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一个掌跖角化牙周破坏综合征家系ctsc基因的突变鉴定

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中华医学遗传学杂志 2016年第2期33卷 150-154页

作者：刘翠娴田智慧阳奇马倩倩徐湘民熊符南方医科大学基础医学院医学遗传学教研室广州510515 南方医院口腔科

目的对一个掌跖角化牙周破坏综合征家系进行临床表型分析和ctsc基因突变检测，揭示其分子机制，为遗传咨询提供依据。方法通过临床表型、口腔检查等进行临床诊断。用PCR扩增ctsc基因的外显子，之后采用Sanger测序法进行突变筛查，随后用... 详细信息

目的对一个掌跖角化牙周破坏综合征家系进行临床表型分析和ctsc基因突变检测，揭示其分子机制，为遗传咨询提供依据。方法通过临床表型、口腔检查等进行临床诊断。用PCR扩增ctsc基因的外显子，之后采用Sanger测序法进行突变筛查，随后用PolyPhen-2和SIFT软件进行突变有害性预测，同时用Swiss—Port软件预测ctsc蛋白的三级结构，并采用荧光定量PCR对患者及其父母的ctsc基因的mRNA进行定量分析，用Western印迹杂交检测野生型和突变型ctsc蛋白的表达差异。结果患者ctsc基因第7外显子存在c．901G〉A（p．G301S）纯合错义突变，其父母均为突变携带者。该突变位于酶的高度保守区，有害性预测结果显示为有害，导致蛋白三级结构发生改变，可能影响组织蛋白酶C的活性。ctsc基因突变型mRNA和蛋白的表达量与野生型的差异无统计学意义。结论首次在中国人群中发现ctsc基因c．901G〉A突变可导致掌跖角化牙周破坏综合征，扩展了ctsc基因的突变谱。

关键词：掌跖角化牙周破坏综合征 ctsc基因突变分析

SSUH2基因在牙齿发育中的分子机制研究一个掌跖角化牙周破坏综合征家系ctsc基因突变鉴定及产前诊断

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SSUH2基因在牙齿发育中的分子机制研究一个掌跖角化牙周破坏综合...

作者：刘翠娴南方医科大学

学位级别：硕士

背景：牙齿几乎存在于所有的脊椎动物中,从胚胎早期预定成牙部位到形成完整的牙齿,是一个连续、长期并且极其复杂的生物学过程,包括上皮间充质之间相互作用、细胞分化、组织矿化、成熟和牙齿萌出。牙齿是人体中最坚硬的器官,它由牙釉质... 详细信息

背景：牙齿几乎存在于所有的脊椎动物中,从胚胎早期预定成牙部位到形成完整的牙齿,是一个连续、长期并且极其复杂的生物学过程,包括上皮间充质之间相互作用、细胞分化、组织矿化、成熟和牙齿萌出。牙齿是人体中最坚硬的器官,它由牙釉质、牙本质和牙髓组成,其作为一个相对独立的整体也较容易展开发育过程的系列研究。因此,牙齿的发育过程已成为来源于上皮组织的器官发育与进化研究的最佳模型,成为了近年来研究的热点。尽管众多科学家一直致力于牙齿发育调控的研究,但截止目前为止,仍有诸多牙齿发育的机制还没被揭示,如遗传性牙本质发育不良的致病基因还没被发现,决定DSPP基因矿化特异性表达的具体机制仍不明了等。明确牙齿发育的调控机制是目前研究的热点也是难点,可以为牙齿的再生修复研究提供分子学基础,具有非常巨大的理论和临床意义。牙齿的发育是诸多信号分子之间相互作用的结果,主要包括BMMP、FGF、Hh和Wnt这四大类信号分子。BMP(Bone morphogenetic protein)是骨形成发生蛋白,除BMP-1外,其余均属于转化生长因子-β(TGF-β)超家族。BMP家族中的许多成员都参与牙齿早期发育,调控牙齿的形态发生、细胞增殖和分化以及牙齿的萌发的过程,在对维持牙齿正常发育具有至关重要的作用,其中BMP2和BMP4在牙胚发育启动阶段发挥重要作用,而且对磨牙牙尖的形成起关键作用。FGF (Fibroblast growth factor)成纤维细胞生长因子是一类肽类分子,它们通过与细胞膜上特异性受体的结合来发挥作用,以此来调节细胞生长。FGF信号蛋白在牙齿发育早期就已经有表达,能通过诱导Pax9、Paxl和Pix2等转录抑制的表达来决定牙齿的形成部位。Shh属于Hedgehog (Hh)刺猬蛋白中一员,在牙板期的上皮就开始表达,并参与到牙齿的早期发育。Shh信号通路由Shh糖蛋白配体、跨膜受体Patched (Ptc)及Smoothened (Smo)、核转录因子Gli(Gli1、Gli2和Gli3)等组成。Shh信号通路在牙胚发育早期上皮-间充质和上皮-上皮之间的信号传导中发挥重要作用,特别是调控上皮和间充质细胞的增殖,诱导早期牙形态发生。Wnt是一类分泌型糖蛋白,其信号通路包括经典的Wnt-β-catenin和非经典Wnt信号通路(Wnt/JNK通路和Wnt/ca2+通路)。研究表明几乎所有器官发生过程都必需有Wnt信号通路的调控,其在牙上皮和牙间充质之间的相互诱导过程中起着重要的作用。在我们的前期研究工作中,发现了1个导致牙本质发育不良I型新的致病基因SSUH2 (C3orf32,fls184),其位于3P26.1。有文献报道称SSUH2为伴侣分子,其表达与乳糜泻有关。除此之外,针对SSUH2基因的研究仍是一片空白。本实验室研究发现,有一个牙本质发育不良的大家系中所有患者都带有SSUH2基因c.353 C>A的一个杂合错义突变,经过分子学和动物模型研究,我们发现该基因的点突变会导致遗传性牙本质发育不良的表型产生,但是SSUH2参与到牙齿发育的何种信号通路以及怎样导致牙齿疾病表型产生等,仍未被揭示。所以,在本研究中我们将围绕此SSUH2基因在牙齿尤其是牙本质发育中的作用机制展开探讨。目的：揭示SSHU2基因导致牙本质发育不良疾病的分子调控机制,筛选出与SSUH2互作的蛋白,阐明该基因参与的牙齿发育相关通路。进一步完善对SSUH2基因的研究,并为牙齿尤其是牙本质和牙根的生理发育机制及相关的信号通路补充新的理论知识。材料与方法：1、研究材料：HEK293T细胞、牙龈成纤维细胞(HGF)、Ssuh2 knock out小鼠2、构建SSUH2表达载体。本研究选用pcDNA-3.1(+)-flag以及pET-41a(+)(带GST标签)来构建SSUH2过表达载体。在SSUH2的CDS区的正向引物5’端连入BamHⅠ,反向引物5’端连入Hindm,并通过这两个酶切位点将SSUH2连入pcDNA-3.1(+)-flag载体当中。pET-41A(+)-SSUH2载体构建引物的酶切位点加入顺序刚好相反,HindⅢ酶切位点加在SSUH2的CDS区正向引物5’端,BamHⅠ酶切位点则加在反向引物5’端,以此来将SSUH2连入pET-41A(+)原核表达载体当中。3、构建人SSUH2基因的过表达稳转HGF细胞株。将野生型和突变型的SSUH2基因分别构建到C端融合myc标签的慢病毒载体上,包装慢病毒,筛选出野生型和突变型SSUH2稳转HGF细胞株和空载对照HFG细胞株,并利用荧光定量PCR进行验证。4、利用免疫共沉淀(CO-IP)筛选与SSUH2有相互作用的蛋白。在HEK293T细胞中过表达flag-SSUH2融合蛋白,并利用flag标签抗体进行CO-IP实验,将IP产物进行SDS-PAGE电泳并用硝酸银染色,质谱技术鉴定差异表达的蛋白条带,并用CO-IP以及免疫印迹进行

关键词： SSUH2 牙齿发育牙本质发育不良分子机制表型分析掌跖角化牙周破坏综合征 ctsc基因突变分析产前诊断

掌跖角化-牙周破坏综合征(一家系)组织蛋白酶C基因突变及功能分析

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口腔医学研究 2022年第7期38卷 616-621页

作者：彭海龙杨媛秦满北京大学口腔医学院儿童口腔科北京100081

目的:对一家系中2名掌跖角化-牙周破坏综合征(Papillon-Lefèvre syndrome,PLS)患者及父母进行ctsc基因突变检测,并对突变的组织蛋白酶C进行简要功能分析。方法:(1)针对一个PLS综合征家系,对其进行ctsc基因测序筛查。(2)对研究中发现的C... 详细信息

目的:对一家系中2名掌跖角化-牙周破坏综合征(Papillon-Lefèvre syndrome,PLS)患者及父母进行ctsc基因突变检测,并对突变的组织蛋白酶C进行简要功能分析。方法:(1)针对一个PLS综合征家系,对其进行ctsc基因测序筛查。(2)对研究中发现的ctsc基因突变位点,采用蛋白质结构预测服务器I-TASSER进行组织蛋白酶C蛋白结构预测分析。(3)提取患者及父母外周静脉血中白细胞,测定组织蛋白酶C的活性,并与正常组对比。结果:(1)本家系中2名PLS患者均发现第六、七外显子的c.774 C>G(p.C258W)和c.1033 T>A(p.Y345N)杂合错义突变,其中c.1033 T>A为首次报道。(2)以上两位点突变后蛋白构象与野生型对比,整体结构并未发生明显改变。(3)2名PLS患者的组织蛋白酶C活性较正常对照组平均降低约77%,父亲及母亲的组织蛋白酶C活性降低约23%及63%。结论:本研究中2例PLS患者均存在ctsc基因的复合型杂合子突变,突变位点为c.774 C>G(p.C258W)和c.1033 T>A(p.Y345N),其中c.1033 T>A为新发现的突变位点。该复合型杂合突变并未造成组织蛋白酶C蛋白结构改变,但会造成组织蛋白酶C活性减低。

关键词：掌跖角化-牙周破坏综合征 ctsc基因组织蛋白酶C 基因突变

有汗性外胚叶发育不良一家系致病基因突变筛查

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中国麻风皮肤病杂志 2012年第6期28卷 400-402页

作者：王占想宋亚丽陈楠王震英张莉山东大学附属省立医院皮肤科山东济南250021

目的:寻找有汗性外胚叶发育不良家系GJB6、GJB2和ctsc突变基因。方法:抽提外周血DNA,PCR扩增GJB6、GJB2和ctsc基因编码区的所有外显子,扩增产物纯化后直接双向测序,并与基因组序列进行比对分析,查找有无突变。结果:候选基因编码区所有... 详细信息

目的:寻找有汗性外胚叶发育不良家系GJB6、GJB2和ctsc突变基因。方法:抽提外周血DNA,PCR扩增GJB6、GJB2和ctsc基因编码区的所有外显子,扩增产物纯化后直接双向测序,并与基因组序列进行比对分析,查找有无突变。结果:候选基因编码区所有外显子均未发现突变结论:GJB6、GJB2和ctsc基因编码区序列与本研究中有汗性外胚叶发育不良家系发病无关,致病基因待进一步研究。

关键词：有汗性外胚叶发育不良 GJB6基因 GJB2基因 ctsc基因