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基于狂犬病病毒cvs-11假病毒的中和抗体检测新技术及初步应用

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第10期36卷 775-778页

作者：邓瑶吕新军于鹏程许洪林唐青朱武洋谭文杰中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒学重点实验室北京102206 北京生物制品研究所有限责任公司第一研究室 100024

目的建立一种可替代快速荧光灶抑制试验（RFFIT法）的简易高通量狂犬病病毒中和抗体（RVNA）检测技术。方法我们构建了表达荧光素酶报告基因与cvs-11包膜蛋白的狂犬病病毒假病毒，建立了狂犬病病毒中和抗体检测技术（改良RFFIT方法），... 详细信息

目的建立一种可替代快速荧光灶抑制试验（RFFIT法）的简易高通量狂犬病病毒中和抗体（RVNA）检测技术。方法我们构建了表达荧光素酶报告基因与cvs-11包膜蛋白的狂犬病病毒假病毒，建立了狂犬病病毒中和抗体检测技术（改良RFFIT方法），与标准RFFIT方法结果平行比较，并进一步应用于北京地区宠物犬与饲养人群血清中和抗体检测。结果改良RFFIT方法与标准RFFIT方法平行检测的46份待检血清与5份阴性参比血清，符合率为100％，且使用cvs-11假病毒测得的样品RVNA数值与标准RFFIT所得数值高度相关（n=46，r=0．94，P〈0．0001）。改良RFFIT方法用于北京地区宠物犬与饲养人群血清中RVNA滴度测定，均为阳性，其平均IU值为33．01IU／ml。结论基于狂犬病病毒cvs-11假病毒的中和抗体检测技术简易高效，可替代传统RFFIT方法。本研究中北京地区宠物犬与饲养人群91份样本均可检出明显的狂犬病病毒保护性中和抗体。

关键词：狂犬病病毒中和抗体(RVNA) 快速荧光灶抑制试验 cvs-11 假病毒颗粒

狂犬病病毒cvs-11攻毒小鼠动物模型的建立及初步应用

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中华微生物学和免疫学杂志 2020年第4期40卷 300-304页

作者：宋云于鹏程朱武洋中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫健委生物安全重点实验室北京102200

目的:建立狂犬病病毒cvs-11以肌肉注射或脑内注射方式攻毒的BALB/c小鼠动物模型。方法:将由BSR细胞传代繁殖的滴度为2.7×10^7 FFU/ml的cvs-11毒株进行10-1~10-7倍系列稀释,分别以肌肉或脑内注射的方式对4周龄的雌性BALB/c小鼠进行攻毒... 详细信息

目的:建立狂犬病病毒cvs-11以肌肉注射或脑内注射方式攻毒的BALB/c小鼠动物模型。方法:将由BSR细胞传代繁殖的滴度为2.7×10^7 FFU/ml的cvs-11毒株进行10-1~10-7倍系列稀释,分别以肌肉或脑内注射的方式对4周龄的雌性BALB/c小鼠进行攻毒,观察小鼠发病死亡情况,并对所有攻毒小鼠的脑组织进行直接免疫荧光试验(direct fluorescent assay,DFA)及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测以确定小鼠死因。确定不同攻毒方式下小鼠的半数致死量(median lethal dose,LD 50),建立小鼠模型。根据已建立的小鼠模型,评估4种国内市售狂犬病疫苗对cvs-11暴露后小鼠的免疫保护效果。结果:BALB/c小鼠脑内攻毒后于第6~12天开始出现典型的神经症状并死亡,其LD 50为18.3/0.1 ml;肌肉注射攻毒的小鼠在第8~15天出现临床症状并死亡,LD 50为2.7×10^5/0.1 ml。DFA检测结果显示,所有死亡小鼠脑组织印片中均出现特异性黄绿色荧光,RT-PCR检测结果显示所有的扩增产物均出现大小约250 bp的明亮条带。以上结果提示狂犬病病毒感染是小鼠的致死原因。4种不同的市售狂犬病疫苗在无免疫球蛋白应用情况下的保护效果试验显示,接种其中1种疫苗暴露后小鼠的存活率为50%,接种其他3种疫苗小鼠的存活率为30%。以上结果表明,在无狂犬病被动免疫制剂使用的情况下,所选用的4种狂犬病疫苗对经cvs-11暴露后的小鼠提供了部分保护作用。结论:本研究建立了狂犬病病毒cvs-11不同攻毒方式下的BALB/c小鼠动物模型,为狂犬病及狂犬病疫苗的相关研究提供了一个技术平台。

关键词：狂犬病病毒 cvs-11 动物模型

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白藜芦醇对狂犬病病毒体外抑制作用研究

中华微生物学和免疫学杂志 2022年第6期42卷 472-477页

作者：刘茜何晴陶晓燕于鹏程刘淑清卢学新杨丽芬朱武洋中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫健委生物安全重点实验室北京102206 包头医学院公共卫生学院包头014040 河南科技学院动物科技学院新乡453003

目的探讨白藜芦醇对狂犬病病毒的体外抑制作用。方法以狂犬病病毒动物攻毒标准株cvs-11为模式病毒,针对狂犬病病毒感染周期,建立白藜芦醇处理下的cvs-11和BHK-21细胞组成的感染模型,通过直接免疫荧光、细胞荧光灶转化等方法检测白藜芦... 详细信息

目的探讨白藜芦醇对狂犬病病毒的体外抑制作用。方法以狂犬病病毒动物攻毒标准株cvs-11为模式病毒,针对狂犬病病毒感染周期,建立白藜芦醇处理下的cvs-11和BHK-21细胞组成的感染模型,通过直接免疫荧光、细胞荧光灶转化等方法检测白藜芦醇对狂犬病病毒的抑制作用。结果在不影响细胞生长的条件下,随着浓度的增加,白藜芦醇可阻滞病毒的吸附、干扰病毒进入细胞并抑制病毒的增殖,抑制率最高可达约95%。另外,白藜芦醇与病毒共孵育的结果显示,40μmol/L的白藜芦醇可直接杀灭病毒。结论白藜芦醇具有抑制狂犬病病毒活力的作用,且这种抑制效应具有剂量依赖性。

关键词： cvs-11 白藜芦醇病毒抑制效应

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小鼠唾液腺狂犬病病毒的分布研究

小鼠唾液腺狂犬病病毒的分布研究

作者：张丹玮吉林大学

学位级别：硕士

狂犬病是由嗜神经性的狂犬病病毒(RABV)引起的人兽共患病,主要通过患病动物唾液中所携带的病毒传播。RABV侵入体内后进入神经肌肉接头,通过神经元轴突逆轴浆到达中枢神经系统(CNS)并复制后,离心传播至外周神经及各个器官,包括唾液腺。... 详细信息

狂犬病是由嗜神经性的狂犬病病毒(RABV)引起的人兽共患病,主要通过患病动物唾液中所携带的病毒传播。RABV侵入体内后进入神经肌肉接头,通过神经元轴突逆轴浆到达中枢神经系统(CNS)并复制后,离心传播至外周神经及各个器官,包括唾液腺。狂犬病的传播主要依靠发病动物的咬伤,唾液中携带的RABV数量、伤口深度及距离中枢神经系统的距离等,决定了能否发病及潜伏期的长短,如伤口出现在头、面部时发病速度极快。野生食肉动物、流浪犬及猫是狂犬病传播的主要宿主。研究唾液中RABV与三对唾液腺组织间的关系,有助于厘清唾液中RABV的主要来源,可望对RABV在唾液中的间歇性分泌以及狂犬病的防护提供理论依据。目前发病动物唾液腺RABV分布和唾液中RABV的间歇性分泌机制等方面研究资料,尚待补充。本试验研究了RABV在小鼠3种唾液腺体和脑组织中的分布情况。用狂犬病毒街毒株PB4和实验室固定毒株cvs-11通过后肢肌肉接种21日龄雌鼠,接种病毒剂量为107MICLD50。在小鼠濒死期分别采集三大唾液腺(舌下腺、颌下腺和腮腺)和脑组织(大脑、小脑和海马体)。在N2A细胞上通过TCID50法测定小鼠3种腺体中RABV的效价、使用免疫荧光观察RABV在3种唾液腺中的分布、应用实时荧光定量PCR检测3种唾液腺中RABV N基因的拷贝数。同时应用荧光定量PCR检测脑组织中RABV N基因的拷贝数。此外,本实验将RABV接毒小鼠分组,每隔24 h采集3只接毒鼠和3只空白对照鼠的唾液腺和脑组织样品并进行荧光定量PCR检测,直至接毒小鼠全部死亡,以研究不同时间唾液腺和脑组织中病毒分布情况。实验结果表明,RABV在小鼠3种唾液腺体中分布存在显著差异,腮腺中RABV含量最多,效价高达1.5×104 IU/ml,其次为颌下腺,舌下腺病毒分布量最低。对不同时间RABV的组织分布检测发现,街毒株和固定毒在小鼠颌下腺、舌下腺和腮腺中的病毒含量随着接毒时间递增而增加,3-4天达到高峰,固定毒株的高峰期较街毒株稍早,RABV脑组织中的高峰期与唾液腺的高峰期几乎同步。本实验应用3种检测手段研究了RABV不同毒株在小鼠3种唾液腺体和脑组织中的分布,研究结果揭示腮腺是唾液腺中RABV的主要病毒来源。在哺乳动物中,撕咬、咀嚼等行为伴随着腮腺唾液向口腔的分泌,本实验结果为解析狂犬病病犬等动物唾液中RABV间歇性排毒提供了方向,对于人处置狂犬病疑似动物时的防护及阻断传播具有一定的学术价值。

关键词：狂犬病病毒唾液腺腮腺唾液 cvs-11 PB4

狂犬病细胞灭活疫苗的研制及在犬的免疫效果研究

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