检索结果-南通市图书馆

作物学报 2019年第6期45卷 848-855页

作者：陈凯孙国梁宋高原李爱丽谢传晓毛龙耿帅锋中国农业科学院作物科学研究所

crispr/cas9系统是一种广泛应用于细菌、酵母、动物和植物中的基因组定点编辑技术,但该编辑系统的使用范围受PAM(proto-spacer-motif)位点NGG的限制。本研究通过突变Streptococcus pyogenes cas9(Spcas9)编码氨基酸(1135位的天冬氨酸D... 详细信息

crispr/cas9系统是一种广泛应用于细菌、酵母、动物和植物中的基因组定点编辑技术,但该编辑系统的使用范围受PAM(proto-spacer-motif)位点NGG的限制。本研究通过突变Streptococcus pyogenes cas9(Spcas9)编码氨基酸(1135位的天冬氨酸D突变成缬氨酸V,1335位的精氨酸R突变为谷胱氨酸Q,1337位的苏氨酸T突变为精氨酸R,命名该突变子为cas9-vqr)改造其识别PAM为NGA的位点以扩大其使用范围。并使用玉米Ubi启动子启动cas9-vqr基因、优化Spcas9的密码子、加入保守的核定位信号序列、增加单子叶植物中保守的3′UTR序列和使用水稻U6启动子启动gRNA来修饰该编辑系统。结果表明cas9-vqr系统能够识别PAM为NGA的位点,并进行有效的切割。体外酶切活性检测结果表明cas9-vqr的切割效率为5%~70%。水稻转化检测结果表明cas9-vqr的切割效率约为27.5%~70.5%,平均切割效率为46.23%。本研究拓宽了crispr/cas9系统在作物中的使用范围,特别是NGA PAM位点较高的作物。

关键词： crispr/cas9-vqr 定点突变 PAM 基因突变

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