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Acta Genetica Sinica 2005年第9期32卷 898-902页

作者：高永娟曹根涛殷刚王鑫季朝能顾少华倪晓华华东师范大学生命科学院生物化学及分子生物学实验室上海200062 上海新智生物技术有限公司上海200031 复旦大学生命科学院遗传所遗传工程国家重点实验室上海200433

cAMP 反应元件结合蛋白(cAMP response element-binding proteins,creb)是一个哺乳动物转录因子家族,通过cAMP 反应元件(cAMP response element,CRE)介导cAMP和钙离子依赖性基因表达.creb4是creb转录家族的新成员.人肿瘤MTC panel结果显示,creb4在人肺癌LX-1、结肠腺癌CX-1、前列腺癌PC-3、结肠癌G1-112和胰腺癌G1-103中有表达.构建表达creb4-LexA和creb215～395aa-LexA的pLexA融合质粒分别转化含p8opLacZ报告质粒的酵母EGY48菌株,诱导表达后发现creb4蛋白为转录激活因子,N端决定其转录激活活性.亚细胞定位结果显示,全长creb4蛋白定位于细胞质,而缺失C端假定转膜结构域的creb41～275aa蛋白突变体则转移至细胞核内.表达谱结果显示creb4蛋白可能在人多种肿瘤组织的基因表达调控中起作用,其C端假定的转膜结构域与其转录激活功能密切相关.

关键词： creb4 人肿瘤MTC panel 转录激活因子亚细胞定位基因表达调控表达谱分析 response element 结合蛋白

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人creb4转核机制的初步研究

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华东师范大学学报（自然科学版） 2007年第2期 104-110页

作者：刘永强倪晓华周丹王鑫郭伟伟华东师范大学生命科学学院上海200062

cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element-binding proteins,creb)是一个哺乳动物转录因子家族,通过cAMP反应元件(cAMP response element,CRE)调节cAMP和钙离子依赖性基因的表达.creb4是creb转录因子家族的一员.经酵母双杂交筛选人胎脑文库发现creb4215-279aa可能与核转运因子kayopherinα2相互作用,提示karyopherinα2可能参与creb4的跨膜转运过程.亚细胞定位结果显示,creb4全长定位于细胞质,而缺失C端假定转膜结构域的creb41-279aa蛋白则转移至细胞核内.荧光共定位进一步显示,creb4和karyopherinα2共定位于细胞质中,creb41-279aa和karyopherinα2共定位于细胞核中.结果提示C端被切除之后,creb4被karyopherinα2转运到核内发挥转录作用.

关键词： creb4 酵母双杂交荧光共定位 kayopherina2

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人类基因creb4的功能初步研究

人类基因CREB4的功能初步研究

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作者：高永娟华东师范大学

学位级别：硕士

信号转导途径集中在转录水平对细胞进行调控,通过转录激活特异基因的表达对抗环境刺激因子的作用。结合基因调控区的特异转录因子的激活或协同表达调节这些信号途径起始的转录。对这些转录因子的结构和功能的研究为转录激活机制提供了... 详细信息

信号转导途径集中在转录水平对细胞进行调控,通过转录激活特异基因的表达对抗环境刺激因子的作用。结合基因调控区的特异转录因子的激活或协同表达调节这些信号途径起始的转录。对这些转录因子的结构和功能的研究为转录激活机制提供了新的视点。哺乳动物creb/ATF转录因子家族是一个碱性区-亮氨酸拉链(basic-region leucine zipper,bzip)蛋白大家族,参与细胞增殖和分化、胚胎发育、学习记忆和肿瘤发生等多种生理过程。 creb4是creb/ATF转录因子家族的新成员。人肿瘤MTC panel结果显示,creb4在人肺癌LX-1,结肠腺癌CX-1,前列腺癌PC-3,结肠癌G1-112和胰腺癌G1-103中有表达,而在乳腺癌GI-101、卵巢癌组织GI-102和肺癌组织GI-117中未检测到特异性条带。提示creb4在人多种肿瘤组织的基因表达调控中起作用。与正常组织表达谱比较发现,creb4在人正常肺组织和结肠组织中并没有转录物,而在肺癌组织(LX-1)、结肠腺癌组织(CX-1)和结肠癌组织(GI-112)中有明显的表达,提示creb4可能与肺癌、结肠癌和结肠腺癌的分化有关,但结果需进一步的研究证实。亚细胞定位显示,全长creb4蛋白定位于细胞质,而缺失C端假定跨膜结构域的creb4蛋白突变体则转移至细胞核内,说明creb4从细胞质到细胞核的转移需要creb4 C端的剪切,暗示creb4的C端跨膜结构域与其从细胞质到细胞核的转移有关。构建表达creb4-LexA和creb-LexA的pLexA融合质粒分别转化含p8opLacZ报告质粒的酵母EGY48菌株,诱导表达后发现creb4全长蛋白自身具有激活下游报告基因转录的功能,而缺失N端的creb蛋白则不再具有自激活功能。暗示creb4为转录激活因子,N端决定其转录激活活性。经酵母双杂交筛选人胎脑文库发现与creb4相互作用的蛋白核孔复合物相关蛋白TPR和kayopherin α2(KPNA2)。TPR为核孔复合物相关蛋白;KPNA2与细胞质和细胞核之间的物质转运有关,参与受体介导的Karyopherin α2β1途径,协助大分子蛋白从细胞质到细胞核的运输。提示TPR和KPNA2蛋白可能参与creb4的跨膜转运过程。

关键词： creb4 肿瘤MTC panel 亚细胞定位酵母双杂交系统

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人creb4转核机制的初步研究

人CREB4转核机制的初步研究

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作者：刘永强华东师范大学

学位级别：硕士

信号转导途径集中在转录水平对细胞进行调控，通过转录激活特异基因的表达对抗环境刺激因子的作用。可与基因调控区结合的特异转录因子的激活或协同表达能够调节这些信号途径的起始转录。对这些转录因子结构和功能的研究为探讨转录激活... 详细信息

信号转导途径集中在转录水平对细胞进行调控，通过转录激活特异基因的表达对抗环境刺激因子的作用。可与基因调控区结合的特异转录因子的激活或协同表达能够调节这些信号途径的起始转录。对这些转录因子结构和功能的研究为探讨转录激活机制提供了新视点。cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element-binding proteins，creb)是一个哺乳动物转录因子家族，通过cAMP反应元件(cAMP response element，CRE)介导cAMP和钙离子依赖性基因表达，参与细胞增殖和分化、胚胎发育、学习记忆和肿瘤发生等多种生理过程。这些蛋白的不正常表达，会引起组织的不正常发育和异常的细胞凋亡，甚至引起个体死亡。 creb4是人creb家族的一个新成员，人肿瘤MTC panel结果显示，creb4在人肺癌LX-1，结肠腺癌CX-1，前列腺癌PC-3，结肠癌G1-112和胰腺癌G1-103中有表达，而在乳腺癌GI-101、卵巢癌组织GI-102和肺癌组织GI-117中未检测到特异性条带。提示creb4在多种肿瘤组织的基因表达调控中起作用。全长creb4蛋白定位于细胞质，而缺失C端假定跨膜结构域的creb4蛋白突变体则转移至细胞核内，提示creb4的C端跨膜结构域与其从细胞质到细胞核的转移有关。构建表达creb4-LexA和creb-LexA的pLexA融合质粒分别转化含p8opLacZ报告质粒的酵母EGY48菌株，经酵母双杂交筛选人胎脑文库发现与creb4相互作用的蛋白kayopherin α2和核孔复合物相关蛋白TPR。TPR为核孔复合物相关蛋白。karyopherin α2参与受体介导的Karyopherin α2β1途径，协助大分子蛋白从细胞质转运到细胞核，提示karyopherin α2可能参与creb4的跨膜转运过程。将creb4，creb4，karyopherin α2三种蛋白分别构建于真核表达载体pEGFP-C1和pDsRed-N1上共转染AD293细胞，荧光共定位进一步显示，creb4和karyopherin α2共定位于细胞质中，creb4和karyopherin α2共定位于细胞核中。creb4和creb4改变了karyopherin α2在细胞中的定位。结果提示creb4与karyopherin α2结合，切掉C端之后，才转移到核内发挥转录作用。

关键词： creb4 酵母双杂交系统荧光共定位

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