检索结果-南通市图书馆

作者：吴纯清西南大学

学位级别：硕士

烟草(Nicotiana tabacum L．)，茄科(Solanaceae)、烟属(Nicotiana)，主要起源于美洲、大洋洲及南太平洋的一些岛屿，大约在明朝万历年间(1573～1619年)传入我国。目前发现的烟属植物有66种。烟草是喜温作物，1～2℃低温时植株即死亡，1... 详细信息

烟草(Nicotiana tabacum L．)，茄科(Solanaceae)、烟属(Nicotiana)，主要起源于美洲、大洋洲及南太平洋的一些岛屿，大约在明朝万历年间(1573～1619年)传入我国。目前发现的烟属植物有66种。烟草是喜温作物，1～2℃低温时植株即死亡，10～13℃生长停止。在成熟期昼夜平均在16～17℃以下，叶片品质低劣。因此，低温寒害是影响烟草生产的重要限制因子，严重的影响其产量和品质。本实验将低温诱导启动子RD29a控制的GUS基因转入烟草，以探明拟南芥RD29a启动子在烟草植株中的表达特性;同时，将该启动子分别控制的拟南芥CBF低温应答转录激活因子基因和cor15a冷诱导基因一起转入烟草，以期利用CBF的快速和高效激活所有携带CRT／DRE元件的冷诱导基因表达，以及cor15a抗寒基因对光合膜等内膜系统的强力保护，达到提高烟草植株的整体抗寒性和低温下的光合作用能力的目的。我们期望这种抗寒改良策略在模式植物烟草上的成功，以便为其他经济作物的抗寒性改良提供理论和实践依据。主要研究结果如下： 1．分别将RD29a-GUS基因和RD29a-CBF与RD29a-cor15a双价基因导入烟草材料K326中，PCR扩增检测结果表明有阳性扩增条带，初步证明外源基因已经整合到烟草基因组中。 2．转RD29a-GUS基因植株作GUS组织化学染色实验，结果表明，RD29a启动子在烟草中同在拟南芥中一样，不具有组织表达特异性，而是低温诱导型启动子。它在25℃常温下不表达，10℃左右为诱导临界温度，4℃左右稳定和高效表达。 3．转RD29a-CBF和RD29a-cor15a双价基因植株的低温抗寒性实验结果显示，转基因植株在1℃ 48h未出现萎蔫，冰点温度-2℃，而非转基因植株1℃ 12h即出现萎蔫状态，冰点温度-1℃。电导率测定和用Logistic方程拟合，得到转基因植株LT为-1.01℃左右，非转基因植株LT为0.86℃。转基因植株的细胞膜伤害率比非转基因植株低20％，半致死温度低约1.87℃。转基因植株的POD活性、可溶性糖含量和脯氨酸含量分别是非转基因植株的3.42倍、2.57倍、1.23倍。 4．正常温度下，转RD29a-CBF和RD29a-cor15a双价基因植株生长状况与非转基因植株相似。但田间越冬栽植结果显示，转基因植株在抗寒性增强的同时，在植株形态上也发生了变化，主要特征有叶由长椭圆形变成柳叶状、茎秆变细，易折断、植株由高大直立变矮化、

关键词：烟草 RD29a启动子 cor15a基因 CBF3转录因子基因抗寒

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小拟南芥cor15a基因的克隆及序列分析

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石河子大学学报（自然科学版） 2003年第2期7卷 87-89页

作者：崔百明李予霞乐锦华郑明刚包慧芳石河子大学生物技术重点实验室新疆石河子832003 新疆兵团绿洲生态农业重点实验室新疆石河子832003

拟南芥的cor15a基因受低温处理、ABA及干旱诱导表达,与植物的低温驯化有关。根据拟南芥序列,利用PCR技术从小拟南芥基因组中克隆了Atcor15a的同源基因Apcor15a。2个基因具有相同的结构,Apcor15a编码139个氨基酸,其序列有84%与Atcor15a... 详细信息

拟南芥的cor15a基因受低温处理、ABA及干旱诱导表达,与植物的低温驯化有关。根据拟南芥序列,利用PCR技术从小拟南芥基因组中克隆了Atcor15a的同源基因Apcor15a。2个基因具有相同的结构,Apcor15a编码139个氨基酸,其序列有84%与Atcor15a蛋白相同。

关键词：小拟南芥 cor15a基因基因克隆序列分析低温驯化 PCR 基因表达植物基因工程

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抗寒相关基因导入黄瓜的研究

抗寒相关基因导入黄瓜的研究

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作者：邵长文西南农业大学

学位级别：硕士

黄瓜(Cucumis sativus L．)原产于热带和亚热带区域，是一种重要喜温类蔬菜，生长适宜温度为25-32℃，低温界限为10-12℃，10℃以下生长停止，5℃有受害的危险，经过低温锻炼的幼苗能忍受短时间1-2℃的低温。由于种属内没有抗寒的资源... 详细信息

黄瓜(Cucumis sativus L．)原产于热带和亚热带区域，是一种重要喜温类蔬菜，生长适宜温度为25-32℃，低温界限为10-12℃，10℃以下生长停止，5℃有受害的危险，经过低温锻炼的幼苗能忍受短时间1-2℃的低温。由于种属内没有抗寒的资源材料，显著提高黄瓜的抗寒性就不能通过有性杂交转育，只能利用基因工程手段导入其他物种的抗寒相关基因，从而来打破植物遗传群体中抗寒种质资源缺乏的限制，为黄瓜抗寒育种提供新的种质资源。冷诱导启动子RD29A受干旱和低温诱导而产生表达活性;cor15a基因在拟南芥菜抗寒中起重要的作用，CBF3冷调控转录因子基因能促进大量冷诱导基因在在常温下的表达。本试验将冷诱导启动子RD29A分别控制下的拟南芥菜cbf3冷调控转录因子基因和cor15a抗寒基因构建植物表达载体，分别构建成携有RD29A-cor15a-Tnos表达盒的植物表达载体pVCT2016和携有RD29A-cor15a-Tnos和RD29A-CBF3-Tnos串联双表达盒的植物表达载体pRD29A-CBF3。通过农杆菌介导，导入黄瓜基因组，创制出耐寒黄瓜新材料。 1 植物表达载体的构建 1．1 表达载体pVCT2016的构建克隆载体pSAU1001经限制性内切酶XbaⅠ酶切后经DNA聚合酶Ⅰ Klenow片段补平粘末端，再用SacⅠ酶酶切，电泳，从1％的琼脂糖凝胶中回收纯化426bp小片段;表达载体pRD29A-GUS-T经SmaⅠ和SacⅠ双酶切后回收13550bp大片段;用T连接酶连接两个片断，转化大肠杆菌，在kan抗性的LB平板上筛选出阳性克隆，进行colony PCR鉴定和酶切鉴定。提取质粒pVCT2016，用冻融法导入农杆菌菌株LBA4404(pAL4404)中。 1．2 表达载体pRD29A-CBF3的构建：西南农业大学硕士学位论文为了构建表达载体pRD29A一BF3，我们又构建了两个中间载体***29A一cBF3和 pGEM一肋29A一CBF3.克隆载体pVCTZolZ经月认班11趁必oRI双酶切后切成2635bp和1949bp 两片断，回收小片段汪几”dlll尼co孙双酶切pBS n Ks+，乙醇沉淀去除12bP小片断，回收2949bP 大片段，T4连接酶连接，构建成pBs-RD29A一CBF3;pBs一劝29A一cBF3经刀“成月叮clal双酶切后，回收1974bp小片段，pGEM·7zf经刀“优月叮c如I双酶切后，回收2988bP大片段，T4连接酶连接，转化大肠杆菌，构建成***29A￡***29A-cBF3用五七。RI酶切成2983bP和1978bP两片断，电泳回收1978bP小片断，P vCT2016经五七口Iu酶切后成线状DNA 片段，T4连接酶连接，转化大肠杆菌和农杆菌，构建成植物表达载体pRD29A一BF3. 2植物表达载体对黄瓜子叶的遗传转化研究 2.1黄瓜子叶的遗传转化再生体系的优化在前人工作的基础之上‘I，’·“‘，’·‘·’·”，对黄瓜子叶的遗传转化的培养基进行了优化，获得了优化的培养基配方，提高了外植体的芽分化率，克服了培养过程中出现的玻璃化，褐化现象。以2天龄的黄瓜子叶为外植体，以MS(1960年)为基本培养基，通过加入不同浓度和不同组合的BA、ABA和ZT，筛选到了试管苗分化最适培养基(璐附加BA Zmg/L+ZT lmg/L+超A ***/L+3%蔗糖+0.7%琼脂的固体培养基)、不定芽生长培养基(MS附加3%蔗糖和0.7% 琼脂的固体培养基)和根分化生长最适培养基(l/ZMS附加3%蔗糖+0.，%琼脂的固体培养基). 在最适培养基上研究了黄瓜子叶外植体对卡那霉素的敏感性、预培养天数、共培养时间及感菌时间等因素的影响，建立了黄瓜高频转基因再生体系，即取1天龄的黄瓜无菌子叶在不定芽分化最适培养基OCM(MS加BAZmg/L+ZTlmg/L+ABAO，sm以L+3%蔗糖+0.7%琼脂的固体培养基)上预培养1天，投入到活化的农杆菌LBA4404(pRD29A一CBF3+P AL44O4)菌液中浸染15 分钟，在ocM上暗培养2天，在附加Carb 300mg/L的ocM培养基上延迟筛选培养一周后，转入筛选培养基(戊M+Kan80m岁L+c arb ZOOmg/L)中筛选抗性愈伤和抗性芽，每两周更换一次培养基，抗性芽转入不定芽生长培养基中培养1周，然后转入生根培养基中诱导生根，共获得具有Kan抗性的黄瓜再生芽14个，共获得9株抗性再生植株。 2.2转基因黄瓜的分子鉴定 .取Kan抗性的黄瓜植株叶片，用CTAB法提取的基因组DNA作为PcR扩增的模板，以Tnos 终止

关键词：黄瓜 cor15a基因 CBF3转录因子基因遗传转化

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