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miR-503靶向调控cxcl9抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭

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重庆医科大学学报 2021年第8期46卷 933-937页

作者：王一丞白利容武警重庆总队医院皮肤科重庆400061

目的:研究miR-503对人皮肤黑色素瘤细胞A375迁移、侵袭能力的影响及相关机制。方法:实时荧光定量PCR(realtime quantitative PCR,qRT-PCR)检测黑色素瘤组织及细胞系中miR-503的表达水平;将miR-503模拟物(miR-503 mimics)或miR-503抑制物(miR-503 inhibitors)瞬时转染A375细胞,Transwell实验检测转染后细胞迁移及侵袭能力的变化;生物信息学预测miR-503与cxcl9的结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测其靶向结合关系;将cxcl9单独转染或与miR-503共转染A375细胞后,检测细胞迁移及侵袭能力的变化。结果:黑色素瘤组织中miR-503的表达明显低于癌旁组织(t=6.602,P=0.000),且黑色素瘤细胞(A375、SK-MEL-1及SK-MEL-5)中miR-503的表达也均明显低于人表皮黑色素细胞HEM(F=19.445,P=0.000);A375细胞转染miR-503 mimics后迁移及侵袭能力明显受到抑制(P=0.017,P=0.049),而转染miR-503 inhibitors后迁移及侵袭能力明显增强(P=0.004,P=0.000);cxcl9是miR-503的直接靶基因;cxcl9能促进A375细胞的迁移和侵袭(P=0.000,P=0.009),但其作用效果能被miR-503逆转。结论:miR-503通过靶向调控cxcl9而抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭。

关键词：黑色素瘤 miR-503 迁移侵袭 cxcl9

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结直肠癌中cxcl9的表达及其临床意义

临床与实验病理学杂志 2017年第7期33卷 800-802页

作者：方立武贺海珍朱从伦沈慧彭鲁璐浙江省象山第一人民医院病理科象山315700

目的检测趋化因子cxcl9在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织及癌旁组织中的表达,探讨其与临床病理特征及预后的关系。方法应用免疫组化EnVision法检测95例CRC及55例癌旁组织中cxcl9的表达。结果 CRC中cxcl9高表达51例(53.7%,51/95),... 详细信息

目的检测趋化因子cxcl9在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织及癌旁组织中的表达,探讨其与临床病理特征及预后的关系。方法应用免疫组化EnVision法检测95例CRC及55例癌旁组织中cxcl9的表达。结果 CRC中cxcl9高表达51例(53.7%,51/95),癌旁组织中高表达11例(20.0%,11/55)。cxcl9在CRC中高表达发生率显著高于癌旁组织(Pcxcl9高表达和肿瘤分化程度高、未达浆膜浸润、淋巴结无转移及TNM低分期具有相关性(Pcxcl9高表达CRC患者的5年无瘤生存期及总生存期明显高于低表达组(Pcxcl9可能参与CRC的发生、发展,其高表达提示CRC患者预后较好。

关键词：结直肠肿瘤趋化因子 cxcl9 预后免疫组织化学

cxcl9对单个核细胞的趋化作用及其机制探讨

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中国组织化学与细胞化学杂志 2012年第4期21卷 319-322页

作者：夏羽佳田德安曾丹何嘉怡涂炜邓欢韩平邓玥灵刘梅华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科武汉430030

目的观察趋化因子cxcl9对人外周血单个核细胞的趋化作用,并探讨其对CXCR3受体后信号通路的影响。方法分离人外周血单个核细胞并进行培养,Transwell小室趋化实验检测不同浓度的趋化因子cxcl9对外周血单个核细胞的趋化作用;Western blot... 详细信息

目的观察趋化因子cxcl9对人外周血单个核细胞的趋化作用,并探讨其对CXCR3受体后信号通路的影响。方法分离人外周血单个核细胞并进行培养,Transwell小室趋化实验检测不同浓度的趋化因子cxcl9对外周血单个核细胞的趋化作用;Western blot方法检测cxcl9刺激外周血单个核细胞时ERK1/2及PI3K/Akt信号通路的蛋白表达变化,并检测上述通路抑制剂PD98059和Wortmannin处理细胞后,cxcl9对ERK1/2、PI3K/Akt信号通路的影响有无变化。结果与空白对照组相比,不同浓度的cxcl9刺激对人外周血单个核细胞均有明显的趋化作用,并且cxcl9刺激人外周血单个核细胞能激活ERK1/2及PI3K/Akt信号通路,其关键蛋白ERK1/2及Akt磷酸化水平显著增加;通路特异性抑制剂PD98059和Wortmannin的应用能明显抑制cxcl9对这两条信号通路的激活。结论 cxcl9能趋化人外周血单个核细胞发生迁移,ERK1/2及PI3K/Akt信号通路可能在此过程中发挥重要作用。

关键词：趋化因子 cxcl9 单个核细胞趋化作用信号通路

cxcl9和Smad3的表达与新疆维吾尔族银屑病发病关系的研究

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CXCL9和Smad3的表达与新疆维吾尔族银屑病发病关系的研究

作者：孙景英石河子大学

学位级别：硕士

目的:比较新疆维吾尔族寻常型银屑病患者皮损及正常维吾尔族人群皮肤中cxcl9和Smad3的表达差异,分析其与银屑病发病的相关性。方法:Envision免疫组织化学法分别检测新疆维吾尔族寻常型银屑病患者皮损及正常人皮肤中cxcl9和Smad3的表达... 详细信息

目的:比较新疆维吾尔族寻常型银屑病患者皮损及正常维吾尔族人群皮肤中cxcl9和Smad3的表达差异,分析其与银屑病发病的相关性。方法:Envision免疫组织化学法分别检测新疆维吾尔族寻常型银屑病患者皮损及正常人皮肤中cxcl9和Smad3的表达情况。结果:与维吾尔族人群正常皮肤相比,cxcl9在寻常型银屑病皮损中的表达明显增加,主要以真皮乳头顶端为主,且差异具有明显统计学意义(χ2=15.604,P0.05,差异无统计学意义。结论:新疆维吾尔族寻常型银屑病皮损中cxcl9表达较正常皮肤升高,通过JAK/STAT信号通路在寻常型银屑病的炎症反应中发挥重要作用。Smad3的表达维吾尔族寻常型银屑病皮损及正常皮肤中差异无统计学意义,可能在寻常型银屑病发病机制中没有发挥主要作用。

关键词：银屑病维吾尔族 JAK/STAT cxcl9 Smad3

半夏泻心汤对Hp阳性慢性萎缩性胃炎小鼠趋化因子cxcl9、cxcl10及炎性因子的影响

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时珍国医国药 2021年第10期32卷 2316-2320页

作者：李慧臻王天麟马佳乐刘琳孔祥茹天津中医药大学第二附属医院天津300150

目的研究半夏泻心汤对Hp阳性慢性萎缩性胃炎(Chronic atrophic gastritis,CAG)小鼠胃组织及血清中趋化因子cxcl9、cxcl10及炎性因子IL-17A、IL-6、IL-22的影响,揭示半夏泻心汤治疗Hp相关性胃炎的作用机制。方法将64只C57BL/6小鼠随机分... 详细信息

目的研究半夏泻心汤对Hp阳性慢性萎缩性胃炎(Chronic atrophic gastritis,CAG)小鼠胃组织及血清中趋化因子cxcl9、cxcl10及炎性因子IL-17A、IL-6、IL-22的影响,揭示半夏泻心汤治疗Hp相关性胃炎的作用机制。方法将64只C57BL/6小鼠随机分为正常组10只、造模组54只。造模组予Hp菌液灌服、自由饮用MNNG溶液。8周后,随机抽取造模组4只小鼠检测是否造模成功。将已成模的50只Hp阳性CAG小鼠随机分为模型组、四联组、半夏泻心汤全方组、辛开组、苦降组各10只。正常组、模型组予生理盐水灌胃;四联组予四联杀菌药物灌胃;全方组予半夏泻心汤浓煎剂灌胃;辛开组予辛开汤浓煎剂灌胃;苦降组予苦降汤浓煎剂灌胃。ELISA检测小鼠趋化因子cxcl9、cxcl10及炎性因子IL-17A、IL-6、IL-22的表达。结果模型组小鼠可见胃黏膜层变薄,腺体数量减少、结构紊乱、排列形态扭曲,部分可见肠化、异型增生。药物干预后均不同程度的改善上述病理表现。与正常组对比,模型组小鼠胃组织及血清中cxcl-9、cxcl-10表达水平均升高(Pcxcl-9、cxcl-10表达均下降(Pcxcl-10表达下降(Pcxcl-9、cxcl-10及IL-17A、IL-6、IL-22表达有不同程度的下降。结论Hp阳性CAG小鼠胃组织及血清中cxcl9、cxcl10表达均明显升高,半夏泻心汤及四联杀菌法可通过调控趋化因子cxcl9、cxcl10,降低炎性因子IL-17A、IL-6、IL-22表达,发挥治疗CAG的作用。

关键词：半夏泻心汤幽门螺杆菌相关性胃炎趋化因子 cxcl9 cxcl10 炎性因子

Anti-PD-L1 antibody enhances curative effect of cryoablation via antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity mediating PD-L1^(high)CD11b^(+)cells elimination in hepatocellular carcinoma

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Acta Pharmaceutica Sinica B 2023年第2期13卷 632-647页

作者： Jizhou Tan Ting Liu Wenzhe Fan Jialiang Wei Bowen Zhu Yafang Liu Lingwei Liu Xiaokai Zhang Songling Chen Haibiao Lin Yuanqing Zhang Jiaping Li Department of Interventional Oncology the First Affiliated HospitalSun Yat-sen UniversityGuangzhou 510080China Department of Stomatology the First Affiliated HospitalSun Yat-sen UniversityGuangzhou 510080China Department of Laboratory Medicine the Second Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese MedicineGuangdong Provincial Hospital of TraditionalChinese MedicineGuangzhou 510120China Second Clinical Medical College Guangzhou University of Chinese MedicineGuangzhou 510006China School of Pharmaceutical Sciences Sun Yat-sen UniversityGuangzhou 510006China

Cryoablation(CRA)and microwave ablation(MWA)are two main local treatments for hepatocellular carcinoma(HCC).However,which one is more curative and suitable for combining with immunotherapy is still controversial.Herein,CRA induced higher tumoral PD-L1 expression and more T cells infiltration,but less PD-L1^(high)CD11b^(+)myeloid cells infiltration than MWA in HCC.Furthermore,CRA had better curative effect than MWA for anti-PD-L1 combination therapy in mouse models.Mechanistically,anti-PD-L1 antibody facilitated infiltration of CD8^(+)T cells by enhancing the secretion of cxcl9 from cDC1 cells after CRA therapy.On the other hand,anti-PD-L1 antibody promoted the infiltration of NK cells to eliminate PD-L1^(high)CD11b^(+)myeloid cells by antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity(ADCC)effect after CRA therapy.Both aspects relieved the immunosuppressive microenvironment after CRA therapy.Notably,the wild-type PD-L1 Avelumab(Bavencio),compared to the mutant PD-L1 atezolizumab(Tecentriq),was better at inducing the ADCC effect to target PD-L1^(high)CD11b^(+)myeloid cells.Collectively,our study uncovered the novel insights that CRA showed superior curative effect than MWA in combining with anti-PD-L1 antibody by strengthening CTL/NK cell immune responses,which provided a strong rationale for combining CRA and PD-L1 blockade in the clinical treatment for HCC.

关键词： Hepatocellular carcinoma Immunotherapy Cryoablation Microwave ablation cxcl9 NK cells Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity Immunosuppressive microenvironment

NAT1、cxcl9、BPI和HLA-DQB1在溃疡性结肠炎中的表达

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实用医学杂志 2010年第22期26卷 4084-4086页

作者：缪应雷李红纳杜艳肖玉良陈丽芳昆明医学院第一附属医院消化科 650031 昆明医学院第一附属医院检验科 650031

目的:通过检测寡聚核苷酸芯片结果中表达上调的BPI、cxcl9、NAT1和下调的HLA-DQB1以提高基因芯片的可信度,同时为UC的发病机制、病因诊断及基因治疗的靶点提供一定的依据。方法:采用半定量RT-PCR技术检测这四个基因在21例溃疡性结肠炎(... 详细信息

目的:通过检测寡聚核苷酸芯片结果中表达上调的BPI、cxcl9、NAT1和下调的HLA-DQB1以提高基因芯片的可信度,同时为UC的发病机制、病因诊断及基因治疗的靶点提供一定的依据。方法:采用半定量RT-PCR技术检测这四个基因在21例溃疡性结肠炎(UC)组和21例正常组外周血中的相对表达量。结果:NAT1、BPI和cxcl9在UC组表达水平较正常组高,差异有统计学意义(P<0.05),与基因芯片结果吻合;HLA-DQB1在UC组中较正常组中表达上调,与基因芯片结果不相吻合。结论:基因芯片和RT-PCR分析基因表达变化都是可信的,它们在基因表达谱分析、易感基因的筛选研究等都具有极其重要的作用。

关键词：结肠炎溃疡性 NATl cxcl9 BPI HIJA—DQBI

趋化因子cxcl9及其受体CXCR3在肝纤维化损伤中的基因表达变化研究

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趋化因子CXCL9及其受体CXCR3在肝纤维化损伤中的基因表达变化研究

作者：李一上海交通大学

学位级别：硕士

肝脏纤维化是指肝细胞发生炎症刺激及坏死时,肝脏中的胶原蛋白、糖蛋白和蛋白多糖等细胞外基质的增生与降解失去平衡,导致肝脏内纤维结缔组织异常沉积的病理过程。轻者称为纤维化,重者经过反复持续的炎症和坏死影响,纤维不断增生,伴有... 详细信息

肝脏纤维化是指肝细胞发生炎症刺激及坏死时,肝脏中的胶原蛋白、糖蛋白和蛋白多糖等细胞外基质的增生与降解失去平衡,导致肝脏内纤维结缔组织异常沉积的病理过程。轻者称为纤维化,重者经过反复持续的炎症和坏死影响,纤维不断增生,伴有肝小叶结构改建、假小叶和结节形成,即发展为肝硬化。肝纤维化是病毒性肝炎等各种慢性肝病导致肝癌的重要途径。现阶段最有效的治疗方法仅限于在肝硬化末期的肝移植。因此确定肝纤维化的产生和发展机制,以及如何逆转纤维化是当前研究的重要内容。趋化因子是一类具有细胞因子功能的趋化分子,在许多组织中起着调节炎症反应的作用,在急慢性肝病中,趋化因子一般通过调节免疫细胞(单核细胞、T细胞)在肝脏组织的渗入,以间接的方式参与损伤反应。近年来的研究发现,趋化因子也可以直接作用于肝细胞和星状细胞等肝脏宿主细胞,参与炎症和纤维化损伤应答;同时,针对基因敲除动物的研究也表明,单独的趋化因子和趋化因子受体也能对肝脏的毒性损伤与炎症反应产生影响。本文通过建立肝纤维化损伤和恢复的实验动物模型,研究肝脏组织阶段性的病理与血清学指标的变化规律,检验模型质量,并研究cxcl9及其受体CXCR3在肝脏纤维化损伤与恢复中的表达变化。最后尝试对CXCR3-/-小鼠建立部分肝脏切除模型,为进一步研究做好铺垫。诱导肝纤维化模型,采用腹腔注射四氯化碳的方法进行。大鼠按照2ml/kg剂量,腹腔注射四氯化碳与橄榄油1:1的混合溶剂,每周注射2次。2周后改为1ml/kg剂量,直至造模成功;对照组仅注射溶剂。在预先设置的若干时间点,部分实验组动物停止注射四氯化碳,令其进入自恢复阶段。同时处死动物,采集血样与肝脏组织标本,用于血清学与组织学分析、定量PCR检测。随着四氯化碳反复多次注射,肝脏纤维化损伤程度也随之加深,越来越多的细胞外基质沉积,在造模的第12周,肝组织纤维化比例达到40%。在肝脏造模的自恢复阶段初期,细胞增殖明显,以期通过降解细胞外基质来重塑肝组织结构,随后肝脏胶原纤维的比例也慢慢降低至8%。在肝脏纤维化造模过程中,cxcl9及其受体CXCR在损伤初期就有表达,并在纤维化程度最严重的阶段达到高峰;建立了稳定的CXCR-/-小鼠部分肝脏切除模型,总结了手术流程和关键控制点,为后续进一步研究cxcl9和CXCR在肝脏损伤中表达规律做好了铺垫。

关键词：肝脏纤维化趋化因子 cxcl9 CXCR3

大鼠肾移植急性排斥反应模型中血清趋化因子cxcl9和cxcl10的表达及意义

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大鼠肾移植急性排斥反应模型中血清趋化因子CXCL9和CXCL10的表达...

作者：衡宝利南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景:肾移植是终末期肾功能衰竭目前最佳的治疗方法,是二十世纪生命科学领域具有代表性的重大成就,也是今后终末期肾病治疗的主要方向之一。新型免疫抑制剂的开发和应用,外科手术技术的改良和护理的精心加强,使移植病人和移植肾脏... 详细信息

研究背景:肾移植是终末期肾功能衰竭目前最佳的治疗方法,是二十世纪生命科学领域具有代表性的重大成就,也是今后终末期肾病治疗的主要方向之一。新型免疫抑制剂的开发和应用,外科手术技术的改良和护理的精心加强,使移植病人和移植肾脏的存活在近十年来有了显著的提高。但肾移植术后急性排斥反应的发生与反复发作使移植肾功能损伤;而目前,肾移植术后急性排斥反应的诊断尚缺乏敏感高效的特异指标,临床难以及时防治,最终导致移植肾功能损害。所以,寻求早期监测诊断方法,对保护和延长移植肾功能,至关重要。移植肾活检是诊断肾移植术后急性排斥反应的金标准。但在病理作出急性排斥反应诊断的同时,移植肾已经出现了不同程度的损伤,其功能也已经受到了影响。为能更早期地发现亚临床急性排斥反应,学者们提出肾移植术后移植肾定期序贯穿刺活检。移植肾穿刺是一种有创的检查方法,伴随一定程度的并发症,对于已出院病人行移植肾穿刺活检更是非常困难。因此,寻找一种无创、新型、高敏感性和特异性的前期预警诊断方法,成为国际移植界关注的焦点。而有学者提出急性排斥反应的发生是一个时间连续性的统一事件,当急性排斥反应发生初期仅出现某些特定分子的微小改变时,就及时对肾移植患者进行早期干预,可望有效阻止移植肾的进一步损伤。所以,在肾移植术后早期进行分子监测是一项重要的策略。趋化因子是一类包含4个保守半胱氨酸残基,具有化学趋化功能的多肽,其分子量多在8-12kDa之间。根据第1及第2个半胱氨酸之间所含其它氨基酸的的结构特点,可划分为4个亚族,分别为C、CC、CX3C、及CXC。趋化因子的主要作用是吸引免疫细胞到达免疫应答局部,参与免疫调节以及病理反应。IFN-γ诱导的单核因子（cxcl9/MIG）和IFN-γ诱导的10kDa的蛋白（cxcl10/IP-10）均为趋化因子CXC亚族的一员,二者均属于ELR-型趋化因子,是一种重要的血管稳定因子,在体内外均被证明有抑制血管生成作用。cxcl9可以反应炎症前期状态,可能是预警移植并发症的发生的有价值的标记物。而cxcl10在炎症等生物学过程中起重要作用,且是在同种异体肾移植术后检测到的第一个配体。cxcl9和cxcl10在干扰素γ信号通路中处于下游并吸引CXC类趋化因子受体3（CXCR3+）T细胞进入移植物,其对T淋巴细胞的募集效应可能在急性排斥反应发展过程中起关键作用,且通过不断循环产生放大其效应,二者的受体CXCR3和TH1 T细胞活化紧密相关并被证明对移植排斥有很高的预警价值。此外,国外有学者报道cxcl9和cxcl10可能与最早期急性排斥反应的发生有关联。由此可见,cxcl9和cxcl10可能是肾移植术后急性排斥反应容易监测的理想生物标记物。由于趋化因子在急性排斥反应时期驱动免疫细胞分化、迁移和增殖中的起到了关键作用,因此其在血液循环的水平和移植受者的免疫状态严密相关。国外有学者提出在确立术后血清中结合CXCR3的趋化因子在移植结局预测价值方面及外周血趋化因子表达在肾移植排斥反应中的价值有待研究。血清cxcl9、cxcl10在肾移植急性排斥反应前期可能起关键作用,其不但可能具有很高的诊断价值,更有可能成为急性排斥反应前期理想的干预靶点。而目前肾移植术后血清cxcl9和cxcl10水平与肾移植术后急性排斥反应的关系仍缺乏研究。在生物标记物的检测中,分析的客观、具有可验证性及统一的标准是很重要的。由于当前进行具有这些特性的人群大样本分析尚不能做到,这就提示我硕士学位论文们进行一定数量的动物模型实验对血清cxcl9和cxcl10在肾移植急性排斥反应中的作用进行研究是有必要的。而我们在前期工作中已成功建立大鼠、兔肾移植与大鼠肝、肾、胰器官簇移植的动物模型,并证实了 CD44是早期诊断急性排斥反应的预测因子,动态监测CD3、CD69、CD25及CD71的表达有助于急性排斥的早期诊断和鉴别诊断等。目的:本研究关注于cxcl9和cxcl10在肾移植术后急性排斥反应大鼠血清中的表达及意义。通过改良方法成功建立大鼠肾移植急性排斥反应模型,选择移植肾脏进行病理学评分和诊断,并采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法对肾移植术后急性排斥反应大鼠血清cxcl9和cxcl10水平进行检测以期能够为肾移植术后急性排斥反应发生前期的诊断研究提供可选的生物标记物。方法:一、大鼠肾移植急性排斥反应模型的建立1.动物分组健康雄性Brown Norway（BN）和Lewis近交系大鼠,体质量为200-250g,随机分为两组:①异基因移植组为急性排斥组（ARx,n=15）,BN大鼠为供体,Lewis大鼠为受体;②同基因移植组为对照组（con,n=15）,供受体均为Lewis大鼠。动物饲养于空调恒温动物房,室温控制在20～25℃,大鼠自行饮水进食,保持24小时正常昼夜节律,饲养适应环境一周后开始实验。2.手术方式大鼠肾动脉吻合采用端-侧连续缝合;肾静脉采用端-端一侧静脉壁采取连续缝合,另一侧采用

关键词：肾移植急性排斥反应大鼠 cxcl9 cxcl10