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仙茅苷对局灶性脑缺血/再灌注大鼠轴突再生及Akt/GSK-3β/crmp-2表达的影响

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神经解剖学杂志 2018年第1期34卷 48-52页

作者：傅增辉姜岩刘晶杜姝张广萍陈团团郭鹏齐齐哈尔医学院附属第三医院神经内科齐齐哈尔161000 延安市人民医院骨科延安716000

目的:研究仙茅苷对局灶性脑缺血/再灌注大鼠轴突再生的作用并探讨其机制。方法:健康成年雄性SD大鼠36只,随机分为假手术组、模型对照组、仙茅苷给药组,用线栓法建立局灶性脑缺血/再灌注大鼠模型(MCAO),大鼠神经功能损伤采用Zea-Longa标... 详细信息

目的:研究仙茅苷对局灶性脑缺血/再灌注大鼠轴突再生的作用并探讨其机制。方法:健康成年雄性SD大鼠36只,随机分为假手术组、模型对照组、仙茅苷给药组,用线栓法建立局灶性脑缺血/再灌注大鼠模型(MCAO),大鼠神经功能损伤采用Zea-Longa标准评价,Western Blot法检测大鼠缺血侧脑组织p-Akt、Akt、p-GSK-3β、GSK-3β、p-crmp-2、crmp-2蛋白的表达,免疫荧光染色法检测大鼠缺血侧脑组织NF200蛋白的表达。结果:与MCAO组比较,仙茅苷能明显改善大鼠的神经功能损伤,促进NF200、p-Akt、p-GSK-3β蛋白的表达,抑制p-crmp-2蛋白表达。结论:仙茅苷能改善局灶性脑缺血/再灌注大鼠的神经功能缺损,可能通过促进Akt、GSK-3β的磷酸化,抑制crmp-2的磷酸化,进一步促进轴突再生。

关键词：仙茅苷局灶性脑缺血再灌注 Akt GSK-313 crmp-2 大鼠

颞叶癫痫大鼠海马区crmp-2蛋白的时空表达变化及其磷酸化调节

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颞叶癫痫大鼠海马区CRMP-2蛋白的时空表达变化及其磷酸化调节

作者：张文霞吉林大学

学位级别：硕士

癫痫是神经系统常见的慢性疾病之一,约1/4为药物难治性癫痫,其中70%为颞叶癫痫。我们前期研究发现通过制备大鼠颞叶癫痫(Temporal lobe epilepsy,TLE)模型,发现海马神经元损伤,运用蛋白质组学技术将TLE大鼠海马组织与正常对照组及手术... 详细信息

癫痫是神经系统常见的慢性疾病之一,约1/4为药物难治性癫痫,其中70%为颞叶癫痫。我们前期研究发现通过制备大鼠颞叶癫痫(Temporal lobe epilepsy,TLE)模型,发现海马神经元损伤,运用蛋白质组学技术将TLE大鼠海马组织与正常对照组及手术组进行比较,鉴定出一系列差异表达蛋白质,其中脑衰反应调节蛋白(Collapsion response mediator protein,crmp-2)为下调最显著的蛋白质,提示其与TLE的发病密切相关。crmp-2是crmp家族5中亚型之一,主要表达于成人大脑的高度可塑性区域,如海马、嗅球和小脑。crmp-2有促进轴突生长的作用,而磷酸化的crmp-2失去促进轴突生长的作用。颞叶癫痫海马神经元损伤或抗损伤的过程中可能是通过crmp-2及其磷酸化调控实现的。目的:观察crmp-2在海人酸(KA)点燃癫痫大鼠模型中的海马的时空表达变化及其磷酸化调节,并探讨crmp-2在颞叶癫痫海马神经元损伤或抗损伤过程中是通过其磷酸化作用调节实现的。方法:选取雄性Wistar大鼠64只,体重250-300g,采用海马杏仁核注射海人酸制备大鼠癫痫模型,将大鼠分为正常对照组(CONT)、假手术组(SHAM)、海人酸致痫组。通过Western Blot、免疫组织化学染色,检测致痫后不同时间点(3h、6h、24h、3d、7d、14d)癫痫大鼠海马crmp-2及其磷酸化后的表达变化,并通过HE染色方法观察其病理变化结果:(1)HE染色观察致痫后海马的病理变化,CONT组和SHAM组的大鼠可见海马区锥体细胞及齿状回颗粒细胞形态正常,排列整齐,结构完整。与KA组相比,海马CA3区神经元细胞损伤最严重。KA致痫大鼠病理改变早期(3h)以神经元变性为主,可见细胞间质水肿。随后(6h)主要病理学改变是神经元坏死。随着病程进展,(24h、3d)海马神经元细胞发生明显的丢失或死亡,海马CA3区大片状坏死,多数细胞完全脱落消失,部分细胞收缩,核固缩、破碎、溶解,核仁消失,可见胶质细胞增生和毛细血管增多改变。最后(7d、14d)病情进一步加重,可见明显的神经元脱失,残存的神经元排列紊乱,细胞层基本消失,区域界限模糊,不同程度的胶质细胞增生。(2)Western Blot法检测KA致痫后大鼠的海马crmp-2表达在3h、6h、24h、3d、7d、14d时间的变化是先升高后逐渐降低的,KA致痫后3h大鼠的海马crmp-2的表达量迅速增多达高峰,但第14d略高于第7d。KA致痫后3h、6h、3d、7d、14d的crmp-2的表达量与SHAM组相比较,有显著性差异(Pcrmp-2表达在3h、6h、24h、3d、7d、14d时间的变化是先降低后逐渐升高的,海人酸致痫后大鼠海马p crmp-2表达水平3h开始下降,6h达最低,随后逐渐升高。KA致痫后各时间点的p crmp-2的表达量与SHAM组相比较,均有显著性差异(Pcrmp-2及p crmp-2的表达,KA致痫后大鼠的海马crmp-2表达在3h、6h、24h、3d、7d时间的变化为先升高后降低的趋势,但第14d较第7d是升高的。KA致痫后各时间点的crmp-2的表达量与SHAM组相比较,有显著性差异(Pcrmp-2表达的变化为降低的趋势,7d、14d略微升高。KA致痫后各时间点的p crmp-2的表达量与SHAM组相比较,均有显著性差异(Pcrmp-2及其p crmp-2的表达在各时间点未见明显变化趋势。结论:(1)在癫痫组大鼠海马神经元损伤以CA3区为主,CA1、DG区细胞形态完整,排列整齐。因此,CA3区最容易出现神经元过度兴奋而致神经元死亡。(2)海人酸致痫后crmp-2在大鼠海马组织表达变化为先升高后逐渐降低的趋势,而p crmp-2(Thr514)是先降低后升高的趋势。(3)海人酸致痫后大鼠海马crmp-2及其磷酸化蛋白表达水平存在时空表达差异,crmp-2及其磷酸化可能参与了癫痫后神经元轴突生长的调节,在癫痫过程中可能与神经元损伤密切相关。

关键词：颞叶癫痫海人酸 crmp-2 p crmp-2

拉科酰胺与颞叶癫痫大鼠海马区crmp-2及其磷酸化蛋白表达的相关性研究

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拉科酰胺与颞叶癫痫大鼠海马区CRMP-2及其磷酸化蛋白表达的相关性...

作者：余洋吉林大学

学位级别：硕士

目的:探讨拉科酰胺与颞叶癫痫大鼠海马区crmp-2及其磷酸化蛋白表达的相关性,从而明确拉科酰胺是否可以通过调节其表达发挥抗癫痫形成作用。方法:将大鼠随机分成三组:(1)假手术对照组(Control组),n=8;(2)癫痫组(SE组),n=20;(3)癫痫+拉科... 详细信息

目的:探讨拉科酰胺与颞叶癫痫大鼠海马区crmp-2及其磷酸化蛋白表达的相关性,从而明确拉科酰胺是否可以通过调节其表达发挥抗癫痫形成作用。方法:将大鼠随机分成三组:(1)假手术对照组(Control组),n=8;(2)癫痫组(SE组),n=20;(3)癫痫+拉科酰胺治疗组(SE+LCM组),n=20。SE组和SE+LCM组再按时间点分为3d(n=4)、7d(n=8)、14d(n=4)、28d(n=4)。分别于3d、7d、14d、28d 4个时间点将大鼠断头取海马,然后用Western Blot技术检测各组大鼠crmp-2及其磷酸化蛋白表达水平。另外,通过制作石蜡切片、HE染色观察7d大鼠药物干预前后海马区病理损伤情况。结果:(1)SE+LCM组慢性期自发性发作大鼠数量较SE组少。(2)HE染色光镜下见SE组和SE+LCM组大鼠CA1区锥体细胞及DG区颗粒细胞形态正常,排列整齐,结构完整,与Control组大鼠比较无明显损伤。然而,CA3区锥体细胞可见明显损伤。其中SE组大鼠CA3区在由腹外方向转向腹内侧,且继续延伸插入齿状回部分神经元脱落、消失严重,仅遗留细胞碎片及散在的正常细胞;SE+LCM组大鼠CA3区仅在由腹外方向转向腹内侧部分见到神经元明显脱落、消失,其余部分神经元则相对保留完整。(3)SE组大鼠海马区crmp-2蛋白表达在3d、7d、14d、28d 4个时间点呈现先升高后降低的趋势,而其磷酸化p Thr514蛋白则呈现先降低后升高的趋势。(4)拉科酰胺干预后颞叶癫痫大鼠海马区crmp-2蛋白表达在急性期(3d、7d)、静止期(14d)和慢性期(28d)均较非药物干预组低,crmp-2磷酸化p Thr514蛋白表达均较非药物干预组高,且结果有统计学意义(P2)SE组大鼠海马区crmp-2蛋白表达在3d、7d、14d、28d 4个时间点呈现先升高后降低的趋势,而其磷酸化p Thr514蛋白则呈现先降低后升高的趋势。(3)拉科酰胺可通过抑制crmp-2蛋白表达并促进其磷酸化来抑制神经突起的生长,进而发挥抗癫痫形成作用。

关键词：颞叶癫痫 crmp-2 拉科酰胺

骨髓间充质干细胞对大鼠皮层神经元缺氧缺糖损伤后轴突生长及AKT/GSK-3β/crmp-2表达的影响

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骨髓间充质干细胞对大鼠皮层神经元缺氧缺糖损伤后轴突生长及AKT/...

作者：刘勇福建医科大学

学位级别：硕士

目的：本研究旨在通过建立不同细胞间非接触共培养模型，来观察骨髓间充质干细胞（Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells，BMSCs）对大鼠皮层神经元缺氧缺糖（Oxygen-glucose deprivation，OGD）损伤后轴突的生长及信号通道蛋白A... 详细信息

目的：本研究旨在通过建立不同细胞间非接触共培养模型，来观察骨髓间充质干细胞（Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells，BMSCs）对大鼠皮层神经元缺氧缺糖（Oxygen-glucose deprivation，OGD）损伤后轴突的生长及信号通道蛋白AKT/GSK-3β/crmp-2表达的影响，以探讨BMSCs对神经元损伤后轴突生长的影响及机制，为干细胞移植治疗缺血性脑血管病提供理论依据。方法：1、BMSCs和大鼠皮层神经元的体外分离培养及鉴定。 2、取培养第5d的神经元进行氧糖剥夺培养90min，建立OGD损伤模型;12小时后分别通过光镜和电子显微镜观察神经元OGD损伤情况。 3、通过transwell载体建立OGD损伤后的神经元与第3代BMSCs的非接触共培养模型，实验随机分为四组：正常对照组（Control组）、OGD模型组（OGD组）、共培养组（OGD+BMSCs组）、药物干预组（OGD+BMSCs+LY294002组）。 4、各组培养48小时后进行免疫荧光染色后，ZEISS LSM710激光共聚焦显微镜拍照， ZEN2009软件分析测量各组轴突的长度。 5、各组培养24小时后通过western blot检测AKT、pAKT、GSK-3β、pGSK-3β、crmp-2、pcrmp-2、GAP-43蛋白的表达量。 6、统计学处理。结果：1、OGD培养后的神经元轴突受损缩短、部分缺失,线粒体、内质网等亚细胞器肿胀、部分溶解。 2、轴突平均长度测量结果显示：OGD组轴突平均长度较正常组明显缩短（P＜0.01）;OGD+BMSCs组的平均轴突长度较OGD组及OGD+BMSCs+LY294002组延长（P＜0.05）。 3、western blot结果显示：OGD+BMSCs组的pAKT、pGSK-3β、GAP-43表达水平较OGD组及OGD+BMSCs+LY294002组增高（P＜0.05），而pcrmp-2表达水平降低（P＜0.05），差异有统计学意义。结论：BMSCs可促进缺氧缺糖损伤后的神经元轴突的修复、生长，其机制可能通过自身分泌功能来激活AKT/GSK-3β/crmp-2信号通道起作用。

关键词：间充质干细胞神经元轴突生长 OGD crmp-2

苯丙胺对PC12细胞AKT/GSK-3β/crmp-2信号通路的影响

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苯丙胺对PC12细胞AKT/GSK-3β/CRMP-2信号通路的影响

作者：郭磊暨南大学

学位级别：硕士

目的：探讨苯丙胺对PC12细胞的神经毒性作用和机制。方法：将PC12细胞分为四组：空白对照组,苯丙胺组(2mM),苯丙胺加NGF(神经生长因子)组,苯丙胺加SB216763组。各组培养24h后,采用倒置显微光镜,免疫荧光技术及免疫印迹法观察苯丙胺对PC1... 详细信息

目的：探讨苯丙胺对PC12细胞的神经毒性作用和机制。方法：将PC12细胞分为四组：空白对照组,苯丙胺组(2mM),苯丙胺加NGF(神经生长因子)组,苯丙胺加SB216763组。各组培养24h后,采用倒置显微光镜,免疫荧光技术及免疫印迹法观察苯丙胺对PC12细胞的神经毒性作用以及对AKT/GSK-3β/crmp-2信号通路的影响,并且观察该信号通路上游激活剂NGF和下游GSK-3β的抑制剂SB216763能否减轻苯丙胺对PC12细胞的神经毒性作用。结果：1.倒置显微光镜形态学结果：空白对照组PC12细胞膜光滑,边界清晰,胞体饱满,透光,多呈椭圆形或梭形,有两条或以上的细长突起,许多细胞的突起交织在一起形成网;苯丙胺组与空白对照组相比,细胞体萎缩,呈圆形,突起变短、消失(P216763组与苯丙胺组相比,突起长度增长(P0.05)。多巴胺免疫荧光技术观察PC12细胞,各组间细胞长度的变化与上述的基本一致,各组细胞胞体及突起内都有多巴胺激发的荧光,其中空白对照组细胞及突起内多巴胺荧光强度比其他各组的更强,苯丙胺组与其他各组相比,多巴胺细胞的数量有所减少。2.苯丙胺、NGF及SB216763对AKT/GSK-3β/crmp-2信号传导通路中蛋白表达的影响：1)TrkA和P-TrkA:苯丙胺组与空白对照组比较,TrkA和P-TrkA的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。苯丙胺加NGF组和苯丙胺加SB216763组P-TrkA的表达与苯丙胺组相比均增多,差异有显著性(P0.05)。2)AKT和P-AKT:苯丙胺组与空白对照组相比,苯丙胺组P-AKT的表达减少,差异有显著性(P216763组与苯丙胺组相比,P-AKT的表达增加,差异有显著性(P0.05)。3)GSK-3β和P-GSK-3β:苯丙胺组与空白对照组相比,苯丙胺组P-GSK-3β表达减少,差异有显著性(P0.05)。苯丙胺加SB216763组和苯丙胺组相比,苯丙胺加SB216763组P-GSK-3β的表达差异无显著性(P>0.05),苯丙胺加SB216763组GSK-3β表达减少,差异有显著性(Pcrmp-2和)P-crmp-2:苯丙胺组与空白对照组相比,苯丙胺组P-crmp-2的表达增多,差异有显著性(P216763组与苯丙胺组相比,P-crmp-2的表达均减少,差异有显著性(Pcrmp-2在各组间的表达差异无统计学差异(P>0.05)。结论：苯丙胺可以抑制PC12细胞突起的生长,其机制可能与抑制AKT/GSK-3β/crmp-2信号通路有密切关系。2mM浓度的苯丙胺对PC12细胞数量无明显影响。AKT/GSK-3β/crmp-2信号通路的上游激活剂NGF可以减轻苯丙胺对PC12细胞的神经毒性作用,且其下游GSK-3β的抑制剂SB216763也具有减轻苯丙胺对PC12细胞的神经毒性作用,这可能与激活AKT/GSK-3β/crmp-2信号通路的分子有关。

关键词：苯丙胺 PC12 AKT GSK-3β crmp-2

GSK-3α/β-mediated phosphorylation of crmp-2 regulates activity-dependent dendritic growth

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GSK-3α/β-mediated phosphorylation of CRMP-2 regulates acti...

姜黄素对Aβ诱导的AD大鼠海马crmp-2表达的影响

中国神经科学学会第十届全国学术会议

作者： Minghui Tan Shanshan Ma Qiaoying Huang Kunhua Hu Bin Song Mingtao Li Department of Pharmacology and the Proteomics Center Zhongshan School of MedicineSun Yat-sen University

Neuronal activity shapes the dendritic arbour;however,most of the molecular players in this process remain to be identified.We observed that depolarisation-induced neuronal activity causes an increase in the phosphorylation of GSK-3α/β on Ser21/9 in cerebellar granule neurons(CGNs).By using several approaches,including gene knock-down and GSK-3α/β double knockin mice,we demonstrated that both GSK-3β and GSK-3α mediate activity-dependent dendritic growth and that Ser21/9 phosphorylation of GSK-3α/β plays an important role in this process.Collapsin response mediator protein-2(crmp-2),which is crucial for axon development,is phosphorylated at Thr514 and inactivated by GSK-3.We found crmp-2 was located mainly in the dendrites of CGNs,in contrast to the axonal distribution in hippocampal neurons.Overexpression of crmp-2 promoted and knockdown of crmp-2impaired dendritic growth,suggesting that crmp-2 is necessary and sufficient for activity-dependent dendritic development.Furthermore,silencing crmp-2 completely blocked the dendritic growth-promoting effects of GSK-3knockdown,and expression of Thr514 nonphosphorylated form of crmp-2 counteracted the inhibitory effect of constitutively active GSK-3.This data indicate that crmp-2 functions downstream of GSK-3.Together,these findings identify a novel GSK-3/crmp-2 pathway that connects neuronal activity to dendritic growth.

关键词： neuronal activity depolarisation GSK-3 crmp-2 dendritic growth cerebellar granule neuron

来源： cnki会议评论

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中国实用神经疾病杂志 2012年第23期15卷 1-4页

作者：尹红蕾李金凤乔立艳曾志磊王运良刘亚君解放军第148中心医院神经内科淄博255300 郑州大学第二附属医院神经内科郑州450014

目的探讨姜黄素对Aβ诱导的老年痴呆大鼠认知功能和海马crmp-2的影响。方法将SD大鼠随机分为空白对照组、AD对照组和姜黄素给药组。Aβ1-40微量注射至大鼠右侧海马制作AD大鼠模型。Morris水迷宫试验测定大鼠学习记忆能力。RT-PCR检测海... 详细信息

目的探讨姜黄素对Aβ诱导的老年痴呆大鼠认知功能和海马crmp-2的影响。方法将SD大鼠随机分为空白对照组、AD对照组和姜黄素给药组。Aβ1-40微量注射至大鼠右侧海马制作AD大鼠模型。Morris水迷宫试验测定大鼠学习记忆能力。RT-PCR检测海马内crmp-2mRNA的表达,Western blotting方法检测海马内crmp-2和p-crmp-2蛋白表达,免疫组织化学方法检测海马内轴突蛋白表达。结果姜黄素干预后AD大鼠空间学习记忆能力明显改善(Pcrmp-2表达显著降低(P200阳性纤维排列紊乱,不规则,纤维数目显著减少(Pcrmp-2表达升高,p-crmp-2表达降低,而轴突蛋白表达明显增加(Pcrmp-2的表达并抑制crmp-2的磷酸化从而促进轴突再生有关。

关键词：姜黄素淀粉样β蛋白 crmp-2 轴突再生阿尔茨海默病

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运动疗法对大鼠跟腱愈合机制的研究

运动疗法对大鼠跟腱愈合机制的研究

作者：努尔艾·沙吾塔力新疆医科大学

学位级别：硕士

目的：早期功能锻炼可以促进轴突生长蛋白(crmp-2)在愈合中的跟腱组织中特异表达,提示主动运动对愈合早期跟腱中神经元极化和轴突形成起关键作用。本实验采用SD大鼠跟腱断裂术后运动与制动模型,比较运动对crmp-2的表达,阐明crmp-2与本... 详细信息

目的：早期功能锻炼可以促进轴突生长蛋白(crmp-2)在愈合中的跟腱组织中特异表达,提示主动运动对愈合早期跟腱中神经元极化和轴突形成起关键作用。本实验采用SD大鼠跟腱断裂术后运动与制动模型,比较运动对crmp-2的表达,阐明crmp-2与本病愈合之间的联系,从而进一步对跟腱愈合机制给以精确的阐释,为运动疗法在本病术后的早期应用提供实验依据。方法：建立本病术后运动及制动为特色的SD大鼠动物模型,在术后14天愈合期提取模型跟腱组织,运用组织学、免疫组织化学技术(Immunohistochemistry, IHC)和蛋白免疫印迹(Western blotting),对跟腱愈合过程中跟腱组织学进行分析、并对跟腱组织中目的差异表达蛋白(crmp-2)进行验证和功能分析,阐述运动促进跟腱愈合机制。结果：1.光镜下观测胶原纤维,运动组与制动组无统计学差异(P>0.05);电镜下观测到运动组胶原原纤维的周长更大(P2.免疫组织化学实验证实crmp-2在运动组大鼠跟腱组织稳定存在及高表达(Pcrmp-2表达显著增多(P2.主动运动可以促进跟腱crmp-2蛋白的分泌,crmp-2蛋白参与跟腱的愈合过程。

关键词：跟腱断裂早期功能锻炼 crmp-2 神经再生跟腱愈合

丙泊酚及右美托咪定对体外培养海马神经元的影响及机制研究

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丙泊酚及右美托咪定对体外培养海马神经元的影响及机制研究

作者：张馥镇河北医科大学

学位级别：硕士

第一部分原代乳鼠海马神经元的培养、形态学观察及纯度鉴定目的:1培养新生SD乳鼠海马神经元,掌握大鼠海马神经元的体外培养技术;2观察不同阶段的原代海马神经元的形态学特点;3利用免疫荧光细胞化学方法鉴定神经元纯度。方法:取新生24 h... 详细信息

第一部分原代乳鼠海马神经元的培养、形态学观察及纯度鉴定目的:1培养新生SD乳鼠海马神经元,掌握大鼠海马神经元的体外培养技术;2观察不同阶段的原代海马神经元的形态学特点;3利用免疫荧光细胞化学方法鉴定神经元纯度。方法:取新生24 h内的SD乳鼠,用碘酊和75%乙醇消毒,剪断头,分层剪开皮肤和颅骨,用弯镊取出大脑,置于预冷的DMEM液中,快速剥离出两侧海马组织,在解剖显微镜下去除海马的血管和被膜,把海马移入含有木瓜酶的DMEM中,置于37°C,5%CO2培养箱中消化30 min。用吸管将组织块移入含有10%血清的DMEM液中终止消化2 min。然后把组织块移入含有血清的DMEM液中,用维纳斯剪剪碎,用枪头轻轻吹打三到五次,然后过200目细胞筛。取0.9 ml按台盼蓝拒染法进行活细胞计数,制成1×106/ml密度的细胞悬液,种植于Matrigel基膜包被的24孔培养板中,每孔加500μl,置于37°C,5%CO2的培养箱内培养。6 h后全量换无血清Neurobasal培养基。第48 h时加入终浓度为10μmol/L的阿糖胞苷,以抑制非神经元细胞的过度生长。每2天半量换液,并在显微镜下观察神经元的生长情况。神经元培养6 d后,应用免疫荧光化学技术,用不同的荧光标记分别显示神经元和星形胶质细胞。荧光显微镜下观察,拍照。随机选取3个孔,在高倍视野(10×20倍)下随机选取3个视野,计数神经元、星形胶质细胞及所有细胞核的数目,计算神经元所占的百分比,取均值作为每孔神经元纯度。结果:1体外培养的原代SD乳鼠海马神经元,形态典型,突起连接成网,生长状态良好;2体外培养的原代海马神经元细胞核染色清晰,海马神经元纯度为(94.81±1.90)%,组间差异无统计学意义(P=0.81)。结论:体外培养的原代SD新生乳鼠海马神经元形态典型,纯度在90%以上,能够满足进一步的实验要求。第二部分丙泊酚及右美托咪定对发育期海马神经元突起及突触影响目的:探讨丙泊酚及右美托咪定是否会对原代培养的发育期SD乳鼠海马神经元突起及突触的发育产生影响。方法:取原代培养第6 d的海马神经元,随机分为5组:空白对照组(C组)、丙泊酚溶剂对照组(F组)、丙泊酚组(P组)、右美托咪定组(D组)、丙泊酚加右美托咪定组(PD组)。于培养第6天,P组加入丙泊酚,使其终浓度为100μmol/L;F组加入等体积的丙泊酚溶剂;D组加入生理盐水稀释的右美托咪定,使其终浓度为100 nmol/L,PD组加入右美托咪定和丙泊酚,使其终浓度分别为100 nmol/L和100μmol/L;C组加入等体积的生理盐水。继续培养8h后,为各组神经元全量换液,并用PBS清洗2次,加入培养基继续培养24h,随机选取视野为神经元拍照。所得照片用Motic Med 6.0软件处理,使用其测量长度工具测量视野内轴突和树突的总长度,计数该视野神经元总数,以该视野神经元平均突起总长度作为统计指标。用免疫荧光化学法测定各组神经元突触素的含量,采集突触素荧光图像,用Image-Pro Plus 6.0软件分析各组突触素的平均荧光密度(MOD,mean optical density)。结果:1神经元平均突起总长度:P组及PD组与C组比较,数值有所降低,差异有统计学意义(P2突触素的平均荧光密度值(MOD):P组及PD组与C组比较,数值有所降低,差异有统计学意义(P2右美托咪定减少丙泊酚对原代培养乳鼠海马神经元突起及突触发育的影响。第三部分丙泊酚及右美托咪定对发育期海马神经元影响的可能机制目的:探讨丙泊酚及右美托咪定对发育期海马神经元影响的可能分子机制。方法:取原代培养第6 d的海马神经元,随机分为6组:空白对照组(C组)、丙泊酚溶剂对照组(F组)、丙泊酚组(P组)、右美托咪定组(D组)、丙泊酚加右美托咪定组(PD组)、育亨宾组(Y组)。于培养第5天,P组加入丙泊酚,使其终浓度为100μmol/L;F组加入等体积的丙泊酚溶剂;D组加入生理盐水稀释的右美托咪定,使其终浓度为100 nmol/L,PD组加入右美托咪定和丙泊酚,使其终浓度分别为100 nmol/L和100μmol/L;Y组先加入育亨宾,使其终浓度为2μmol/L,再加入右美托咪定和丙泊酚,终浓度同PD组;C组加入等体积的生理盐水。继续培养8h后,为各组神经元全量换液,并用PBS清洗2次,加入培养基继续培养24h,弃去培养基,用PBS清洗两次,收集每组细胞,利用Western Blot技术分析各组脑源性神经营养因子(BDNF,brain-derived neurotr

关键词：海马神经元原代培养 MAP2 GFAP 纯度鉴定丙泊酚右美托咪定突起突触素 BDNF Trk B crmp-2