检索结果-南通市图书馆

作者：张琼贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:通过非标定量技术以及质谱分析构建人体冠状动脉粥样硬化性心脏病中左冠状动脉前降支的蛋白数据集,筛选潜在生物标志物;并探讨组织蛋白酶C在冠心病发生中通过p38 MAPK信号通路调控巨噬细胞极化的机制。方法:通过液相色谱-质谱联用... 详细信息

目的:通过非标定量技术以及质谱分析构建人体冠状动脉粥样硬化性心脏病中左冠状动脉前降支的蛋白数据集,筛选潜在生物标志物;并探讨组织蛋白酶C在冠心病发生中通过p38 MAPK信号通路调控巨噬细胞极化的机制。方法:通过液相色谱-质谱联用分析法获取肽段二级谱图并使用Maxquant（v1.***.6.0）对二级质谱数进行检索;通过蛋白注释和功能富集对肽段进行分析,利用DAVID和GSEA对差异表达蛋白进行功能富集,将得到的差异表达蛋白输入到STRING（v.10.5）在线分析网站进行蛋白互作网络的构建,并用Cytoscape可视化并筛选核心蛋白,最后将筛选的核心蛋白-ctsc进行功能验证实验;收集贵州医科大学法医学院司法鉴定中心2018年10月至2019年12月符合标准的尸检案例冠脉组织和采用Apo E-/-C57小鼠构建动脉粥样硬化模型收集的主动脉组织样本;人体冠脉分为三个组:A组为对照组（Control）:非疾病意外死亡的案例;B组为冠心病组（CHD）:患有冠心病但为非冠心病猝死;C组为冠心病猝死组（SCD）:患有冠心病且为冠心病猝死;动物实验分为两组,即对照组（Control）和动脉粥样硬化组（AS）。HE染色检测动脉血管内膜下斑块形成情况以及血管的狭窄程度;WB法检测ctsc、FAK、p-FAK以及p38 MAPK信号通路等相关蛋白的表达;IHC检测ctsc、TNF-α及CD206在动脉血管组织中的定位及表达。结果:通过质谱鉴定得到的肽段长度大多数分布在7-20个氨基酸之间,其分布符合生物检材质控要求;蛋白定量重复性检验显示本实验样本定量结果符合统计学上的一致性;通过液相色谱质谱联用分析共鉴定到29581.0条肽段,及2784.0个可定量的蛋白;生物信息学分析获得265个差异表达蛋白（P＜0.05）,GO及KEGG分析显示差异蛋白主要富集于中性粒细胞激活与免疫反应、细胞外基质及溶酶体通路等。GSEA的GO term分析结果显示,SCD组中上调的蛋白集主要与溶酶体腔有关（NES=3.444,FDR q=0.000）,GSEA的KEGG结果也证实了差异蛋白主要与溶酶体途径相关（NES=2.444,FDR q=0.000）。通过蛋白网络互作分析获得4个核心模块,其中筛选出相较于对照组高表达的半胱氨酸蛋白酶家族成员CTSZ、ctsc、CTSF、CTSD、CTSB、CTSA为核心基因。人体实验结果:WB和IHC结果显示:ctsc在冠心病中表达上调（P＜0.05）,且在冠心病猝死中的表达高于冠状动脉粥样硬化组（P＜0.05）;在冠状动脉粥样硬化和冠心病猝死组中,FAK及其磷酸化水平升高（P＜0.05）,p38及其磷酸化水平升高（P＜0.05）,且均在冠心病猝死组高于冠状动脉粥样硬化组（P＜0.05）;与对照组相比,M1巨噬细胞标志蛋白TNF-α在冠状动脉粥样硬化和冠心病猝死组中均显著升高（P＜0.05）,且冠心病猝死组的表达高于冠状动脉粥样硬化组（P＜0.05）;M2巨噬细胞标志蛋白CD206在冠状动脉粥样硬化组和冠心病猝死组中的表达无显著差异性（P＞0.05）。皮尔森相关系数检验结果示:FAK的表达随ctsc表达升高而升高,两者之间的表达呈显著正相关关系（r=0.775,CI 95%P=0.000）;p38的表达与ctsc呈显著正相关关系（r=0.813,CI 95%P=0.000）;TNF-α的表达与ctsc呈显著正相关关系（r=0.805,CI 95%P=0.000）。动物实验结果:血脂检测结果中,与对照相比,TG、TC以及LDL-C血清含量在实验组中显著升高,而HDL-C的血清含量明显低于对照组（P＜0.05）;大体油红O染色显示实验组主动脉内膜着色较对照组明显加深;HE染色显示与对照组相比,实验组小鼠主动脉内膜下大量脂质堆积,粥样硬化斑块形成,管腔明显狭窄;IHC染色显示ctsc阳性表达主要在泡沫细胞胞质中,与对照组相比,实验组表达显著升高（P＜0.05）;WB结果显示:实验组小鼠主动脉内FAK、p38及其磷酸化水平均显著高于对照组（P＜0.05）,与对照组相比,实验组ctsc和TNF-α表达水平显著增加（P＜0.05）。结论:从冠心病左冠状动脉前降支蛋白数据集中筛选ctsc作为冠心病猝死的潜在生物标志物;ctsc可能通过FAK诱导的p38 MAPK信号通路调控巨噬细胞向M1型极化,引起炎症因子释放增加,增强炎症反应,促进动脉粥样硬化斑块形成及发展,进而参与冠心病发展进程。

关键词： ctsc 冠心病动脉粥样硬化 p38 MAPK信号通路巨噬细胞极化

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循环肿瘤细胞(CTC)及循环肿瘤干细胞(ctsc)的检测与结直肠癌临床资料的相关性分析

循环肿瘤细胞(CTC)及循环肿瘤干细胞(CTSC)的检测与结直肠癌临床...

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作者：刘巧珍福建医科大学

学位级别：硕士

目的：通过检测结直肠肿瘤患者外周血中的循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTC）以及循环肿瘤干细胞(circulating tumor stem cells, ctsc)，分析其数目与患者临床分期、肿瘤淋巴结转移、肿瘤远端转移等的相关性，验证它们作为... 详细信息

目的：通过检测结直肠肿瘤患者外周血中的循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTC）以及循环肿瘤干细胞(circulating tumor stem cells, ctsc)，分析其数目与患者临床分期、肿瘤淋巴结转移、肿瘤远端转移等的相关性，验证它们作为患者预后评判指标的可行性，初步探讨CTC及ctsc与肿瘤转移的相关性。方法：本论文入组首诊初治结直肠癌患者50人，在其手术治疗前，以及治疗后一周各抽取外周血15ml，利用Ficoll淋巴细胞分离液分离出外周血单个核细胞后，平均分成两份： CTC组标记表面标记物--CD45、EpCAM、CK，ctsc组标记表面标记物--CD45、EpCAM、CD44、CD133，并利用超高速流式细胞分选仪MOFLO XDP进行CTC及ctsc的检测分析。结果：判定CD45-/EpCAM+/CK+细胞为CTC，CD45-/EpCAM+/CD44+细胞为ctsc1， CD45-/EpCAM+/CD133+细胞为ctsc2，CD45-/EpCAM+/CD44+/CD133+细胞为ctsc3。判定手术前（手术后）检测出CTC≥2个/7.5ml外周血者为阳性结果，CTCctsc1≥1个/7.5ml外周血者为阳性结果，则ctsc1ctsc2≥1个/7.5ml外周血者为阳性结果，则ctsc2ctsc3≥1个/7.5ml外周血者为阳性结果，ctsc3ctsc1阳性检出率为44%,ctsc2检出率为4%;手术后CTC阳性检出率为38%，ctsc1阳性检出率为54%，ctsc2阳性检出率为6%，均较术前增高但并不具有统计学意义;手术前后的样本均未检测出CD44、CD133双阳的细胞，ctsc3阳性检出率为0%。（2）手术前CTC与肿瘤的大小、T分期（浸润深度）有关（P均小于0.05），与患者年龄、性别、TNM分期、N分期及M分期都不具有显著相关性;而手术后CTC则与肿瘤的T分期、N分期（淋巴结转移）、M分期（远处转移）均具有显著相关性（P均小于0.05），与患者年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期不具有显著相关性。（3）手术前ctsc1与肿瘤的T分期有关（Pctsc1则与患者年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、T分期、M分期及N分期均无显著相关性（P>0.05）。（4）综合术前、术后CTC、ctsc1的指标与肿瘤的TNM分期和M分期具有显著相关性(Pctsc1与肿瘤的浸润深度具有相关性。CD44作为结直肠癌ctsc的检测指标优于CD133。（3）ctsc的检测可能是CTC检测的有益补充。

关键词： CTC ctsc CD44 CD133 结直肠癌

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组织蛋白酶C在鼠、人组织中的表达研究

组织蛋白酶C在鼠、人组织中的表达研究

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作者：胡鑫第四军医大学

学位级别：硕士

【背景】组织蛋白酶是广泛存在于多种组织细胞溶酶体内的一类蛋白水解酶,在机体各种生理活动中发挥重要作用。组织蛋白酶种类较多,并具有一定的组织特异性,不同的细胞,甚至是同一种细胞处于不同的生理环境所表达的蛋白酶都不同。根据催... 详细信息

【背景】组织蛋白酶是广泛存在于多种组织细胞溶酶体内的一类蛋白水解酶,在机体各种生理活动中发挥重要作用。组织蛋白酶种类较多,并具有一定的组织特异性,不同的细胞,甚至是同一种细胞处于不同的生理环境所表达的蛋白酶都不同。根据催化中心的不同,组织蛋白酶可分为三类:丝氨酸组织蛋白酶(组织蛋白酶A和G),半胱氨酸组织蛋白酶(组织蛋白酶B、C、L、H、S等),和天冬氨酸组织蛋白酶(组织蛋白酶D和E)。迄今为止,虽然人们已经发现了共10余种组织蛋白酶,但有关其生理功能的了解还远远不够。组织蛋白酶C(Cathepsin C,Cat C),即为其中的一种。组织蛋白酶C又称二肽基肽酶I(DPPI),该酶发现于十九世纪40年代,是一种溶酶体半胱氨酸蛋白酶,已有的研究表明,该酶在炎症细胞中表达水平较高,可能与颗粒酶的激活有关。除此之外,虽然检测到该酶在多种组织中均广泛表达,但表达情况与功能尚不明确。1999年Toomes等人通过基因检测手段证实,组织蛋白酶C基因(ctsc)突变可引发一种遗传性疾病--掌跖角化综合征(PLS),其典型临床症状为早发型牙周炎并伴有皮肤过度角化,和/或化脓性皮炎,肝、肺脓肿等,从而引发人们对该蛋白酶的关注。该病由法国人Papillon和Lefèvre于1924年首次报告,患病率约为百万分之一到四。迄今为止,不同的研究在PLS患者体内发现多个组织蛋白酶C突变位点,并在多种以早发性牙周炎和/或伴有皮肤过角化为表现的疾病中,如Haim—Munk综合征(HMS)和青春期前牙周炎(PP)中都发现了组织蛋白酶C的基因突变。临床发现,这类疾病的病变主要集中于机体内、外表层器官或组织——牙龈和皮肤,于是我们推测,组织蛋白酶C可能与上皮细胞功能密切相关,该酶的基因突变很可能导致上皮组织的生理功能受到严重影响,从而使牙龈和皮肤局部的防御能力下降,进一步导致疾病的发生。为了证实我们的猜测,在本研究中我们以小鼠多种健康器官的上皮组织、创伤或感染的皮肤,以及人慢性牙周炎牙龈组织、多种口腔黏膜病组织为研究对象,观察了组织蛋白酶C在其中的表达变化,为深入研究组织蛋白酶C的生物学功能提供形态学依据。另外,为了初步探讨组织蛋白酶C的变化与上皮细胞免疫功能变化之间的关系,我们还检测了部分组织中,与上皮细胞免疫密切相关的Toll样受体4的表达变化,以期为进一步深入研究提供参考。【目的】研究健康小鼠多种器官上皮组织中组织蛋白酶C的表达,小鼠皮肤创伤\感染模型中组织蛋白酶C的表达,以及人类牙周病和多种黏膜病组织中组织蛋白酶C和TLR4的表达。【方法】1、小鼠正常生理状态下多种器官上皮组织中组织蛋白酶C的表达研究取C57小鼠肝脏、肺、小肠、膀胱、颊黏膜、牙龈、脚掌皮肤和背部皮肤组织,进行组织蛋白酶C免疫组化染色观察。2、小鼠皮肤创伤/感染状态下组织蛋白酶C的表达变化C57小鼠随机分为3大组(对照组和两个实验组),两实验组分别再随机分为3小组:即健康对照组,12h、24h、48h单纯创伤组,12h、24h、48h创伤合并感染组。单纯创伤组和创伤合并感染组分别在小鼠脚掌皮肤做创伤及创伤合并感染处理,分别于各时间点取材。进行HE染色和组织蛋白酶C免疫组化染色观察。3、人牙周病、多种黏膜病组织中组织蛋白酶C和TLR4的表达研究取人类慢性牙周炎、口腔扁平苔藓、盘状红斑狼疮、白斑和鳞癌组织标本,进行组织蛋白酶C、Toll样受体4(TLR4)免疫组化染色观察。【结果】1、小鼠组织蛋白酶C在肝脏、肺、小肠、膀胱上皮组织中均有较强表达,而颊黏膜、牙龈黏膜、脚掌皮肤及背部皮肤上皮中的表达较弱或不表达。2、HE染色结果显示小鼠皮肤创伤/感染模型建造成功。免疫组化染色结果显示:健康对照组小鼠皮肤组织蛋白酶C表达不明显,而单纯创伤组和创伤合并感染组三个时间点皮肤的上皮和结缔组织中均有组织蛋白酶C染色,染色主要集中在上皮的基底层和棘层细胞,以及结缔组织的炎性细胞中。另外,两个实验组内组织蛋白酶C染色强度随实验时间的增加而呈增强趋势,且创伤合并感染组染色强度略高于单纯创伤组。3、组织蛋白酶C在慢性牙周炎、口腔扁平苔藓、盘状狼疮、白斑和鳞癌组织中均有不同强度的表达,主要表达在上皮的角化层和棘层,以及结缔组织的炎性细胞中;部分标本TLR4表达情况与组织蛋白酶C相似。【结论】1、组织蛋白酶C在小鼠不同器官上皮中的表达各异,推测其在维护上皮细胞正常生理功能方面具有一定的作用。2、组织蛋白酶C在创伤/感染小鼠皮肤结缔组织和上皮中表达上调,提示其与皮肤上皮的创面愈合和炎症反应有密切的关系,可能参与上皮细胞的增殖和分化、及局部免疫防御。3、在处于不同免疫微环境的疾病组织中,组织蛋白酶C的表达主要集中在固有免疫、自身免疫及异常增生情况下的上皮细胞和免疫炎性细胞中,与TLR4的表达有一定相似性,提示组织蛋白酶C可能与上皮细胞免疫功能的发挥有一定关系。

关键词：组织蛋白酶C Cathepsin C ctsc DPPI TLR4 免疫

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密闭式吸痰管在RICU机械通气患者中的应用分析

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大家健康(学术版) 2014年第14期 88-89页

作者：王瑞霞河北省邯郸市第四医院

目的:对比密闭式吸痰管（ctsc）和开放式吸痰管（OTSC）应用于重症监护室（RICU）采用机械通气（MV）患者的吸痰效果,探讨ctsc的应用优势及原因。方法:抽取2012年12月;013年12月来我院进行RICU机械通气治疗的患者64名,随机分为密闭组和... 详细信息

目的:对比密闭式吸痰管（ctsc）和开放式吸痰管（OTSC）应用于重症监护室（RICU）采用机械通气（MV）患者的吸痰效果,探讨ctsc的应用优势及原因。方法:抽取2012年12月;013年12月来我院进行RICU机械通气治疗的患者64名,随机分为密闭组和开放组两组各32名,分别用ctsc和OTSC对其进行吸痰,并对两组的效果进行分析比较。结果:在吸痰进行过程中和结束后1min内,密闭组的患者的末梢血氧饱和度（SpO2）、呼吸频率（RR）、心率（HR）与开放组比均有明显的差异（P0.05）,呼吸机相关性肺炎（VAP）的发生率均明显低于开放组（Pctsc的应用能够明显减少患者在吸痰时SpO2、RR和HR指标的变化,并能够有效减少患者VAP的发生。

关键词： ctsc RICU 机械通气应用

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