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PDGFR kinase inhibitor protects against septic death via regulation of BTLA

Science China(Life Sciences) 2022年第10期65卷 1917-1928页

作者： Qiang Wang Jin Deng Jianhui Sun Huacai Zhang Di Liu Chu Gao Jinchao Qiu Wenyi Liu Guoxin Qu Dalin Wen Juan Du Anqiang Zhang Ling Zeng Jianxin Jiang Department of Trauma Medical Center Daping HospitalState Key Laboratory of TraumaBurns and Combined InjuryArmy Medical UniversityChongqing 400042China Department of Emergency the Affiliated Hospital of Guizhou Medical UniversityGuizhou Medical UniversityGuiyang 550001China

Sepsis,defined as life-threatening organ failure caused by a dysregulated host response to severe infection,is a major cause of death among intensive care unit patients.Therapies targeting on immunomodulatory is a new research field in sepsis treatment.B-and T-lymphocyte attenuator(BTLA)is an inhibitory costimulatory factor molecule of B and T lymphocytes.Studies have shown that elevated expression of BTLA in lymphocytes can reduce mortality in sepsis,but its regulatory compounds and the underlying mechanism remains to be elucidated.Here,we show that treatment with cp-673451 significantly decreases mortality of septic mouse.cp-673451 is a PDGFR kinase inhibitor which can promote the expression of BTLA,inhibit the release of chemokines such as CXCL13,and reduce first the chemotaxis of B cells to the peripheral blood and vital organs.cp-673451 also inhibits both the release of cytokines and chemokines such as IL-1β,IL-6,IL-10,TNF-α,CCL1,CCL2 and CCL7 and reduces both the chemotactic ability of T cells.This suggests that cp-673451 may prevent septic death by inhibiting lymphocyte chemotaxis and alleviating“cytokine storm”.In conclusion,our study provides a new therapeutic target and an effective compound for sepsis treatment.

关键词： sepsis B-and T-lymphocyte attenuator platelet-derived growth factor receptor cp-673451 cytokine storm

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PDGFR抑制剂cp-673451对NSCLC细胞毒性作用及增敏顺铂效应的研究

PDGFR抑制剂CP-673451对NSCLC细胞毒性作用及增敏顺铂效应的研究

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作者：杨洋广东药科大学

学位级别：硕士

目的:血小板衍生生长因子受体(PDGFR)属于受体酪氨酸激酶。PDGFR的过表达、突变激活、融合表达等异常在某些肿瘤的发生、发展、转移中发挥重要作用。在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中通常伴有PDGFR的过表达和突变激活。在NSCLC中,PDGF/PDGF... 详细信息

目的:血小板衍生生长因子受体(PDGFR)属于受体酪氨酸激酶。PDGFR的过表达、突变激活、融合表达等异常在某些肿瘤的发生、发展、转移中发挥重要作用。在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中通常伴有PDGFR的过表达和突变激活。在NSCLC中,PDGF/PDGFR的过表达常与癌症的不良预后有关。本实验旨在研究PDGFRβ抑制剂cp-673451对NSCLC细胞的细胞毒性作用及其潜在的机制,并进一步探究cp-673451联合顺铂对NSCLC的细胞毒性作用,以期为临床应用PDGFR靶向治疗NSCLC提供实验依据。方法:(1)通过免疫荧光染色检测PDGFRβ在A549和H358细胞中的表达情况;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测cp-673451对A549和H358细胞中磷酸化PDGFRβ水平的影响;MTT法检测cp-673451对A549、H358和BEAS-2B细胞的增殖能力的影响;(2)通过流式细胞术、Caspase-Glo 3/7活性测定,检测cp-673451对A549和BEAS-2B细胞凋亡的影响;(3)通过DCFH-DA活性氧检测试剂盒测定cp-673451对A549细胞内ROS含量的影响,之后通过流式细胞术及Caspase-Glo 3/7测定在外加抗氧化剂NAC后,cp-673451对A549细胞凋亡的影响;(4)蛋白免疫印记(Western blotting)、实时定量基因扩增荧光(RT-qPCR)等实验技术,检测cp-673451对A549细胞Nrf2的蛋白表达及mRNA表达的变化,同时检测Nrf2下游靶基因HO-1、NQO-1的mRNA表达情况;采用GSH检测试剂盒,检测外加cp-673451后的A549细胞中总GSH水平;(5)在外加Nrf2激活剂tBHQ后应用流式细胞术、DCFH-DA活性氧检测和GSH试剂盒等技术检测cp-673451引起的A549细胞的凋亡、ROS和GSH含量的变化情况;(6)构建稳定低表达PDGFRβ的A549细胞株,再通过Western blotting、MTT、流式细胞术、Caspase-Glo 3/7、DCFH-DA和GSH试剂盒等技术检测cp-673451对沉默表达PDGFRβ的A549细胞的影响;(7)采用MTT法、流式细胞术、Caspase-Glo3/7、DCFH-DA和GSH检测试剂盒等技术检测cp-673451与顺铂联用对A549细胞毒性的影响。结果:(1)在A549和H358细胞中PDGFRβ均高表达,cp-673451可有效抑制A549和H358细胞中的PDGFRβ的磷酸化水平;cp-673451可抑制NSCLC细胞系(A549和H358细胞)的增殖,但对正常细胞(BEAS-2B细胞)影响较小;(2)cp-673451可以诱导A549细胞凋亡,但在相同剂量范围内对BEAS-2B细胞凋亡影响无显著性差异;cp-673451可明显升高A549细胞中的ROS含量并呈剂量依赖性,在外加抗氧化剂NAC后可拮抗cp-673451诱导的A549细胞的凋亡;(3)cp-673451可以降低A549细胞中Nrf2及其下游靶基因HO-1、NQO-1的表达,且cp-673451可减少A549细胞中GSH的含量;在外加Nrf2激活剂tBHQ后,可逆转cp-673451引起的A549细胞中ROS含量的升高、细胞的凋亡增加和GSH含量的降低;(4)应用数据库分析和实验技术证实了cp-673451通过PI3K/Akt通路抑制Nrf2在A549细胞中的表达;(5)通过构建沉默表达PDGFRβ的A549细胞株的实验证实cp-673451对A549细胞的作用是通过抑制PDGFRβ实现的,从而排除了“脱靶效应”的影响;(6)最后我们的实验证实cp-673451可增敏顺铂对A549细胞毒性作用。结论:(1)PDGFRβ抑制剂cp-673451通过升高A549细胞中的ROS水平引起细胞毒性。(2)该作用是通过抑制PI3K/Akt/Nrf2信号通路而实现的。(3)cp-673451可增敏顺铂对A549细胞的细胞毒性作用。

关键词： PDGFRβ cp-673451 Nrf2 顺铂 NSCLC

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选择性PDGFR抑制剂cp-673451对A549细胞侵袭和迁移的抑制作用

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河南科技大学学报（医学版） 2019年第3期37卷 173-176页

作者：平贯芳郗玉玲邓智建新乡医学院第一附属医院临床药学室

目的探讨选择性PDGFR抑制剂cp-673451对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、侵袭、迁移的影响及其作用机制。方法体外培养人非小细胞肺癌A549细胞,采用Transwell法、划痕法和免疫荧光法检测细胞侵袭、迁移和片状伪足形成的影响,Western印... 详细信息

目的探讨选择性PDGFR抑制剂cp-673451对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、侵袭、迁移的影响及其作用机制。方法体外培养人非小细胞肺癌A549细胞,采用Transwell法、划痕法和免疫荧光法检测细胞侵袭、迁移和片状伪足形成的影响,Western印迹实验检测A549细胞的Akt、GSK-3β、p70S6和S6蛋白的磷酸化水平。结果cp-673451能够抑制A549细胞侵袭、迁移和伪足形成,抑制Akt、GSK-3β、p70S6和S6蛋白的磷酸化,且呈浓度依赖性。结论cp-673451抑制人非小细胞肺癌细胞侵袭和迁移,抑制PDGFR下游信号传导通路蛋白的表达,可能是其作用机制。

关键词：非小细胞肺癌 cp-673451 细胞侵袭细胞迁移

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脓毒症早期预警模型的构建与B淋巴细胞免疫靶向治疗及其机制研究

脓毒症早期预警模型的构建与B淋巴细胞免疫靶向治疗及其机制研究

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作者：王强贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:脓毒症是目前重症监护病房中发病率和死亡率高的重要原因。早期诊断、及时治疗是减少脓毒症损害的重要手段。本研究拟通过构建脓毒症早期预警模型,对发生脓毒症高风险人群进行早期鉴别,进而采用药物对脓毒症早期免疫过度反应进行... 详细信息

目的:脓毒症是目前重症监护病房中发病率和死亡率高的重要原因。早期诊断、及时治疗是减少脓毒症损害的重要手段。本研究拟通过构建脓毒症早期预警模型,对发生脓毒症高风险人群进行早期鉴别,进而采用药物对脓毒症早期免疫过度反应进行靶向干预,并探索相应的变化机制,以期为脓毒症的早期诊断和有针对性的免疫靶向治疗提供新策略。方法:1.构建脓毒症早期预警模型:基于最小绝对收缩和选择算子方法(LASSO)筛选影响脓毒症发生的可疑危险因素,然后对可疑危险因素采用多因素Logistic回归分析确立发生脓毒症的独立危险因素,进一步联合独立危险因素构建列线图早期预警模型,建立脓毒症早期预警评分系统。使用C指数评估脓毒症早期预警模型的预测能力,并利用校准图来校正模型。通过分析决策曲线,确定模型净效益与阈值概率之间的关系,明确模型临床实用性,并采用内部数据抽样的方法对模型的预测能力进行验证。2.B淋巴细胞免疫靶向治疗及其机制研究:我们前期已经发现,B和T淋巴细胞的抑制性共刺激因子(BTLA)与脓毒症的预后具有密切相关性,结合现有研究,提出了科学假设:上调BTLA表达水平可降低脓毒症的死亡率。进行实验验证,首先利用In-cell Western方法从商用抑制剂药物库中筛选能促进BTLA表达药物,并构建脓毒症动物模型验证抑制剂对脓毒症的保护作用。然后,采用细胞因子蛋白芯片和液相芯片高通量筛选参与早期抑制剂调控的细胞因子,并在动物和细胞中进行定量PCR的验证,还利用流式细胞分析参与免疫调节的淋巴细胞在脓毒症病人和动物模型中的变化。最后通过分析细胞因子和淋巴细胞的改变,推测出抑制剂靶向调节脓毒症早期过度免疫反应的可能机制。结果:1.采用LASSO和多因素Logistic回归方法筛选出凝血酶原时间>15秒,抗凝血酶Ⅲ活性>80(%)和D-二聚体>1mg/L共3个独立危险因素,并将独立危险因素进行联合,构建了脓毒症早期预警模型,根据模型的列线图发现:模型预测评分越高,脓毒症发生率越高;早期预测模型的C指数为0.85(95%Cl:0.81-0.90),验证数据集中C指数为0.85(95%Cl:0.81-0.90),预测能力较好。校准图表明:预测模型预测性能优良。决策曲线分析显示,当脓毒症概率阈值在15%到87%之间时,该模型临床适用性强。2.商用抑制剂药物库筛选发现,血小板衍生生长因子受体(PDGFR)信号通路的抑制剂cp-673451上调BTLA表达作用最强,并且对脓毒症动物模型的脏器损伤和死亡率都具有较好保护作用。细胞因子芯片检测并通过验证得出,cp-673451可以抑制CXCL13、CCL1、CCL2、CCL7、IL-1β和IL-10的释放。流式细胞分析也证明,发生脓毒症的病人与动物模型体内B淋巴细胞比例升高,而cp-673451治疗可以降低动物模型外周血中B淋巴细胞的比例。结论:本研究以临床资料分析为切入点,筛选出脓毒症发生的危险因素,将危险因素进行联合构建脓毒症早期预警模型,对脓毒症进行早期识别。在尽早甄别脓毒症高危群体后,采用PDGFR信号通路抑制剂进行早期治疗,抑制趋化因子CXCL13、CCL1、CCL2和CCL7的释放,降低外周血和重要器官中B和T淋巴细胞的趋化性,然后降低淋巴细胞产生的促炎因子IL-1β和抗炎因子IL-10,同时抑制过度促炎和抗炎激活,减轻早期过度免疫炎症反应,减少脏器损伤,进而降低死亡率。

关键词：脓毒症 B和T淋巴细胞抑制性共刺激因子血小板衍生生长因子受体 cp-673451 免疫炎症反应

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