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现代肿瘤医学 2023年第13期31卷 2400-2405页

作者：夏天红袁绍斌曹小萌郭长安汪文杰刘宏斌宁夏医科大学临床医学院宁夏银川750004 联勤保障部队第940医院普通外科甘肃兰州730050 兰州大学附属第二医院急诊科甘肃兰州733000 兰州大学附属第二医院普通外科甘肃兰州733000

目的:探讨cpne7在胃癌组织和细胞中的表达及影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法:基于生物信息学数据库GEPIA从转录水平分析cpne7在胃癌及癌旁正常组织中的表达差异。qRT-PCR法检测cpne7在3种胃癌细胞系(AGS、MKN-45、HGC-27)和... 详细信息

目的:探讨cpne7在胃癌组织和细胞中的表达及影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法:基于生物信息学数据库GEPIA从转录水平分析cpne7在胃癌及癌旁正常组织中的表达差异。qRT-PCR法检测cpne7在3种胃癌细胞系(AGS、MKN-45、HGC-27)和胃黏膜正常上皮细胞(GES-1)中的表达,选择表达量相对较高的AGS细胞作为后续实验细胞。通过慢病毒转染AGS细胞敲减cpne7的表达,根据不同处理分为RNAi-vector组、RNAi-1组、RNAi-2组、RNAi-3组,qRT-PCR、Western blot验证细胞转染效率,选择敲减效率最有效的RNAi-1(实验组)和RNAi-vector(对照组)进行后续实验。采用CCK-8法检测细胞活力,EdU和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力,划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白(Caspase3、Caspase7、Caspase9、Bax、Bcl-2)及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)的表达水平。结果:cpne7在胃癌组织中的表达明显高于正常组织(Pcpne7在胃癌细胞中明显高表达(Pcpne7相对表达量最高(Pcpne7可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭(Pcpne7可上调细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Caspase7、Caspase9、Bax的表达,下调Bcl-2的表达(Pcpne7可增加上皮标志物蛋白(E-cadherin)的表达水平(Pcpne7在胃癌组织和细胞中表达上调,敲减cpne7可通过影响EMT进程抑制胃癌细胞增殖、迁移与侵袭,其可能成为胃癌的潜在分子标志物。

关键词：胃癌 cpne7 细胞增殖侵袭与迁移 EMT

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cpne7在结直肠癌中的表达及其对侵袭转移的影响

CPNE7在结直肠癌中的表达及其对侵袭转移的影响

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作者：寇邦国兰州大学

学位级别：硕士

目的:检测cpne7在人结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)组织、细胞系中的表达水平;分析cpne7表达水平与临床病理资料的相关性及与预后的关系;探索在结直肠癌中,敲减cpne7基因对肿瘤细胞增殖、侵袭转移的影响。方法:1.通过R语言从TCGA数据... 详细信息

目的:检测cpne7在人结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)组织、细胞系中的表达水平;分析cpne7表达水平与临床病理资料的相关性及与预后的关系;探索在结直肠癌中,敲减cpne7基因对肿瘤细胞增殖、侵袭转移的影响。方法:1.通过R语言从TCGA数据库查询并下载结直肠癌患者转录组测序数据及临床数据,分析差异表达基因。分析cpne7在结直肠癌中的表达水平与临床资料的相关性及预后的关系。2.通过免疫组织化学染色(immunohischemistry,IHC)检测兰州大学第二医院2018.6-2019.1期间经病理诊断为结直肠癌的组织(结直肠癌组织60例,正常结直肠粘膜组织30例)中cpne7的表达水平,分析cpne7表达水平与临床资料的相关性及与预后的关系。3.培养结肠上皮细胞系NCM460和结直肠癌细胞系HT-29、RKO、SW620,通过实时荧光定量PCR(quantity Real-time PCR,q RT-PCR)、蛋白印迹法(western blot,WB)检测4种细胞系中cpne7 m RNA和蛋白的表达水平。4.通过慢病毒转染敲减结直肠癌细胞系中cpne7基因表达,q RT-PCR及WB法检测敲减效率,培养cpne7基因低表达的稳转细胞系,通过CCK8、克隆成型、划痕实验及Transwell侵袭迁移实验等探索敲减cpne7基因对结直肠癌细胞增殖、侵袭转移的影响。结果:1.通过对TCGA测序数据分析共发现cpne7(差异倍数=5.3,P=0.000)等2000余个差异表达基因,cpne7在结直肠癌中高表达,其表达水平与N、M、TNM分期、放疗史、残余瘤和淋巴转移相关。通过COX多因素分析发现:cpne7是结直肠癌患者的预后独立危险因素(Pcpne7在结直肠癌中较正常粘膜组织高表达(Pcpne7表达水平与生存状态(Pcpne7表达水平与预后相关。通过COX多因素分析发现:cpne7同样是结肠癌患者预后的独立危险因素(Pcpne7在结肠癌细胞系中较正常结肠上皮细胞系高表达(Pcpne7基因,敲减效率约为60%。敲减cpne7后,RKO细胞的增殖、侵袭和迁移能力较对照组显著降低(Pcpne7在结直肠癌组织、细胞系中高表达,cpne7基因参与结肠癌细胞的增殖、侵袭和转移等恶性生物学行为。cpne7是结肠癌患者预后的独立危险因素。

关键词： cpne7 结直肠癌肿瘤增殖侵袭转移

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cpne7在胃癌中的表达及生物学功能研究

CPNE7在胃癌中的表达及生物学功能研究

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作者：夏天红宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的探究cpne7在胃癌组织和癌旁组织中的表达,分析cpne7表达与胃癌患者临床病理资料之间的相关性。探究cpne7对胃癌细胞恶性生物学功能的影响。方法1.通过生物信息学方法确定cpne7 m RNA在胃癌中的表达水平及其与预后的相关性;2.收集202... 详细信息

目的探究cpne7在胃癌组织和癌旁组织中的表达,分析cpne7表达与胃癌患者临床病理资料之间的相关性。探究cpne7对胃癌细胞恶性生物学功能的影响。方法1.通过生物信息学方法确定cpne7 m RNA在胃癌中的表达水平及其与预后的相关性;2.收集2020年1月至2021年12月在兰州大学第二医院普外科接受胃癌根治术的102例患者的术后病理标本及临床病理资料,通过组织芯片验证cpne7在胃癌和癌旁组织中的表达,分析cpne7的表达水平与患者临床病理资料之间的相关性;3.使用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法检测cpne7 m RNA和蛋白在HGC-27、MKN-45、AGS、SNU-1人胃癌细胞株以及正常人胃粘膜上皮细胞（GES-1）中的表达情况;4.使用慢病毒转染方法构建稳定敲减cpne7的胃癌SNU-1和AGS细胞系,实时荧光定量PCR验证敲减后cpne7 m RNA的表达水平;5.使用CCK8、克隆形成、Ed U实验检测cpne7敲减对胃癌SNU-1、AGS细胞增殖能力的影响;划痕实验和Traswell迁移实验检测cpne7敲减对胃癌SNU-1、AGS细胞迁移能力的影响;Traswell侵袭实验检测cpne7敲减对胃癌SNU-1、AGS细胞侵袭能力的影响;流式细胞分析技术和蛋白质免疫印迹法检测cpne7敲减对胃癌SNU-1、AGS细胞凋亡能力的影响;蛋白质免疫印迹法检测cpne7敲减对上皮间质转化相关分子标记物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的蛋白表达水平;6.蛋白质免疫印迹法检测cpne7敲减对PI3K/AKT/m TOR信号通路相关蛋白的表达水平。结果***、TCGA数据库分析结果显示cpne7 m RNA在胃癌组织中的表达显著高于正常组织;KM-Plotter数据库结果显示高表达cpne7 m RNA的胃癌患者其总生存期（OS）、无进展生存期（PFS）、进展后生存期（PPS）更差。2.免疫组化结果表明cpne7蛋白主要定位于胃癌细胞的细胞膜,cpne7在胃癌组织中的表达高于癌旁组织（Pcpne7蛋白的阳性表达率为85.3%（87/102例）,而在癌旁组织中阳性表达率为35.3%（36/102例）,两者相比差异有统计学意义（χ=53.257,Pcpne7的表达水平与胃癌患者的临床分期（P7）显著相关;Spearman分析结果显示cpne7表达与临床分期（Pcpne7 m RNA和蛋白的表达高于GSE-1细胞（P7细胞和GES-1细胞间cpne7 m RNA和蛋白的表达差异无统计学意义（P>0.05）;4.慢病毒转染效率结果显示,敲减组（Sh-cpne7-511、1115、1059）cpne7的表达水平低于阴性对照组（Sh-NC组）,差异有统计学意义（Pcpne7-511组进行后续功能实验。***-8、克隆形成、Ed U实验检测结果显示Sh-cpne7组SNU-1、AGS细胞增殖能力明显低于Sh-NC组（Pcpne7组的伤口愈合率显著低于Sh-NC组（Pcpne7组细胞迁移和侵袭数目低于Sh-NC组（Pcpne7组细胞凋亡率显著高于Sh-NC组（Pcpne7组促凋亡蛋白Caspase3、Caspase7、Caspase9、Bax的表达水平相较于Sh-NC组明显升高（Pcpne7组E-cadherin蛋白的表达水平升高,而N-cadherin、Vimentin蛋白的表达水平降低（Pcpne7组磷酸化PI3K、磷酸化AKT、磷酸化m TOR蛋白的表达水平显著低于Sh-NC组（P<0.05）,而总PI3K、总AKT、总m TOR蛋白的表达水平无明显变化。结论1.

关键词：胃癌 cpne7 增殖迁移侵袭

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cpne7通过激活MAPK信号通路促进结直肠癌进展

CPNE7通过激活MAPK信号通路促进结直肠癌进展

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作者：于田文中南大学

学位级别：硕士

背景:在全球恶性肿瘤中,结直肠癌(Colorectal cancer、CRC)的发病率排名世界第三,而死亡率排名世界第二。尽管近年来CRC的治疗手段在不断提升,但其5年生存率仍不尽如人意。因此,CRC的发病分子机制有待进一步的研究。MAPK通路是与细胞增... 详细信息

背景:在全球恶性肿瘤中,结直肠癌(Colorectal cancer、CRC)的发病率排名世界第三,而死亡率排名世界第二。尽管近年来CRC的治疗手段在不断提升,但其5年生存率仍不尽如人意。因此,CRC的发病分子机制有待进一步的研究。MAPK通路是与细胞增殖有紧密关联的信号分子通路,在多种肿瘤中过度激活,发挥促进肿瘤增殖的生物学效应。Copine(cpne)家族在肿瘤发展中有着重要生物学功能,如:该家族蛋白cpne1可以通过上调葡萄糖转运体GLUT1以及己糖激酶HK2激活AKT途径,从而促进CRC进展及化疗抵抗作用。cpne7作为cpnes中的一员,其在肿瘤中的研究还不够深入,尤其是在CRC的研究更是鲜有报道。目的:研究cpne7在结直肠癌增殖、迁移和侵袭中的作用,并探讨cpne7促进结直肠癌进展的具体机制。方法:(1)通过对数据库进行生信分析及q-PCR、WB等实验探索cpne7在CRC患者中的表达;免疫组织化学染色(IHC)评分分析CPEN7与CRC患者的临床相关性。(2)构建CPEN7过表达(Lv19-cpne7-HA)及敲低(sh cpne7)质粒,建立稳定表达cpne7的细胞株。增殖实验(MTT)、平板克隆、划痕实验、及Transwell实验验证cpne7体外功能;通过小鼠皮下荷瘤模型来验证cpne7体内功能。(3)瞬时转染CPEN7过表达及敲低的慢病毒,收集细胞总RNA进行转录组测序,探索cpne7促癌的信号通路。(4)Co-IP实验探索与cpne7结合的蛋白,改变结合蛋白表达观察cpne7对于MAPK信号通路的影响。结果:(1)在多种数据库中,相对于正常组织而言,cpne7在癌组织中高表达。q PCR,WB及IHC实验揭示cpne7蛋白表达在癌组织中高于正常癌旁组织。IHC评分及临床病理学资料分析表明:在CRC患者中,cpne7高表达者较低表达者的肿瘤浸润深度(T)更深。(2)体外实验显示cpne7表达上调促进了CRC的增殖、迁移和侵袭,cpne7表达下调则抑制了CRC的增殖、迁移和侵袭;动物体内实验显示cpne7表达上调促进CRC体内生长,cpne7表下调达则抑制CRC体内生长。(3)RNA转录组测序发现cpne7表达发生改变能够引起其他基因的表达变化,且差异基因富集到MAPK信号通路中。(4)Co-IP实验证实了cpne7可以与PKM2结合。沉默cpne7表达可以减弱CRC细胞中ERK的磷酸化;减少PKM2表达后可以抑制cpne7诱导的ERK磷酸化,并且抑制cpne7诱导的CRC细胞增殖。结论:(1)cpne7显著高表达且与CRC肿瘤浸润深度(T)有关。(2)cpne7能够促进结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。(3)cpne7能PKM2结合,激活MAPK信号通路从而促进CRC的进展。图13幅,表20个,参考文献51篇

关键词：结直肠癌 cpne7 PKM2 MAPK信号通路增殖

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cpne7在口腔组织再生中的相关研究进展

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口腔医学 2020年第11期40卷 1050-1053页

作者：刘紫奇葛少华山东大学口腔医学院·口腔医院牙周科山东省口腔组织再生重点实验室山东省口腔生物材料与组织再生工程实验室山东济南250012

钙磷脂结合蛋白Ⅶ(calcium phospholipid⁃binding proteinⅦ,CopineⅦ,cpne7)作为Copine家族成员之一,近年来除了在恶性肿瘤发生发展方面的作用以外,在口腔组织再生方面的更多作用相继被发现。cpne7除了能够诱导牙源性/非牙源性细胞向... 详细信息

钙磷脂结合蛋白Ⅶ(calcium phospholipid⁃binding proteinⅦ,CopineⅦ,cpne7)作为Copine家族成员之一,近年来除了在恶性肿瘤发生发展方面的作用以外,在口腔组织再生方面的更多作用相继被发现。cpne7除了能够诱导牙源性/非牙源性细胞向成牙本质细胞分化、促进成牙本质细胞分化形成牙本质以外,还具备促进牙周组织再生和骨形成的作用。该文就cpne7在口腔组织再生及肿瘤性疾病发生发展中的作用作一综述,从而为组织再生和相关疾病诊疗的研究提供参考。

关键词： cpne7 牙本质再生牙周组织再生骨再生肿瘤性疾病

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cpne7在结直肠癌组织中的表达及临床意义

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数理医药学杂志 2022年第7期35卷 952-955页

作者：师鑫鹏李宾罗晓勇郑州大学附属洛阳中心医院放疗科洛阳471009 河南洛阳市肿瘤临床诊疗研究中心洛阳471009

目的:研究结直肠癌患者肿瘤组织中cpne7的表达及与患者病情、预后的关系。方法:回顾性选择90例结直肠患者为研究对象,经手术获取结直肠癌组织标本和癌旁正常黏膜组织标本,采用Western blotting免疫印迹法检测标本组织和肿瘤细胞系中cpne... 详细信息

目的:研究结直肠癌患者肿瘤组织中cpne7的表达及与患者病情、预后的关系。方法:回顾性选择90例结直肠患者为研究对象,经手术获取结直肠癌组织标本和癌旁正常黏膜组织标本,采用Western blotting免疫印迹法检测标本组织和肿瘤细胞系中cpne7的表达,采用免疫组化检测结直肠癌组织芯片中cpne7的表达,分析cpne7表达水平与肿瘤病理特征的关系及在预后评估中的应用。结果:cpne7在结直肠癌细胞株中的表达明显高于正常结直肠上皮细胞株,且与癌旁正常组织比较,cpne7在结直肠癌组织中的表达明显升高。90例患者中共84例(93.33%)出现肿瘤组织中cpne7表达量高于癌旁组织(Pcpne7高表达率为50.00%,高于癌旁组织的7.78%(Pcpne7高表达率均高于N0者(Pcpne7高表达率高于Ⅰ期、Ⅱ期者(Pcpne7表达水平与患者预后相关(Pcpne7的表达较癌旁正常组织明显升高,且与淋巴结转移类型、TNM分期及生存预后密切相关,临床上通过cpne7检测可为结直肠的诊治及预后判断提供参考。

关键词：结直肠癌 cpne7 病理特征预后

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