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武汉大学学报（医学版） 2019年第5期40卷 762-768页

作者：张冲张宗泽武汉大学中南医院麻醉手术科

目的:运用生物信息学方法探索cyp2u1基因在膀胱癌中的表达差异情况及与预后的相关性。方法:从GEO网站下载基因芯片GSE7476、GSE13507、GSE40355的数据集,用R软件筛选膀胱癌和正常膀胱组织之间的差异表达基因,以及与预后(总生存和肿瘤特... 详细信息

目的:运用生物信息学方法探索cyp2u1基因在膀胱癌中的表达差异情况及与预后的相关性。方法:从GEO网站下载基因芯片GSE7476、GSE13507、GSE40355的数据集,用R软件筛选膀胱癌和正常膀胱组织之间的差异表达基因,以及与预后(总生存和肿瘤特异性生存)相关的基因。然后将公共上调基因与不良预后基因取交集,公共下调基因与良好预后基因取交集,筛选出目标分子,并后续进行表达差异验证,临床指标相关性分析,以及功能预测。结果:一共筛选出上调且与不良预后相关的基因45个,下调且与良好预后相关的基因1个,并将下调基因cyp2u1作为目标分子。cyp2u1在各个数据集及数据库中呈低表达,且与良好预后、肿瘤N分期相关。GSEA结果显示其相关信号通路为KRAS信号通路、凋亡、上皮间质转化、Hedgehog信号通路和IL-2/STAT5信号通路。结论:cyp2u1可能在膀胱癌的发病过程中发挥重要的作用,可能在将来被用作潜在的人类膀胱癌的治疗靶点和/或诊断标志物。

关键词：膀胱癌生物信息学 cyp2u1 差异基因预后诊疗靶点

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Bta-miR-130调控秦川牛前体脂肪细胞分化的作用机制研究

Bta-miR-130调控秦川牛前体脂肪细胞分化的作用机制研究

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作者：马雪瑶西北农林科技大学

学位级别：硕士

牛肉肌内脂肪(Intramuscular fat,IMF)呈白色大理石纹(Marbling)状分布,俗称为大理石花纹,是牛肉等级评定的重要指标之一,大理石花纹越丰富,表明牛肉的肌内脂肪含量越高,牛肉品质也更优异。肌内脂肪的沉积受遗传、基因以及表观遗传学的... 详细信息

牛肉肌内脂肪(Intramuscular fat,IMF)呈白色大理石纹(Marbling)状分布,俗称为大理石花纹,是牛肉等级评定的重要指标之一,大理石花纹越丰富,表明牛肉的肌内脂肪含量越高,牛肉品质也更优异。肌内脂肪的沉积受遗传、基因以及表观遗传学的调控,其中MicroRNA(miRNA)是一类内源性非编码RNA,由192个核苷酸构成,在哺乳动物前体脂肪细胞的分化中发挥着重要的转录后调控作用。此前研究发现bta-miR-130a能够通过调控PPARG来调节乳脂的合成,然而目前对bta-miR-130调节前体脂肪细胞分化的作用及机制尚不清楚。基于以上研究背景,本研究以秦川牛前体脂肪细胞为研究对象,系统探讨了bta-miR-130a/b在牛前体脂肪细胞分化过程中的作用及分子机制。本研究中首先分离获得秦川牛前体脂肪细胞,通过转染bta-miR-130a/b模拟物(mimics)和抑制物(inhibitor)于秦川牛前体脂肪细胞,探究了在过表达和抑制情况下bta-miR-130a/b在前体脂肪细胞分化过程中的作用;并运用生物信息学方法预测bta-miR-130a/b与脂肪分化相关的靶基因,后续通过双荧光素酶活性检测以及体外挽救试验,鉴定了bta-miR-130a/b的直接靶基因,获得的试验结果如下:***-miR-130a/b抑制秦川牛前体脂肪细胞的分化过表达bta-miR-130a/b并进行成脂诱导分化,细胞内甘油三酯的含量以及脂滴的数量显著降低;相反,当抑制bta-miR-130a/b的表达时,细胞内甘油三酯的含量和脂滴的数量明显增多。***-miR-130a/b调控脂肪分化相关标志基因的表达脂肪细胞中bta-miR-130a/b表达量升高会抑制脂肪细胞中C/EBPα、C/EBPβ、FABP4、LPIN1和LPL等成脂相关基因的表达;而降低bta-miR-130a/b的表达量时,C/EBPα、C/EBPβ、FABP4、LPIN1和LPL等基因表达量升高。***-miR-130a/b直接靶向负调控PPARG在mRNA以及蛋白水平检测发现,bta-miR-130a/b的含量提高时,PPARG的表达量显著降低,反之bta-miR-130a/b降低时,PPARG的表达量升高;双荧光素酶报告载体活性研究发现,bta-miR-130a/b mimics能显著抑制PPARG野生型荧光素酶报告载体的活性;体外挽救试验结果显示,在前体脂肪细胞中共转染PPARG-siRNA和bta-miR-130a/b inhibitor并进行成脂诱导分化后,与单独转染bta-miR-130a/b inhibitor处理组相比,成熟脂肪细胞内脂滴含量明显减少。因此bta-miR-130a/b可通过直接靶向PPARG进行负调控从而影响前体脂肪细胞分化。***-miR-130a/b直接靶向正调控cyp2u1在mRNA以及蛋白水平检测发现,bta-miR-130a/b的含量提高时,cyp2u1的表达量显著提高,反之bta-miR-130a/b降低时,cyp2u1的表达量降低;双荧光素酶报告载体活性研究发现,bta-miR-130a/b mimics能显著抑制cyp2u1野生型荧光素酶报告载体的活性;体外挽救试验结果显示,在前体脂肪细胞中共转染cyp2u1-siRNA和bta-miR-130a/b inhibitor时,与单独转染bta-miR-130a/b inhibitor处理组相比,细胞内脂滴含量明显增加。因此bta-miR-130a/b可通过直接靶向cyp2u1进行正调控从而影响前体脂肪细胞分化。本研究揭示,bta-miR-130a/b对脂肪细胞的脂质合成是必不可少的,可通过直接靶向PPARG和cyp2u1来调控前体脂肪细胞分化。该研究结果为研究非编码RNA调控脂肪发育进而改善牛肉品质提供了理论依据。

关键词：秦川牛 bta-miR-130a/b PPARG cyp2u1 脂肪细胞分化

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