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前交叉韧带损伤与胶原蛋白基因col1A1、col5A1及col12a1的相关性

中国组织工程研究 2017年第12期21卷 1849-1854页

作者：陈鸿史荔张俊赵道洪史磊陆秦楠张启段祺辉舒嵩华昆明市第一人民医院运动医学关节外科云南省昆明市650000 中国医学科学院医学生物学研究所云南省昆明市650000 昆明医科大学第二附属医院骨科云南省昆明市650000

背景:目前前交叉韧带损伤发生的病因尚不清楚,有学者认为内部因素和外部因素共同作用导致前交叉韧带的损伤,而作为内部危险因素之一的遗传因素逐渐受到人们的重视。有研究显示,胶原蛋白基因col1A1,col5A1和col12a1与部分高加索人群前交... 详细信息

背景:目前前交叉韧带损伤发生的病因尚不清楚,有学者认为内部因素和外部因素共同作用导致前交叉韧带的损伤,而作为内部危险因素之一的遗传因素逐渐受到人们的重视。有研究显示,胶原蛋白基因col1A1,col5A1和col12a1与部分高加索人群前交叉韧带损伤相关。目的:探索col1A1,col5A1和col12a1基因多态性与中国汉族人群前交叉韧带损伤发生的关系。方法:收集105名前交叉韧带损伤的汉族患者和110例无前交叉韧带损伤史的汉族个体作为对照,通过限制性片段长度多态性分析、测序技术对col1A1基因内含子1区的rs1800012,col5A1基因3’-UTR区的rs12722和rs13946,col12a1基因外显子65和29区的rs970547和rs240736进行检测并分型。结果与结论:col1A1和col5A1基因的rs1800012,rs12722和rs13946基因型、基因表型及单倍型在前交叉韧带损伤病例和对照组中未见显著差异;col12a1基因的rs970547和rs240736基因型、基因表型及单倍型在前交叉韧带损伤病例和对照组中未见显著差异。但在2组男性前交叉韧带患者中rs970547基因频率差异有显著性意义。说明在中国汉族人群,col1A1基因Sp1结合位点rs1800012不是中国汉族人群前交叉韧带损伤发生的易感位点;col5A1基因rs12722和rs13946与中国汉族人群前交叉韧带损伤发生的关联作用不大;col12a1基因的rs970547和rs240736与中国男性前交叉韧带损伤有一定相关性,携带有col12a1基因rs970547 A等位基因及AA基因型的男性个体可能增加前交叉韧带损伤的患病风险。

关键词：组织构建组织工程中国汉族人群前交叉韧带损伤胶原蛋白基因 col1A1 col5A1 col12a1 单核苷酸多态性易感性

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上皮性卵巢癌中miR-199a-3p、col12a1的表达及作用机制研究

上皮性卵巢癌中miR-199a-3p、COL12A1的表达及作用机制研究

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作者：王方方华北理工大学

学位级别：硕士

目的探讨微小RNA-199a-3p（miRNA-199a-3p）和胶原十二型α1链（col12a1）在卵巢癌中的表达、作用及临床意义,验证miRNA-199a-3p直接靶向调控col12a1的表达,分析卵巢癌患者组织中miRNA-199a-3p和col12a1的表达与临床病理特征的关系。方... 详细信息

目的探讨微小RNA-199a-3p（miRNA-199a-3p）和胶原十二型α1链（col12a1）在卵巢癌中的表达、作用及临床意义,验证miRNA-199a-3p直接靶向调控col12a1的表达,分析卵巢癌患者组织中miRNA-199a-3p和col12a1的表达与临床病理特征的关系。方法选取2019年09月至2020年09月在唐山工人医院妇产科住院接受手术治疗并经病理证实的上皮性卵巢癌患者（上皮性卵巢癌组）40例。另外需选取正常卵巢上皮组织（因子宫腺肌症等疾病切除卵巢组织）以及良性上皮性卵巢肿瘤组织,分别选取30例作为对照组,标本严格按照标本的纳入及排除标准选取,并根据2014年国际妇产科联盟（FIGO）手术病理分期标准由两位高职病理医师分组标本组织。同时选取两种卵巢癌细胞系（SKOV3细胞、OVCAR3细胞）,并经过一系列实验研究进行相关分析。采用实时定量PCR方法检测miRNA-199a-3p在正常卵巢上皮组织30例、上皮性卵巢癌组织40例、良性上皮性卵巢肿瘤上皮组织30例及两种卵巢癌细胞系（OVCAR3细胞、SKOV3细胞）中的表达;经生物信息学预测初步预测两者关系存在靶向调节,进一步经过荧光素酶报告基因检测验证miRNA-199a-3p和col12a1之间的靶向调节关系;采用免疫组化化学方法检测不同病理卵巢癌组织中col12a1的表达;采用Western blot方法检测col12a1在卵巢癌细胞中的表达情况;侵袭能力的检测主要使用Transwell实验;流式细胞仪实验根据计算细胞的凋亡百分数检测两种卵巢癌细胞凋亡能力。在不同卵巢癌组织中miRNA-199a-3p和col12a1表达进行相关性分析,在上皮性卵巢癌中,将col12a1和miRNA-199a-3p的表达情况分为高表达组以及低表达组,将数据进行统计比较。结果1采用RT-qPCR实验检测不同病理人卵巢组织及不同卵巢细胞中miRNA-199a-3p表达水平,得出的结果提示,相比较于正常卵巢组织,miRNA-199a-3p在上皮性卵巢癌组织中的表达水平呈下降趋势（P＜0.001）,然而在良性肿瘤组中,结果无这种趋势（P=0.084）;在体外培养的细胞中,相比较于正常卵巢上皮细胞,卵巢癌细胞系（OVCAR3细胞、SKOV3细胞）中miRNA-199a-3p的均下降,差异有统计学意义（均P＜0.05）。2生物信息学预测显示在col12a1上存在miRNA-199a-3p结合的序列;进行进一步实验双荧光素酶报告基因实验证实,在野生型中,col12a1以及miRNA-199a-3p荧光素酶活性呈下降状态（P＜0.05）,但是在突变型中,这种状态并不存在（P＞0.05）。结果说明miRNA-199a-3p与col12a1间存在负向靶向调节关系。3为了检测col12a1的表达情况,采用免疫组织化学方法进行检测,进行免疫组化实验,col12a1在不同卵巢组织中,进行免疫组化实验后,在上皮性卵巢癌组中,视野下可见棕黄色颗粒。并且其中有26例（65%）患者col12a1呈阳性表达（P=0.029）。4为了检测col12a1的表达情况（在卵巢癌细胞中）,采用Western blot方法,得出的结果表示,相比较于正常卵巢上皮细胞,col12a1在卵巢癌细胞系（OVCAR3细胞、SKOV3细胞）中的表达水平均呈上升趋势,差异有统计学意义（均P＜0.05）。5为了验证miR-199a-3p的侵袭能力,需要进行transwell实验,得出的结果表示,在卵巢癌细胞中,与转染NC mimic组比较,miR-199a-3p mimic组侵袭数降低（P=0.004）;相反,与转染NC inhibitor组比较,miR-199a-3p inhibitor组的侵袭数升高（P＜0.001）。此实验结果表示miR-199a-3p的存在对于肿瘤的侵袭作用起到抑制的作用。6流式细胞仪法实验验证与转染NC mimic组比较,miR-199a-3p mimic组的凋亡数所占百分率升高（P=0.003）;相反,与转染NC inhibitor组比较,miR-199a-3p inhibitor组凋亡数所占百分率降低（P＜0.001）。揭示miR-199a-3p具有促进肿瘤凋亡作用。7相关性分析结果表明,在正常组、良性组中,col12a1 m RNA以及miR-199a-3p的表达并没有相关性（均P＞0.05）,对于在卵巢癌组中,col12a1 m RNA以及miR-199a-3p的表达呈现负相关的趋势（P=0.0069）,随后将临床病理参数进行统计分析,得出结果表示col12a1 m RNA（P=0.029）以及miR-199a-3p（P=0.008）的表达水平与病理分级有相关性,其中,miR-199a-3p还与FI

关键词：上皮性卵巢癌 miRNA-199a-3p col12a1

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胃癌相关成纤维细胞来源的COL12A1促进胃癌细胞3D生长的作用与机...

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作者：郭昱辰内蒙古医科大学

学位级别：硕士

背景和目的:胃癌是最常见的消化系统实体肿瘤,全球每年新发病例超过120万,死亡病例超过60万,严重威胁着人类健康。过去对胃癌发生发展机制的研究,多着眼于胃癌细胞内部分子功能的异常。近年来,胃癌微环境在胃癌发生发展中的作用日益引... 详细信息

背景和目的:胃癌是最常见的消化系统实体肿瘤,全球每年新发病例超过120万,死亡病例超过60万,严重威胁着人类健康。过去对胃癌发生发展机制的研究,多着眼于胃癌细胞内部分子功能的异常。近年来,胃癌微环境在胃癌发生发展中的作用日益引起重视。胃癌微环境的一个重要组成成分是细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)。胶原蛋白是ECM的主要成分,ECM中胶原含量的异常改变会促进肿瘤的发生发展。目前已知的胶原基因有44种,其中col12a1在胃癌进展中的作用尚知之甚少。本实验中,我们将使用胃癌相关成纤维细胞和胃癌细胞3D共培养的模型来研究col12a1是否在胃癌进展中发挥重要作用。方法:1、下载公共数据库的数据,使用生物信息学方法筛选胃癌发生发展过程中的关键胶原基因,分析胃癌组织中col12a1的mRNA表达情况及其与患者预后和临床病理参数的相关性。2、收集临床样本,使用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫荧光检测col12a1在胃癌和癌旁正常组织中的表达情况,分析胃癌组织中col12a1的蛋白表达水平与患者临床病理参数的相关性;分离培养胃正常成纤维细胞和胃癌相关成纤维细胞,使用RT-qPCR和Western blot检测col12a1在正常胃粘膜上皮细胞株GES-1、胃癌细胞株(HGC-27、SGC-7901、AGS)、胃正常成纤维细胞和胃癌相关成纤维细胞中的表达。3、将胃癌相关成纤维细胞和胃癌细胞进行3D共培养,观察敲减col12a1对胃癌细胞3D生长能力的影响。4、生物信息学方法结合实验分析胃癌细胞膜上与col12a1作用的受体分子。5、通过敲减胃癌相关成纤维细胞中col12a1的表达,向共培养体系中加入col12a1的抗体、AKT的抑制剂和激活剂,来分析col12a1与胃癌细胞膜表面受体作用后,对胃癌细胞中下游信号通路的激活。结果:1、生物信息学分析发现:与癌旁组织和胃正常组织相比,胃癌组织中col12a1的mRNA表达显著上调,其表达水平与患者不良预后相关,与肿瘤的T分期相关;在胃癌组织中,col12a1主要表达于成纤维细胞,并与FAP等肿瘤相关成纤维细胞标志物的表达水平正相关。2、RT-qPCR和免疫荧光检测显示:胃癌组织中col12a1的mRNA和蛋白表达水平均显著高于癌旁正常组织,胃癌组织中col12a1的蛋白表达水平与肿瘤浸润深度和肿瘤大小正相关;胃癌组织中,col12a1与FAP的mRNA和蛋白表达均正相关。RT-qPCR 和 Western blot 检测显示:胃癌细胞株 HGC-27、SGC-7901 和 AGS 中 col12a1的表达水平与正常胃粘膜上皮细胞株GES-1中无显著差异,胃癌相关成纤维细胞中col12a1的表达远高于胃正常成纤维细胞、胃癌细胞株和正常胃粘膜上皮细胞株。3、胃癌相关成纤维细胞来源的col12a1在促进胃癌细胞3D生长中发挥重要作用。4、胃癌细胞膜上的ITGA5介导了 col12a1促进胃癌细胞3D生长的作用。5、胃癌相关成纤维细胞来源的col12a1激活了胃癌细胞中的FAK-AKT通路而促进其3D生长。结论:胃癌相关成纤维细胞来源的col12a1通过ITGA5激活了胃癌细胞中的FAK-AKT通路而促进其3D生长,是胃癌治疗的一个潜在靶点。

关键词：癌相关成纤维细胞 col12a1 3D生长

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col12a1?rs970547位点基因多态性与前交叉韧带损伤相关性的Meta分析

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中华生物医学工程杂志 2019年第2期25卷 148-154页

作者：杨磊波段广斌卫小春张志伟郭鹏张发元山西医科大学附属晋城市人民医院骨科山西晋城048000 国家临床重点专科山西医科大学第二医院骨科骨与软组织损伤修复山西省重点实验室太原030001

目的利用Meta分析方法对col12a1?rs970547位点基因多态性与前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)损伤相关性进行系统评价.方法对2018年3月之前发表的关于col12a1?rs970547位点基因与ACL损伤的文献进行检索、收集和整理,用Meta... 详细信息

目的利用Meta分析方法对col12a1?rs970547位点基因多态性与前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)损伤相关性进行系统评价.方法对2018年3月之前发表的关于col12a1?rs970547位点基因与ACL损伤的文献进行检索、收集和整理,用Meta分析的方法分析等位基因G vs A、显性模型(AG+GG)vs AA、隐性模型GG vs(AA+AG)、共显性模型AA vs GG和AA vs GA在ACL损伤组与对照组中是否有差异,以期深入揭示col12a1?rs970547位点基因多态性与ACL损伤的联系.结果本研究在5个团队的5份独立样本(包括患者686例和健康对照890例)的Meta分析发现,总体人群中,col12a1?rs970547位点基因多态性与ACL损伤在等位基因G vs A[OR=1.29,95% CI (1.05,1.60),P=0. 02]、显性模型(AG+GG)vs AA[OR=1.49,95% CI(1.17,1.89),P=0. 001]、共显性模型AA vs GA[OR=1.57,95% CI(1.23,2.01),P=0. 0003]方面差异有统计学意义,可认为col12a1?rs970547位点基因多态性与ACL损伤存在一定的关联性.单独对欧洲?高加索人种、亚洲人种进行亚组Meta分析,结果显示欧洲?高加索人种中,等位基因G vs A、各基因模型在ACL损伤组与对照组中的差别无统计学意义(P>0. 05),尚不能认为欧洲?高加索人种中col12a1?rs970547位点基因多态性与ACL损伤存在关联性.在亚洲人种中等位基因G vs A[OR=1.76,95% CI(1.20,2.57),P=0.004]、显性模型(AG+GG)vs AA[OR=2.93,95% CI(1.58,5.44),P=0. 0007]、共显性模型AA vs GG[OR=3.92, 95% CI(1.46,10.47),P=0.000 7]和AA vs GA[OR=2.83,95% CI(1.50,5.34),P=0. 001]在ACL损伤组与对照组中的差异有统计学意义,可认为亚洲人种中col12a1?rs970547位点基因多态性与ACL损伤存在关联性.结论本次Meta分析显示至少在亚洲人种中,col12a1?rs970547位点基因多态性与ACL损伤存在关联性,利用这种基因有助于发现ACL损伤新的预防及治疗策略.

关键词： col12a1 rs970547 多态性,单核苷酸前交叉韧带损伤 Meta分析

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甲状腺相关眼病眼眶脂肪组织异常增生的机制研究

甲状腺相关眼病眼眶脂肪组织异常增生的机制研究

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作者：白晓晶中南大学

学位级别：硕士

目的:本研究旨在发现甲状腺相关眼病(Thyroid-Associated Ophthalmopathy,TAO)稳定期伴有眼球突出患者眼眶脂肪组织异常增生过程中在转录水平发生的变化,并进一步研究其与TAO病理变化之间的关系,为TAO的药物治疗提供新的靶点。方法:(1)6... 详细信息

目的:本研究旨在发现甲状腺相关眼病(Thyroid-Associated Ophthalmopathy,TAO)稳定期伴有眼球突出患者眼眶脂肪组织异常增生过程中在转录水平发生的变化,并进一步研究其与TAO病理变化之间的关系,为TAO的药物治疗提供新的靶点。方法:(1)6个TAO患者眼眶脂肪组织及6个正常对照的眼眶脂肪组织进行转录组测序,构建TAO患者m RNA差异表达谱,行GO富集分析及KEGG通路分析,并选择10个目标基因进行下一步验证。(2)另选每组8个样本行眼眶脂肪组织水平目标基因的RTqPCR验证,寻找差异表达具有统计学意义的目标基因用于后续实验。(3)行TAO患者及正常对照眼眶脂肪组织的原代成纤维细胞培养,在细胞水平行差异基因的再次验证。结果:(1)TAO眼眶脂肪组织的差异表达基因共468个,GO及KEGG分析显示最为富集的通路是PPAR信号通路,脂肪细胞脂解调节,脂肪酸代谢,甘油脂代谢,胰岛素信号通路,细胞外基质受体相互作用,蛋白质消化吸收及癌症中的蛋白聚糖通路等。确定C5,C6,WNT,WNT2,WNT4,SCD,CXCR2,FABP4,PPARG和col12a1为目标基因进行下一步验证。(2)组织水平RT-qPCR目标基因的验证显示,C5,WNT,WNT4及col12a1基因的差异表达具有统计学意义。(3)细胞水平RT-qPCR目标基因的验证显示,C5,WNT,WNT4及col12a1基因的差异表达无统计学意义。结论:本研究通过对比稳定期并有突眼体征的TAO患者与正常对照的眼眶脂肪组织在转录水平的差异,发现C5,Wnt信号通路及col12a1基因表达异常引起的ECM的改变可能与眼眶脂肪组织的异常增生有关,作为TAO潜在的治疗靶点有进一步研究的价值。图14幅,表9个,参考文献75篇

关键词：甲状腺相关眼病转录组分析 C5 WnT信号通路 col12a1 眼眶脂肪组织

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