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Visual Detection of Vibrio parahaemolyticus using Combined crispr/cas12a and Recombinase Polymerase Amplification

Biomedical and Environmental Sciences 2022年第6期35卷 518-527页

作者： JIANG Han Ji TAN Rong JIN Min YIN Jing GAO Zhi Xian LI Hai Bei SHI Dan Yang ZHOU Shu Qing CHEN Tian Jiao YANG Dong LI Jun Wen Tianjin Institute of Environmental&Operational Medicine Tianjin 300050China

Objective To establish an ultra-sensitive,ultra-fast,visible detection method for Vibrio parahaemolyticus(VP).Methods We established a new method for detecting the tdh and trh genes of VP using clustered regularly interspaced short palindromic repeats/crispr-associated protein 12a(crispr/cas12a)combined with recombinase polymerase amplification and visual detection(crispr/cas12a-vd).Results crispr/cas12a-vd accurately detected target DNA at concentrations as low as 10^(-18)M(single molecule detection)within 30 min without cross-reactivity against other *** detecting pure cultures of VP,the consistency of results reached 100%compared with real-time *** method accurately analysed pure cultures and spiked shrimp samples at concentrations as low as 10^(2)CFU/*** The novel crispr/cas12a-vd method for detecting VP performed better than traditional detection methods,such as real-time PCR,and has great potential for preventing the spread of pathogens.

关键词： Vibrio parahaemolyticus crispr/cas12a-vd Isothermal amplification Recombinase polymerase amplification Visual detection Cross-reactivity

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