效氯氰菊酯胁迫下冈田绕眼果蝇差异表达的CYP450基因,结合生物信息学和时空表达谱分析确定候选基因Pocyp4d46,观察Pocyp4d46基因参与冈田绕眼果蝇对高效氯氰菊酯的解毒作用,旨在为深入研究冈田绕眼果蝇的抗药性机制奠定... 详细信息

目的:通过筛选高效氯氰菊酯胁迫下冈田绕眼果蝇差异表达的CYP450基因,结合生物信息学和时空表达谱分析确定候选基因Pocyp4d46,观察Pocyp4d46基因参与冈田绕眼果蝇对高效氯氰菊酯的解毒作用,旨在为深入研究冈田绕眼果蝇的抗药性机制奠定基础。方法:1.高效氯氰菊酯胁迫下冈田绕眼果蝇差异表达CYP450基因筛选:从差异转录组中筛选表达上调的CYP450基因进行PCR验证,并利用DNAMAN 6.0、MEGA 5.2和TMHMM Server v.2.0等生物信息学软件预测目的基因、编码蛋白质的理化性质、结构等,并构建系统进化树。2.差异表达CYP450基因时空表达谱分析:RT-qPCR检测高效氯氰菊酯胁迫下0 h、0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h,冈田绕眼果蝇CYP450基因在脂肪体、中肠和马氏管的相对表达量,确定候选基因。3.高效氯氰菊酯胁迫下重组蛋白Po cyp4D46对S2细胞活力的影响:（1）S2细胞真核表达候选基因Pocyp4d46:构建重组质粒p Fast Bac1-Pocyp4d46,制备重组Bacmind再转染S2细胞,经SDS-PAGE、免疫荧光和Western blot鉴定重组蛋白表达。（2）CCK8法检测重组蛋白Po cyp4D46对高效氯氰菊酯抑制S2细胞活力的影响,实验分空白组、高效氯氰菊酯组、Bacmind-Po cyp4D46组、高效氯氰菊酯+Bacmind-Po cyp4D46组。4.检测siRNA干扰Pocyp4d46基因后冈田绕眼果蝇对高效氯氰菊酯敏感度影响:（1）Western blot检测和免疫荧光鉴定siRNA干扰对S2细胞重组蛋白Po cyp4D46表达水平影响,实验分病毒组、病毒+Pocyp4d46-NC组和病毒+Pocyp4d46-siRNA组。（2）RT-qPCR检测Pocyp4d46-siRNA对冈田绕眼果蝇不同组织内Pocyp4d46基因的干扰效应。（3）检测Pocyp4d46-siRNA干扰后高效氯氰菊酯胁迫下冈田绕眼果蝇的死亡率变化。结果:1.经PCR验证和生物信息学分析筛选出3个差异表达的冈田绕眼果蝇CYP450基因cyp4d46、cyp49a1和cyp28d2。2.差异表达CYP450基因时空表达谱分析结果显示,高效氯氰菊酯胁迫下中肠、脂肪体和马氏管内cyp4d46、cyp49a1和cyp28d2基因相对表达量均显著升高（P＜0.05）,其中高效氯氰菊酯作用1 h后中肠cyp4d46基因上调最高（P＜0.05）。3.经SDS-PAGE和Western blot鉴定,重组蛋白Po cyp4D46主要在S2细胞裂解沉淀中表达,分子质量约47.5KD,免疫荧光鉴定显示目的蛋白主要分布在细胞质中。4.高效氯氰菊酯胁迫下重组蛋白Po cyp4D46对S2细胞活力的影响:与空白组相比,高效氯氰菊酯组和高效氯氰菊酯+Bacmind-Po cyp4D46组S2细胞活力都显著下降（P＜0.01或P＜0.05）,但高效氯氰菊酯+BacmindPo cyp4D46组S2细胞活力高于高效氯氰菊酯组（P＜0.05）,却低于BacmindPo cyp4D46组（P＜0.01）。5.siRNA干扰Pocyp4d46基因后对冈田绕眼果蝇高效氯氰菊酯敏感度的影响:（1）Western blot检测结果显示Bacmind转染S2细胞后,与病毒组和病毒+Pocyp4d46-NC组比较,病毒+Pocyp4d46-siRNA组的重组蛋白Po cyp4D46表达水平下调（P＜0.01）;Pocyp4d46-siRNA干扰重组蛋白Po cyp4D46免疫荧光检测结果显示,与病毒组和病毒+Pocyp4d46-NC组比较,病毒+Pocyp4d46-siRNA组的重组蛋白Po cyp4D46免疫荧光标记的细胞数明显减少。（2）RT-qPCR检测siRNA干扰后冈田绕眼果蝇脂肪体、中肠和马氏管内Pocyp4d46基因相对表达量在24 h、48 h和72 h都显著下降（P＜0.05）,其中24 h中肠组织Pocyp4d46基因相对表达量最低（37.28%）。（3）siRNA干扰后高效氯氰菊酯对冈田绕眼果蝇死亡率的影响:结果显示分别与Pocyp4d46-NC组3 h、6 h组的死亡率6.25%和15.0%相比,Pocyp4d46-siRNA组3 h、6 h组的死亡率均显著增高（P＜0.05）,分别为15.0%和27.5%。（4）siRNA干扰后高效氯氰菊酯对冈田绕眼果蝇生存曲线的影响:结果显示药膜法持续胁迫Pocyp4d46-siRNA组冈田绕眼果蝇24 h内全部死亡,而Pocyp4d46-NC组于36 h全部死亡,干扰组比对照组早12 h全部死亡。结论:1.筛选出高效氯氰菊酯胁迫下冈田绕眼果蝇差异表达的cyp4d46、cyp49a1和cyp28d2三个CYP450基因。2.Pocyp4d46基因在冈

关键词：冈田绕眼果蝇高效氯氰菊酯 CYP450 抗药性

茯苓酸生物合成途径中CYP450基因的克隆与功能验证

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茯苓酸生物合成途径中CYP450基因的克隆与功能验证

作者：刘和平华中农业大学

学位级别：硕士

多孔菌科茯苓是我国传统大宗药材,以干燥菌核入药。萜类化合物茯苓酸药理活性丰富,是茯苓主要药效成分和药材质量指标性成分。生产上通常采用松木为栽培料生产茯苓,促使茯苓种植与森林资源保护相矛盾。解析茯苓酸合成途径有助于实现茯... 详细信息

多孔菌科茯苓是我国传统大宗药材,以干燥菌核入药。萜类化合物茯苓酸药理活性丰富,是茯苓主要药效成分和药材质量指标性成分。生产上通常采用松木为栽培料生产茯苓,促使茯苓种植与森林资源保护相矛盾。解析茯苓酸合成途径有助于实现茯苓酸异源合成,减少对松木资源的消耗。根据从茯苓中鉴定到的三萜类化合物的结构特点,推导出了以羊毛甾醇为前体物质的茯苓酸下游生物合成途径,其中CYP450酶催化了多个位点羟化或羧化反应。本研究结合茯苓基因组与转录组测序结果的分析,挖掘参与茯苓酸生物合成途径中的关键CYP450酶基因,并通过靶向代谢定性定量分析在茯苓体内过表达和沉默候选CYP450基因后代谢途径中的相关代谢物含量变化,从而推导候选CYP450基因功能,以进一步深度解析茯苓酸合成途径。主要研究结果如下:1、本研究采用三代Pac Bio Sequel II测序平台对茯苓进行基因组测序,测序组装基因组大小为58.1Mb,共获得185个contig片段,contig N50长度为1,419,924bp,GC含量为51%。预测编码蛋白的基因数目为16015,其中93%的基因能够被注释到。2、在茯苓中共注释到298个CYP450酶基因,以实验室前期研究发现的参与茯苓酸生物合成的4条基因（LSS、SMT1、SOAT与Pc cyp3）为参照基因。通过基因簇分析和表达谱分析,筛选得到14条候选CYP450基因,最后选择基因表达模式相关性高的4条CYP450基因Wc cyp118、Wc cyp158、Wc cyp220与Wc cyp153进行基因功能研究。3、从茯苓中成功克隆Wc cyp118、Wc cyp158、Wc cyp220与Wc cyp153,并进行序列分析。结果表明,Wc cyp158,Wc cyp118,Wc cyp153均为不稳定亲水蛋白,Wc cyp220为稳定亲水蛋白。根据进化树与结构域分析推测Wc cyp158与Wc cyp118属于真菌cyp64-like,Wc cyp220属于cyp52家族,Wc cyp153可能属于cyp FUM15-like。对蛋白进行信号肽与跨膜结构预测,发现Wc cyp118具有信号肽与跨膜区域结构,Wc cyp153与Wc cyp220没有信号肽,但均具有跨膜区域结构,而Wc cyp158没有信号肽与跨膜结构。4、分别构建上述4个候选基因的超表达载体与沉默表达载体,并获得对应的茯苓转化菌株。q PCR结果发现,与野生型菌株进行相比,4个基因的超表达菌株的基因表达量显著上调,沉默表达菌株的基因表达量显著下调。对转化子中的代谢物进行检测,结果发现在Wc cyp118、Wc cyp153、Wc cyp220超表达菌株中,茯苓酸、16α-羟基氢化松苓酸、土莫酸与齿孔酸的含量均有提高,在Wc cyp118、Wc cyp153、Wc cyp220的沉默菌株中,茯苓酸、16α-羟基氢化松苓酸、土莫酸与齿孔酸的含量均有所降低,表明Wc cyp118、Wc cyp153、Wc cyp220对茯苓酸、16α-羟基氢化松苓酸、土莫酸、齿孔酸的合成具有正向调控作用,推测以上3个基因参与了茯苓酸的生物合成途径。综上所述,本研究推导了茯苓酸生物合成途径并基于基因组与转录组数据分析,挖掘出4个可能参与茯苓酸生物合成途径的CYP450酶基因。通过功能验证分析,发现Wc cyp118、Wc cyp153、Wc cyp220参与了茯苓酸生物合成途径,为进一步完全揭示茯苓酸生物合成途径打下了基础。

关键词：茯苓茯苓酸基因组 CYP450 基因功能生物合成途径

丹参酮生物合成途径CYP450基因相关长链非编码RNA的筛选

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中国中药杂志 2019年第12期44卷 2480-2485页

作者：蔡媛马莹郭娟王勇庆杜青陈同张水寒黄璐琦湖南省中医药研究院中药研究所湖南长沙410006 中国中医科学院中药资源中心道地药材国家重点实验室培育基地北京100700

丹参酮是中药丹参的主要有效成分,其生物合成途径表明细胞色素CYP450酶在丹参酮生物合成途径结构后修饰过程中发挥着重要作用。长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200 nt的核苷酸,对药用植物的生长发育、次生代谢等具有重要调控作用... 详细信息

丹参酮是中药丹参的主要有效成分,其生物合成途径表明细胞色素CYP450酶在丹参酮生物合成途径结构后修饰过程中发挥着重要作用。长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200 nt的核苷酸,对药用植物的生长发育、次生代谢等具有重要调控作用。该研究通过对丹参毛状根进行诱导,利用高通量测序构建其长链非编码RNA文库,共获得8 942个差异lncRNA,其中6 755个基因间lncRNA,并鉴定出1 115 814个lncRNA-靶基因对,包括122个lncRNA-靶基因顺式对。对差异lncRNA与CYP450进行相关性分析,共鉴定出16 249个lncRNA-CYP450靶基因对。将其与丹参酮生物合成途径cyp76AH1,cyp76AH3,cyp76AK1基因进行靶向相关性分析,得到216个靶基因,这些候选基因为丹参酮生物合成途径下游调控机制研究奠定基础。

关键词：丹参丹参酮长链非编码RNA CYP450

暴马桑黄CYP450超家族的全基因组鉴定及分析

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分子植物育种 2023年

作者：李敏敏赵翠敏张兰迎熊永星吴倩倩武恩斯赵岑聊城市农业科学院

本研究基于NCBI基因组数据库，对暴马桑黄全基因组范围内编码的CYP450序列进行了鉴定比对。结果表明，暴马桑黄基因组共编码86个CYP450基因，在进化上分为6个分支簇和2个单独的分支，进化过程中大部分成员受纯化选择，只有OCB91030和OCB... 详细信息

本研究基于NCBI基因组数据库，对暴马桑黄全基因组范围内编码的CYP450序列进行了鉴定比对。结果表明，暴马桑黄基因组共编码86个CYP450基因，在进化上分为6个分支簇和2个单独的分支，进化过程中大部分成员受纯化选择，只有OCB91030和OCB92178受到正选择作用，可能对物种进化具有重要意义。大部分CYP450家族成员为不稳定的亲水性蛋白，同一亚家族中的CYP450成员具有相似的氨基酸基序和基因结构，大部分成员包含motif1 (FxxGxRxCxG)和motif2 (YPDPEEFKPERWLDS)基序，以及富含丰富的内含子结构，由于方便进行选择性剪接，猜测在进化过程中容易发生功能变化。CYP450基因在调控多种应激响应和信号转导过程中具有潜在功能。在暴马桑黄中，CYP450家族以串联重复作为基因扩增的主要方式，一些亚家族成员可能通过基因复制进化而来。基因OCB86528、OCB91754在子实体形成过程中，表达量变化显著，至于其是否参与暴马桑黄子实体发育过程，还需要进一步试验验证。本研究结果为进一步揭示其对于暴马桑黄的药用应用和进化提供了参考依据。

关键词：暴马桑黄 CYP450 三萜进化表达特性

脱氢乙酸钠在大鼠体内代谢的CYP450亚酶研究

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脱氢乙酸钠在大鼠体内代谢的CYP450亚酶研究

作者：肖宜容扬州大学

学位级别：硕士

脱氢乙酸钠(Na-DHA)作为一种防腐剂,被广泛应用于食品、饲料、化妆品等行业中。资料报道Na-DHA可致大鼠、鸡凝血功能障碍,并呈现出较明显的性别差异。Na-DHA在大鼠体内主要以原型排出,且在雌性的血药浓度高于雄性。但代谢Na-DHA 的 cyp4... 详细信息

脱氢乙酸钠(Na-DHA)作为一种防腐剂,被广泛应用于食品、饲料、化妆品等行业中。资料报道Na-DHA可致大鼠、鸡凝血功能障碍,并呈现出较明显的性别差异。Na-DHA在大鼠体内主要以原型排出,且在雌性的血药浓度高于雄性。但代谢Na-DHA 的 CYP450 酶及其主要代谢产物,血药浓度存在性别差异的原因,目前尚不清晰。本文通过体外大鼠肝微粒体外孵育模型及大鼠的体内试验,通过特异性抑制剂研究参与Na-DHA代谢的CYP450亚酶类型;采用PCR方法检测不同性别大鼠肝脏中CYP450亚酶表达量,Q-TOF-LC/MS方法分析大鼠体内的主要代谢产物,初步研究Na-DHA在大鼠体内的代谢及CYP450机制。可为进一步了解Na-DHA血药浓度-凝血功能的性别差异积累资料,也可为Na-DHA在临床的合理应用提供参考依据。选择呋喃茶碱、酮康唑、奎尼丁、噻氯匹啶、氯美噻唑分别为cyp1A2、cyp3A2、cyp2D1、cyp2C11、cyp2E1的特异性抑制剂;非那西丁、氨苯砜、右美沙芬、奥美拉唑、氯唑沙宗分别为这5种亚酶的探针底物。在体外大鼠肝微粒体孵育模型中,首先确定了 0.1 mg·L肝微粒体浓度、5 mg·L Na-DHA浓度,3h孵育时间的孵育条件。25 μM的CYP450抑制剂均能使相应探针底物的代谢减少40%左右。在有或无特异性抑制剂存在下,将不同浓度Na-DHA或探针底物分别与雌或雄大鼠肝微粒体共同孵育,HPLC法检测Na-DHA或探针底物的浓度,分析代谢Na-DHA的CYP450亚酶类型。在呋喃茶碱、酮康唑、奎尼丁抑制cyp1A2、cyp3A2、cyp2D1后,雌或雄大鼠肝微粒体对Na-DHA的代谢显著降低(Pcyp2C11、cyp2E1后,对Na-DHA的代谢无显著影响(P>0.05)。表明体外肝微粒体孵育体系中,cyp1A2、cyp3A2和cyp2D1主要参与了对Na-DHA的代谢,且雌鼠肝微粒体对Na-DHA的代谢少于雄鼠肝微粒体,呈现出显著的性别差异。在大鼠体内实验中,给予雌或雄大鼠上述5种CYP450亚酶特异性抑制剂(呋喃茶碱5 mg·kg(-1)、酮康唑25 mg·kg(-1)、噻氯匹啶10 mg·kg(-1)、奎尼丁 10 mg·kg(-1)、氯美噻唑25 mg·kg(-1))和CMC-Na 3 d后,灌胃给予10 mg·kg(-1)上述5种CYP450亚酶的探针底物或200 mg·kg(-1) Na-DHA。①分别于给予Na-DHA后不同时间点采集血液,HPLC法检测血清中探针底物或Na-DHA浓度,绘制药时曲线并计算药动学参数,分析大鼠体内代谢Na-DHA的CYP450亚酶类型。结果表明特异性抑制CYP450亚酶后,空白对照组大鼠血清中各亚酶对应的探针底物浓度均显著上升(Pcyp1A2、cyp3A2、cyp2D1后,雌或雄鼠血清中Na-DHA浓度较正常组显著升高(Pcyp2C11、cyp2E1后,雌或雄鼠血清中Na-DHA浓度及药动学参数无显著变化(P>0.05)。②RT-PCR法检测正常大鼠肝脏中5种CYP450亚酶的mRNA表达量,雌鼠肝脏中cyp1a2、cyp3a2、cyp2d1、cyp2c11的表达均显著低于雄鼠(Pcyp2e1在雌雄大鼠肝脏中的表达无显著性差异。③HPLC分析中,发现Na-DHA在大鼠血清中的2个主要代谢物M1和M2;Na-DHA给予后,随时间的延长Na-DHA的血药浓度逐渐降低,而代谢物M1和M2的浓度逐渐增加。采用Q-TOF-LC/MS技术分析Na-DHA在大鼠血清中的代谢产物,推测M1的分子式为C8H805,结构式为3-乙酰基-6-甲基-2,3-二氢吡喃-2,4-二酮;M2的分子式为CHON,结构式为3-亚氨基-6-甲基-2,3-二氢吡喃-2,4-二酮。综上所述,cyp1A2、cyp3A2、cyp2D1是Na-DHA在大鼠体内或体外肝微粒体代谢的主要亚酶;且大鼠对Na-DHA的代谢存在着明显的性别差异,雌鼠对Na-DHA的代谢少于雄鼠。发现M1和M2是Na-DHA在大鼠体内的主要代谢物。研究结果对了解Na-DHA的代谢、凝血障碍作用及其性别差异有重要作用,也可为Na-DHA在临床的合理应用提供理论依据。

关键词：脱氢乙酸钠 CYP450 大鼠肝微粒体性别差异

加味佛手散胶囊对大鼠和人肝微粒体CYP450酶活性的抑制作用

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药学学报 2016年第6期51卷 926-930页

作者：尚芳红俸珊陈乾陈先进张继芬徐晓玉西南大学药学院.中医药学院重庆400715 重庆市中药研究院重庆400065

考察加味佛手散胶囊及其组分对大鼠和人肝微粒体cyp1A2、cyp2C9、cyp2D6(大鼠2D2)、cyp2E1及cyp3A4(大鼠3A1/2)亚酶活性的抑制作用。采用肝微粒体体外孵育"鸡尾酒"法,设阴性对照组、阳性抑制剂对照组、阿魏酸组、川芎嗪组、延胡索乙素... 详细信息

考察加味佛手散胶囊及其组分对大鼠和人肝微粒体cyp1A2、cyp2C9、cyp2D6(大鼠2D2)、cyp2E1及cyp3A4(大鼠3A1/2)亚酶活性的抑制作用。采用肝微粒体体外孵育"鸡尾酒"法,设阴性对照组、阳性抑制剂对照组、阿魏酸组、川芎嗪组、延胡索乙素组和加味佛手散胶囊组。利用LC-MS/MS法测定代谢产物生成量,计算得到IC_(50),评价加味佛手散胶囊及其组分对大鼠和人肝微粒体5种CYP450酶的抑制活性。阿魏酸和川芎嗪对大鼠和人肝微粒体5种CYP450的IC_(50)未测出。延胡索乙素抑制大鼠肝微粒体cyp3A1/2和人肝微粒体cyp2D6的IC_(50)分别为7.46和9.24μmol·L^(-1)。加味佛手散胶囊抑制大鼠肝微粒体cyp2D2、cyp2E1、cyp3A1/2的IC_(50)分别为241.3、369.8和293.0 mg·L^(-1),抑制人肝微粒体cyp2D6、cyp2E1、cyp3A4的IC_(50)分别为123.9、189.9和171.3 mg·L^(-1)。提示阿魏酸和川芎嗪对大鼠和人肝5种CYP450产生酶抑制的可能性很小;延胡索乙素是大鼠肝cyp3A1/2,人肝cyp2D6酶活性的中等强度抑制剂;加味佛手散胶囊对大鼠和人肝cyp2D、cyp2E1、cyp3A酶活性可能有体外抑制作用。加味佛手散胶囊与其他经cyp2D、cyp2E1、cyp3A酶代谢的药物共用时,可能使该药作用效果增强,作用时间延长,联合用药时应适当减少用药剂量。

关键词：加味佛手散胶囊子宫内膜异位症 CYP450 肝微粒体阿魏酸川芎嗪延胡索乙素