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宫颈癌中长链非编码RNA crnde表达及其临床意义

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中国肿瘤临床 2015年第14期42卷 705-708页

作者：韩懿劳美琼雷巧如李艳娜广东省开平市中心医院产科广东省开平市529300 广东省开平市中心医院妇科广东省开平市529300

目的:探讨长链非编码RNA(Lnc RNA)crnde在宫颈癌中表达及其临床意义。方法:收集广东省开平市中心医院行手术切除的宫颈癌组织及癌旁组织标本87例,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测Lnc RNA crnde表达差异,分析其与临床病理特征的关系。结果:... 详细信息

目的:探讨长链非编码RNA(Lnc RNA)crnde在宫颈癌中表达及其临床意义。方法:收集广东省开平市中心医院行手术切除的宫颈癌组织及癌旁组织标本87例,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测Lnc RNA crnde表达差异,分析其与临床病理特征的关系。结果:与癌旁组织比较Lnc RNA crnde在宫颈癌组织中呈高表达(Pcrnde高表达与宫颈癌FIGO分期,淋巴结转移,肿瘤的侵袭深度相关。此外,Lnc RNA crnde高表达较低表达者的生存时间缩短(Pcrnde可作为宫颈癌患者独立的预后因子。结论:Lnc RNA crnde可作为宫颈癌独立的预后标志物和潜在的治疗靶点。

关键词：长链非编码RNA crnde 宫颈癌临床预后

crnde调控Hippo通路对酸性环境下胰腺癌恶性生物学行为的影响

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CRNDE调控Hippo通路对酸性环境下胰腺癌恶性生物学行为的影响

作者：许甜电子科技大学

学位级别：硕士

研究背景:研究表明长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一种新型的基因表达调控因子,尽管其本身不具备编码功能性蛋白质的能力,但是能在表观遗传学、转录水平及转录后修饰等多个层面上调控不同种类的人类基因的表达水平,在各... 详细信息

研究背景:研究表明长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一种新型的基因表达调控因子,尽管其本身不具备编码功能性蛋白质的能力,但是能在表观遗传学、转录水平及转录后修饰等多个层面上调控不同种类的人类基因的表达水平,在各种恶性肿瘤发生发展过程中担当重要角色。最近,研究发现酸性微环境可通过诱导细胞染色体的稳定性降低、调控基因表达等多种作用机制影响肿瘤的发生发展。酸性微环境不仅在人类肿瘤恶性转化的发生发展过程中扮演着重要角色,而且对肿瘤药物治疗的疗效也有较为显著的影响。然而,目前对于酸性微环境如何调控lncRNA表达及在胰腺癌发生发展中作用机制尚不明确。研究目的:基于前期研究结果发现lncRNA crnde在胰腺癌组织和细胞中异常高表达,本研究旨在探讨酸性微环境对lncRNA crnde在胰腺癌细胞中表达的影响,并阐明在酸性微环境下lncRNA crnde是否通过调控Hippo信号通路来影响胰腺癌细胞的各种恶性生物学行为。研究方法:本研究首先采用实时定量RT-PCR检测lncRNA crnde在20对胰腺癌组织和癌旁正常组织中的表达情况。然后,构建lncRNA crnde的siRNA干扰质粒,转染入胰腺癌细胞后采用实时定量RT-PCR和western blot方法,研究在酸性环境下胰腺癌细胞中Hippo信号通路的主要成员以及效应因子YAP/TAZ的表达情况。最后,采用CCK8、流式细胞术、Transwell等体外实验技术,检测干扰lncRNA crnde基因表达后,酸性微环境对胰腺癌细胞的增殖、凋亡和侵袭能力的影响。结果与讨论:本研究结果表明lncRNA crnde在胰腺癌组织中的表达水平明显高于癌旁正常组织(Pcrnde的表达明显高于对照组;成功构建lncRNA crnde的siRNA干扰质粒转染入胰腺癌细胞后,能够有效地抑制Hippo信号通路的活化,下调效应因子YAP/TAZ的表达水平;而且还发现在酸性环境下,干扰lncRNA crnde基因表达后可以显著抑制胰腺癌细胞增殖、促进细胞凋亡和降低体外侵袭能力。

关键词： crnde Hippo信号通路酸性微环境胰腺癌恶性生物学行为

lncRNA crnde在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

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中国肿瘤生物治疗杂志 2017年第8期24卷 889-894页

作者：李晓华田德兴唐微但小苹胡绳肖贞良成都市第六人民医院呼吸科四川成都610000 成都军区总医院呼吸科四川成都610083

目的:探讨结直肠差异表达长链非编码RNA crnde(colorectal neoplasia differentially expressed)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织标本中的表达及其临床意义。方法:收集2011年1月至2015年12月成都军区总医院行根治性或姑息性切除术的NSCLC患者... 详细信息

目的:探讨结直肠差异表达长链非编码RNA crnde(colorectal neoplasia differentially expressed)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织标本中的表达及其临床意义。方法:收集2011年1月至2015年12月成都军区总医院行根治性或姑息性切除术的NSCLC患者137例,以相应癌旁组织和29例肺外伤非肺癌患者的正常肺组织作为对照,通过实时荧光定量PCR法检测lncRNA crnde在癌组织及癌旁组织标本中的表达,分析其表达与患者临床病理特征及预后的关系。结果:lncRNA crnde在肺癌癌组织中的平均表达水平为5.283±0.245,与非肿瘤组织(1.098±0.082)比较,差异有统计学意义(t=14.59,Pcrnde在肺癌组织标本中的表达较癌旁组织明显增高。lncRNA crnde的表达与患者的年龄、性别、吸烟史、肿瘤大小、淋巴结转移及肿瘤分化无关(均P>0.05);与疾病分期、远处转移、病理类型及生存状态明显相关(均Pcrnde高表达水平与NSCLC中的病理类型相关(Pcrnde的患者的PFS为(20.00±1.72)个月,较低表达者(34.07±1.97)缩短,差异有统计学意义(χ~2=15.940,Pcrnde的患者的OS为(47.50±2.31)个月,较高表达者(32.15±2.19)明显延长,差异有统计学意义(χ2=12.40,Pcrnde的表达、远处转移及临床分期是NSCLC独立的预后因素(Pcrnde参与调节NSCLC的发生发展,可作为潜在的NSCLC诊断和预后评估的生物标志物。

关键词： lncRNA crnde 非小细胞肺癌生物标志物临床意义

crnde促进骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭机制的研究

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CRNDE促进骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭机制的研究

作者：丁晓敏上海交通大学

学位级别：硕士

目的1、探究长非编码RNA,crnde在骨肉瘤发生发展中的生物学作用及相关机制。2、探究卡博替尼对crnde促骨肉瘤细胞增殖和迁移的抑制作用。3、探究骨肉瘤组织中MIP4的表达及其与肺转移的相关性。方法1、通过原位杂交和QRT-PCR方法检测45... 详细信息

目的1、探究长非编码RNA,crnde在骨肉瘤发生发展中的生物学作用及相关机制。2、探究卡博替尼对crnde促骨肉瘤细胞增殖和迁移的抑制作用。3、探究骨肉瘤组织中MIP4的表达及其与肺转移的相关性。方法1、通过原位杂交和QRT-PCR方法检测45例骨肉瘤组织和与其配对的非肿瘤组织中crnde的表达水平。并结合临床资料,分析这45例骨肉瘤患者临床病理特征和预后之间的相关性。2、构建crnde过表达和干扰慢病毒载体,转染入MG63细胞,筛选出转染效果最好的载体并构建稳转株。3、通过Star Base数据库分析出crnde与mi R-136-5p之间可能存在竞争性抑制,将crnde与mi R-136-5p结合的位点序列克隆并插入psi CHECK2载体,双荧光素酶实验验证CRNED为mi R-136-5p的ce RNA调控因子,Target Scan数据库预测mi R-136-5p靶向调控的基因可能为MRP9,构建荧光素酶报告载体,通过双荧光素酶实验证实MRP9是mi R-136-5p的下游靶基因。构建mi R-136过表达质粒并转入crnde过表达稳转株中,QRT-PCR及Western blot实验检测MRP9的表达水平,证实crnde通过抑制mi R-136-5p而间接上调MRP9的表达。4、CCK8实验、细胞划痕侵袭实验从体外验证crnde通过mi R-136-5p/MRP9轴来调控骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。5、构建骨肉瘤裸鼠模型,体内验证crnde对骨肉瘤细胞增殖的影响。用免疫组织化学染色法、QRT-PCR方法检测裸鼠肿瘤组织中MRP9的表达情况。6、用卡博替尼处理MG63细胞,通过CCK8实验、划痕侵袭实验检测卡博替尼对crnde促骨肉瘤细胞增殖迁移能力的抑制情况。7、用免疫组织化学染色的方法检测75例原发组织及其中配对的31例肺转移组织中MIP4的表达。分析原发灶MIP4的表达与肺转移的相关性。结果1、crnde在骨肉瘤组织中的表达水平明显高于正常组织。crnde高表达患者三年总生存率低于crnde低表达患者（74.1%vs 33.3%）,骨肉瘤患者肿瘤组织中crnde的表达水平与患者的临床分期和发生肺转移均有显著相关性（P＜0.05）,而与肿瘤大小、病理类型、坏死率、局部复发情况无显著相关性（P＞0.05）。2、荧光素酶实验、QRT-PCR、Western blot验证了crnde作为ce RNA与mi R-136-5p结合,靶向调控MRP9的表达。3、crnde可促进骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。过表达mi R-136-5p可抑制crnde的促增殖、迁移和侵袭的能力。4、骨肉瘤裸鼠模型进一步证实了crnde可促进骨肉瘤细胞的增殖。5、卡博替尼可以一定程度上抑制crnde促进骨肉瘤细胞增殖和迁移的能力。6、MIP4在骨肉瘤患者原发组织中的表达量与肺转移组织中的表达量具有明确相关性（r=0.527,p＜0.05）。骨肉瘤原发组织中MIP4的表达与临床分期、远处转移相关（p＜0.05）,与性别、年龄、病理类型、肿瘤大小和肿瘤坏死率无明显相关性（p＞0.05）。MIP4的表达量是骨肉瘤肺转移预后的独立危险因素（OR值为1.307,P＜0.05）。MIP4高表达患者的三年总体生存率低于低表达患者。（P＜0.05）结论1、crnde的表达与骨肉瘤患者的临床分期、肺转移具有相关性,可作为不良预后的标志。2、crnde通过调控mi R-136-5p/MRP9轴来促进骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。3、卡博替尼可以抑制crnde促骨肉瘤细胞增殖和迁移的能力。4、MIP4与骨肉瘤的肺转移和进展相关,极有可能是判断骨肉瘤肺转移及预后的重要指标。

关键词：骨肉瘤 crnde MRP9 卡博替尼 MIP4

crnde调节乳腺癌细胞增殖及转移的作用机制研究

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CRNDE调节乳腺癌细胞增殖及转移的作用机制研究

作者：赵瑞天津医科大学

学位级别：硕士

目的近年来,随着生活节奏的加快,乳腺癌在全球女性中的发病率逐年升高,已成为对全球女性威胁最大的恶性肿瘤,据统计,每百名患有癌症的中国女性中,乳腺癌患者可达32名。虽然如今的技术手段能够让乳腺癌早发现,早治疗,但乳腺癌的致死率居... 详细信息

目的近年来,随着生活节奏的加快,乳腺癌在全球女性中的发病率逐年升高,已成为对全球女性威胁最大的恶性肿瘤,据统计,每百名患有癌症的中国女性中,乳腺癌患者可达32名。虽然如今的技术手段能够让乳腺癌早发现,早治疗,但乳腺癌的致死率居高不下,造成这种结果的主要原因就是癌细胞的增殖转移。当乳腺癌发生转移时,手术的疗效通常不如人意。因此,找出乳腺癌细胞增殖和转移的发生机制是治疗乳腺癌的关键。已有研究表明,长链非编码RNA(lnc RNA)参与并调节肿瘤的增殖和转移机制,是研究肿瘤增殖和转移机制一个新的切入点。而结直肠癌差异表达基因(Colorectal Neoplasia Differentially Expressed,crnde)是2011年在结直肠癌中发现的一种新lnc RNA,对癌细胞增殖和转移入侵起到重要的调节作用,而我们通过预实验发现,与低转移乳腺癌细胞MCF-7相比,crnde在高转移细胞MDA-MB-231中表达水平明显下调,表明crnde与乳腺癌细胞的增殖、转移可能有关,但具体的作用机制尚不清楚。所以本研究旨在探讨lnc RNA crnde是否参与调节乳腺癌细胞的转移,增殖及其作用机制。方法1.体外培养人类高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231和人类低转移乳腺癌细胞MCF-7。根据转染质粒的不同分为对照组:Si RNA-control和实验组:Si RNA-crnde(Si RNA-420,Si RNA-566,Si RNA-718,Si RNA-783)。将MCF-7和MDA-MB-231细胞转染入Si RNA-crnde和Si RNA-control质粒,24 h后,用显微镜观察转染后细胞中的GFP荧光,选出转染效率最佳的质粒作为实验研究对象。2.将MCF-7和MDA-MB-231细胞转染入Si RNA-crnde和Si RNA-control质粒48 h后,提取细胞中的总RNA,用实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(q RT-PCR)和逆转录PCR检测乳腺癌细胞中上皮细胞-间充质转化(EMT)相关基因:间充质性细胞标志物波形蛋白(Vimentin),上皮细胞标志物钙粘蛋白(E-cadherin),转录因子(Snail)在m RNA水平上的变化。增殖相关基因:细胞周期蛋白依赖激酶(CDK2,CDK4),细胞周期蛋白(Cyclin D,Cyclin E),细胞周期相关转录因子(E2F-1),细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(P21),在m RNA水平上的变化。3.将MCF-7和MDA-MB-231细胞转染入Si RNA-crnde和Si RNA-control质粒48 h后,提取两种乳腺癌细胞中的细胞总蛋白。用蛋白免疫印记(Western blot)检测两种乳腺癌细胞中EMT相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达情况,细胞周期相关转录因子E2F-1的表达情况,以及Rb磷酸化情况。4.,将两种乳腺癌细胞转染入Si RNA-crnde和Si RNA-control质粒24 h后,进行伤口愈合实验和Transwell实验,通过与对照组比较,检测转染入敲降组质粒后迁移距离及发生侵润的细胞数量,分析乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的迁移能力和侵润能力是否发生改变。5.利用流式细胞术(FCM)检测转染后对照组和实验组细胞周期中G1/G0期的百分比变化,以及细胞克隆形成实验中的克隆形成率,分析crnde表达水平是否与乳腺癌细胞的增殖能力有关。结果1.与人类低转移乳腺癌细胞MCF-7细胞相比,crnde在人类高转移乳腺癌细胞中的表达量明显下调。2.细胞转染的荧光显微镜和q RT-PCR结果发现,在MCF-7中,Si RNA-420有最佳的转染效率(70%-80%)和敲降能力;在MDA-MB-231中,Si RNA-718有最佳的转染效率(70%-80%)和敲降能力,因此我们将这两种质粒分别作为两种乳腺癌细胞的实验质粒。3.在乳腺癌细胞中转染入Si RNA-crnde和Si RNA-control质粒后,进行伤口愈合实验发现,与对照组相比,MCF-7和MBA-MD-231细胞的迁移能力均明显增加。4.将MCF-7细胞转染入Si RNA-crnde和Si RNA-control质粒后,进行transwell实验检测,检测结果发现,与对照组相比,MCF-7细胞的侵袭能力增强。5.将MCF-7和MDA-MB-231两种细胞转染入Si RNA-crnde和Si RNA-control后,用q RT-PCR检测细胞中EMT相关基因E-cadherin,Vimentin和Snail在m RNA水平上发生的变化。实验结果发现,与MCF-7对照组相比,crnde敲降后,MCF-7细胞中的E-cadherin在m RNA水平的表达量显著

关键词： lncRNA crnde 乳腺癌细胞迁移细胞周期

长链非编码RNA crnde在癌症中的表达模式和急性早幼粒细胞白血病中的功能研究

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长链非编码RNA CRNDE在癌症中的表达模式和急性早幼粒细胞白血病...

作者：马雪菲上海交通大学

学位级别：硕士

长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)是参与基因表达调控的新型分子,其表达异常是导致癌症发生的重要因素。crnde(Colorectal Neoplasia Differentially Expressed)是具有 12 种选择性剪接体的长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA),目前的研究提示其异常表达可能与癌症的发病机制有关。然而,crnde的表达失调是否在癌症中常见,以及在癌症中的功能仍不清楚。在本研究中,我们首先分析了正常人类样本中crnde的表达情况,发现crnde的表达具有组织和细胞特异性。进一步比较了来自15种实体瘤和造血系统肿瘤的2,938例病人样本表达谱数据,表明crnde在11种癌症类型中显著高表达,其中包括3种已报道的和8种未报道的癌症,并提示在crnde不同转录本在肿瘤中表达有差异。特定抗癌药物作用癌症细胞系和病人样本,可有效纠正crnde特异性转录本的异常表达。进一步,通过qRT-PCR实验验证了 12种crnde可变剪接体在肿瘤细胞系中的表达情况,发现crnde-g剪接体在所检测的多种癌细胞中是表达最高的。以上结果说明高表达的crnde及其特异性的可变剪接体在癌症中发挥着潜在的癌基因特性。进一步,我们研究crnde在造血系统肿瘤急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)不同亚型中的表达模式。通过比较表达谱数据,发现crnde在急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)中特异性高表达。同时,我们还发现188个APL特征性的lncRNA,其中125个特异性上调和63个特异性下调。进一步GSEA分析发现特异性上调的lncRNA在全反式维甲酸(all-trans retinoid acid,ATRA)处理后,能够显著富集于ATRA下调的基因集中。qRT-PCR实验证实crnde在APL细胞系NB4细胞中能够被ATRA抑制且具有时间依赖性。功能研究发现,敲低crnde能够促进NB4细胞的分化,并且增加ATRA诱导的细胞分化。RNA-seq分析表明敲低crnde能够影响一群髓系分化相关基因的表达。综上所述,本研究系统地诠释了高表达的crnde及其特异性的可变剪接体与多种恶性肿瘤发生密切相关,尤其揭示了crnde在APL中抑制造血分化的致病机制,为药物治疗提供靶点。

关键词：长链非编码RNA crnde 可变剪接体急性早幼粒细胞白血病细胞分化

长链非编码RNA crnde抑制非小细胞肺癌增殖的作用研究

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长链非编码RNA CRNDE抑制非小细胞肺癌增殖的作用研究

作者：孙晓青岛大学

学位级别：硕士

目的:肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤,主要分为小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)。肺癌早期罕见阳性症状,因此往往发现就是晚期。尽管目前随着医疗技术的进展,我们在癌症治疗方面取得了较大的进步,但是晚期肺癌患者的总生存率仍然... 详细信息

目的:肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤,主要分为小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)。肺癌早期罕见阳性症状,因此往往发现就是晚期。尽管目前随着医疗技术的进展,我们在癌症治疗方面取得了较大的进步,但是晚期肺癌患者的总生存率仍然非常低。因此,急需了解更多肺癌的发病机制,以制定有效的抗癌战略。长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)是一种在各种细胞内大量客观存在的,长度超过200个碱基,但不具备编码蛋白质功能的线性RNA分子。许多长链非编码RNA已被揭示与肺癌的发生发展密切相关,这对肺癌治疗具有重要意义。有研究证实,lncRNA crnde在多种癌症中发挥调控作用,并影响病人预后。然而迄今为止,crnde与肺癌的关系仍是未知的。本研究主要针对crnde在体内及体外实验中对NSCLC发生发展的影响。方法:第一部分,我们搜集TCGA数据库关于肺癌的数据,并进行了生物信息学分析,研究crnde和肺癌各方面的相关性。然后利用K-Mplot生存分析来研究crnde对肺癌患者预后的影响作用。第二部分,我们收集手术标本肺癌及癌旁组织,并运用qRT-PCR法检测crnde的表达量,结合临床数据以及随访资料进一步分析crnde与肺癌发生发展的联系。第三部分,我们制备了pcDNA-crnde顺转质粒,并转染A549肺癌细胞,通过MTT法及细胞克隆形成实验研究crnde对细胞增殖活性的作用。最后,利用裸鼠皮下成瘤实验验证crnde在体内对肿瘤生长速度的影响。结果:生物信息学分析和qRT-PCR表明,crnde在晚期患者中的表达率较高(pcrnde的高表达导致更好的预后(Pcrnde的表达与Ki67阳性率和肿瘤大小之间呈负相关(Pcrnde与肺癌肿瘤生长有关。然而crnde水平与淋巴结转移(P>0.05)无显著相关性。crnde过度表达在体内和体外都显著抑制细胞增殖和肿瘤生长(Pcrnde是早期肺癌预后良好的有效指标,上调的crnde通过抑制肺癌细胞增殖从而提高患者预后。由此可见,crnde具有应用于临床肺癌靶向治疗的潜在价值。

关键词： lncRNA crnde 肺癌预后

敲减长链非编码RNA crnde促进miR-136表达并抑制胶质瘤U251细胞的迁移与侵袭

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敲减长链非编码RNA CRNDE促进miR-136表达并抑制胶质瘤U251细胞的...

作者：周洲江苏大学

学位级别：硕士

目的恶性神经胶质瘤是中枢神经系统(CNS)最常见和最致命的原发性恶性脑肿瘤,其特点是浸润性生长和早期转移。研究表明,恶性肿瘤的转移及侵袭过程受到长链非编码RNA和微小RNA的调控。本研究拟以胶质瘤细胞株U251为研究对象,探讨长链非编... 详细信息

目的恶性神经胶质瘤是中枢神经系统(CNS)最常见和最致命的原发性恶性脑肿瘤,其特点是浸润性生长和早期转移。研究表明,恶性肿瘤的转移及侵袭过程受到长链非编码RNA和微小RNA的调控。本研究拟以胶质瘤细胞株U251为研究对象,探讨长链非编码RNA crnde与微小RNA miR-136在胶质瘤细胞U251中的调控关系及对胶质瘤细胞U251迁移、侵袭能力的影响,旨在为胶质瘤的临床诊断与治疗寻找新的思路。方法运用生物信息学的方法,分析TCGA数据库中的人胶质母细胞瘤与癌旁组织中差异表达的lncRNA并绘制热图,预测crnde和miR-136的潜在结合位点。使用小干扰RNA对胶质瘤细胞U251中的crnde进行特异性敲减,并通过qRT-PCR检测敲减效果及敲减后miR-136的表达量。实验分为:阴性对照组(NC)、小干扰RNA组(si-crnde)、miR-136抑制剂组(miR-136 inhibitor)及共转染小干扰RNA与miR-136抑制剂组(si-crnde+miR-136 inhibitor),划痕实验、Transwell实验检测四组细胞迁移、侵袭能力,western blot检测四组细胞上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白的表达水平。结果(1)分析TCGA-GBM数据集,共得到1013个在胶质母细胞瘤组织和癌旁组织中差异表达的lncRNA,其中crnde在胶质母细胞瘤癌组织中相对于癌旁组织呈现高表达。starBase v2.0数据库分析显示crnde和miR-136-5P存在潜在结合位点。(2)转染小干扰RNA后胶质瘤U251细胞中crnde的表达量明显低于NC组,表明敲减成功,同时miR-136的表达量明显高于NC组。(3)划痕实验及Transwell实验结果显示,与NC组比较,si-crnde组划痕愈合面积较小,侵袭细胞数明显减少,而si-crnde+miR-136 inhibitor组划痕愈合面积、侵袭细胞数无显著差异;与si-crnde组相比,共si-crnde+miR-136 inhibitor组细胞划痕愈合面积显著增大,侵袭细胞数显著增多,挽救了敲减crnde后对细胞迁移、侵袭能力的影响。(4)Western blot结果表明,与NC组相比,si-crnde组N-cadherin和vimentin表达水平降低,E-cadherin表达水平增高,而si-crnde+miR-136inhibitor组E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平无明显差异;与sicrnde组相比,si-crnde+miR-136 inhibitor组N-cadherin和vimentin表达水平增高,E-cadherin表达水平降低,挽救了敲减crnde后对EMT相关蛋白表达的影响。结论***在胶质母细胞瘤组织中相对于癌旁组织呈现高表达,crnde和miR-136存在潜在的结合位点。2.敲减crnde能通过促进miR-136的表达而降低胶质瘤U251细胞的迁移、侵袭能力,并影响EMT相关蛋白表达,且这些效应可被miR-136抑制剂逆转。

关键词：长链非编码RNA crnde miR-136 胶质瘤迁移侵袭

长链非编码RNA crnde在胰腺癌发生发展中的作用及机制研究

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长链非编码RNA CRNDE在胰腺癌发生发展中的作用及机制研究

作者：杨鹏西南医科大学

学位级别：硕士

背景:近年来,大量研究发现不同长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lnc RNAs)在多种恶性肿瘤中存在特异性异常表达的现象,并且在肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭、转移等过程中可能起到重要的作用。我们前期研究利用lnc RNA基因芯片筛选出... 详细信息

背景:近年来,大量研究发现不同长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lnc RNAs)在多种恶性肿瘤中存在特异性异常表达的现象,并且在肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭、转移等过程中可能起到重要的作用。我们前期研究利用lnc RNA基因芯片筛选出在胰腺癌组织及癌旁正常胰腺组织中差异表达的长链非编码RNA分子crnde(colorectal neoplasia differentially expressed),但其在胰腺癌发生发展中的作用及机制仍尚不明确。目的:本研究旨在研究crnde对胰腺癌细胞增殖、凋亡与侵袭力的影响;探讨crnde介导Hippo-YAP通路在胰腺癌细胞恶性转化中的分子作用机制。方法:1.采用RT-PCR检测crnde在20对胰腺癌组织及癌旁正常胰腺组织中及3种胰腺癌细胞株(As PC-1、PANC-1和Bx PC-3)中的表达情况;运用流式细胞及Transwell实验探讨下调crnde表达对胰腺癌细胞增殖、凋亡及侵袭力的影响。2.利用免疫组化检测胰腺癌组织中Hippo-YAP通路中的关键因子LAST1(large tumor suppressor gene 1)和YAP1(yes-associated protein)蛋白表达水平,并分析与crnde表达的关系;利用Western blot研究下调crnde表达对胰腺癌细胞LAST1和YAP1表达的影响,以验证crnde通过介导Hippo-YAP通路促进胰腺癌的发生发展的重要作用机制。结果:1.本研究通过RT-PCR检测20对手术切除的胰腺癌组织和癌旁正常胰腺组织中crnde的表达水平,结果证实crnde在胰腺癌组织中的表达水平显著高于癌旁正常胰腺组织(Pcrnde的表达水平也有不同程度的升高。我们以表达水平最高的As PC-1细胞为研究对象,通过特异性si RNA干扰技术下调As PC-1细胞中crnde的表达水平,经流式细胞检测发现,下调crnde表达后As PC-1细胞的G1期细胞比例明显下降,G2/M期细胞比例明显增加(Pcrnde表达后胰腺癌细胞侵袭能力受到明显抑制(Pcrnde与LAST1和YAP1呈明显线性关系,其中crnde与LAST1呈负相关,crnde与YAP1呈正相关。Western blot检测提示下调胰腺癌As PC-1细胞crnde表达后,LATS1蛋白表达水平明显上调,而YAP1蛋白表达水平则下降。结论:1.研究结果发现在胰腺癌中存在crnde高表达的现象,crnde异常表达促进癌细胞的恶性生长、抑制癌细胞凋亡并且增强了癌细胞的侵袭力,初步证实crnde在胰腺癌发生发展中扮演促癌基因的角色。2.通过下调胰腺癌细胞中crnde表达水平,LATS1蛋白表达水平明显上调,YAP1蛋白表达水平下降,结果显示crnde可能介导Hippo-YAP信号通路在胰腺癌的发生发展中发挥重要作用。

关键词：长链非编码RNA crnde 胰腺癌 Hippo-YAP通路