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大鼠血小板衍生生长因子C重组腺病毒载体的构建及在内皮祖细胞中的表达

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重庆医学 2013年第16期42卷 1837-1840页

作者：李锋罗文军唐博陈以宽孙建明付健重庆医科大学附属第二医院血管外科 400010

目的构建含大鼠血小板衍生生长因子C(PDGF-C)基因的pAD-EGFP-PDGF-C的重组腺病毒表达载体,体外转染骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)并观察目的基因蛋白及mRNA表达情况。方法通过逆转录聚合酶链式反应技术(RT-PCR)法从pIRES2-EGFP-PDGF-C真核... 详细信息

目的构建含大鼠血小板衍生生长因子C(PDGF-C)基因的pAD-EGFP-PDGF-C的重组腺病毒表达载体,体外转染骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)并观察目的基因蛋白及mRNA表达情况。方法通过逆转录聚合酶链式反应技术(RT-PCR)法从pIRES2-EGFP-PDGF-C真核表达载体中获得PDGF-C目的片段,经BP重组与LR重组插入到pAD/cmv/V5-DEST,构建pAD-PDGF-C-IRES2-EGFP腺病毒载体。酶切及DNA测序鉴定后转染HEK293A包装、纯化,测定病毒滴度后转染大鼠骨髓源性EPCs,应用Real-time qPCR、蛋白免疫印迹法(Western blotting)等方法检测PDGF-C蛋白及mRNA的表达。结果核酸内切酶消化及PCR分析证实PDGF-C基因成功插入pAD/cmv/V5-DEST腺病毒载体,转染后荧光显微镜下观察可见绿色荧光蛋白表达,转染48h后实时定量酵素聚合反应技术(Real-time qPCR)测定EPCs中PDGF-C含量明显提高(P<0.05),Wester blotting检测证实在46×103存在特异性条带。结论成功构建了大鼠PDGF-C基因的腺病毒表达载体pAD-EGFP-PDGF-C,体外转染大鼠骨髓源性EPCs能高效表达目的基因产物,为后续研究PDGF-C基因功能以及进一步开展基因治疗奠定了基础。

关键词：血小板衍生生长因子C pAD cmv V5-DEST腺病毒载体内皮祖细胞转染

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重庆市辣椒TMV和cmv的鉴定

中国蔬菜 2001年第3期 13-15页

作者：林清吕中华黄任中黄启中雷蕾史思茹重庆市农业科学研究所重庆市巴南区走马一村400055

1997～ 1999年在重庆市郊辣椒产区采集病毒病标样 16 2个 ,采用生物学鉴定、血清学鉴定及稳定性试验进行检测 ,结果表明 ,重庆市辣椒病毒病主要由cmv和TMV复合侵染所致 ,其检出率分别为 79.0 %和 5 4.2 %。TMV单独为害检出率较低 (7.5 %... 详细信息

1997～ 1999年在重庆市郊辣椒产区采集病毒病标样 16 2个 ,采用生物学鉴定、血清学鉴定及稳定性试验进行检测 ,结果表明 ,重庆市辣椒病毒病主要由cmv和TMV复合侵染所致 ,其检出率分别为 79.0 %和 5 4.2 %。TMV单独为害检出率较低 (7.5 % ) ,cmv单独侵染的频率较高 (32 .3 % )

关键词：辣椒病毒病鉴定 TMV cmv 症状田间消长规律

免疫功能低下患者的巨细胞病毒感染监测方法的比较研究

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临床检验杂志 2005年第1期23卷 31-33页

作者：刘代红黄晓军许兰平郭乃榄陆道培北京大学人民医院北京大学血液病研究所北京100044

目的　比较免疫功能低下患者的巨细胞病毒 (cmv)感染监测方法对临床的指导意义。方法　每周采集临床标本 ,用传统细胞培养法 (CC)、间接免疫荧光法 (IIF)、斑点杂交和PCR法、ELISA监测。结果　敏感性最高的CC和IIF法为 10 0 % ;其次PCR... 详细信息

目的　比较免疫功能低下患者的巨细胞病毒 (cmv)感染监测方法对临床的指导意义。方法　每周采集临床标本 ,用传统细胞培养法 (CC)、间接免疫荧光法 (IIF)、斑点杂交和PCR法、ELISA监测。结果　敏感性最高的CC和IIF法为 10 0 % ;其次PCR法 ,为 75 % ;特异性最高的CC和IIF法为 73% ;其次斑点杂交法为 6 7%。CC和IIF法的阴性预测值为 10 0 % ,而PCR和斑点杂交法分别为 84 .4 %和 83.3%。接受骨髓移植的病人抗cmvIgM在移植后 3个月内均为阴性 ,抗cmvIgG平均滴度在cmv抗原阳性组和阴性组病人中的差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　CC、IIF、斑点杂交和PCR法均可作为cmv监测方法 ,检测持续阴性的患者为cmv活动性感染低危人群。

关键词： cmv 免疫功能低下阴性患者抗C 病人 PCR法 CC 结论指导意义

共表达胞嘧啶脱氨酶和胸苷激酶双自杀基因杀伤大鼠血管平滑肌细胞的机制研究

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中国循环杂志 2004年第4期19卷 309-312页

作者：曹慧青孟宪敏刘冬青赵秀文丁金凤中国医学科学院中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院分子医学中心北京市100037

目的 :研究共表达胞嘧啶脱氨酶 (CD)和胸苷激酶 (TK)双自杀基因对大鼠血管平滑肌细胞的杀伤机制。方法 :将表达CD和 (或 )TK的单、双自杀基因重组腺病毒载体分为 4组即Ad EF1α CD组、Ad cmv TK组、Ad EF1α CD cmv TK组和Ad lacZ组。... 详细信息

目的 :研究共表达胞嘧啶脱氨酶 (CD)和胸苷激酶 (TK)双自杀基因对大鼠血管平滑肌细胞的杀伤机制。方法 :将表达CD和 (或 )TK的单、双自杀基因重组腺病毒载体分为 4组即Ad EF1α CD组、Ad cmv TK组、Ad EF1α CD cmv TK组和Ad lacZ组。感染原代培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,感染复数为 2 0。给予相应的前体药物 5 氟胞嘧啶和脱氧鸟苷后 ,用四甲基偶氮挫盐微量酶反应比色法 (MTT)和流式细胞术分析细胞死亡率。荧光染料Hoechst 3 3 3 42核染色观察凋亡细胞。琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞基因组脱氧核糖核酸 (DNA)的降解。结果 :血管平滑肌细胞可被重组腺病毒有效感染 ( 70 % )。MTT检测发现Ad EF1α CD cmv TK组双自杀基因及其前体药物 [5 氟胞嘧啶 ( 3 0 μg/ml)和脱氧鸟苷 ( 0 3 μg/ml) ]的细胞毒效应可达 91% ,高于Ad cmv TK组 ( 68% )和Ad EF1α CD组 ( 63 % )单自杀基因组。流式细胞仪分析Ad cmv TK组和Ad EF1α CD cmv TK组的杀伤作用是以细胞毒性坏死和凋亡为主。凋亡细胞荧光染色显示Ad EF1α CD cmv TK组和Ad cmv TK组细胞的凋亡率分别为 11 0 %和 12 0 % ,高于Ad cmv LacZ组 ( 1 2 % )和Ad EF1α CD组 ( 5 0 % )。琼脂糖凝胶电泳发现在Ad cmv TK组和Ad EF1α CD cmv TK组的基因组DNA可?

关键词：双自杀基因 cmv 血管平滑肌细胞大鼠胸苷激酶胞嘧啶脱氨酶凋亡细胞共表达鸟苷脱氧核糖核酸

高频振荡通气在新生儿呼吸窘迫综合征中的应用

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广东医学 2005年第7期26卷 942-944页

作者：林泽鹏陈丽珊赵少岚广东省汕头市妇幼保健院新生儿科 515041

目的观察高频振荡通气(HFOV)治疗新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)的应用价值及安全性。方法40例NRDS患儿,20例应用HFOV治疗,20例应用常频机械通气(cmv)治疗,观察治疗前后24h内呼吸机参数和氧合参数的变化。结果HFOV组24h内吸氧浓度(Fi02)从0... 详细信息

目的观察高频振荡通气(HFOV)治疗新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)的应用价值及安全性。方法40例NRDS患儿,20例应用HFOV治疗,20例应用常频机械通气(cmv)治疗,观察治疗前后24h内呼吸机参数和氧合参数的变化。结果HFOV组24h内吸氧浓度(Fi02)从0.85±0.13降至0.50±0.06(Pcmv,氧合改善快,短时间内氧浓度、MAP下降更快,是一种疗效肯定、安全性好的新型机械通气方法。

关键词：新生儿呼吸窘迫综合征高频振荡通气 HFOV 常频机械通气二氧化碳分压呼吸机参数平均气道压应用价值 NRDS 治疗前后吸氧浓度通气效果通气方法安全性 24h cmv MAP

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肝移植术后巨细胞病毒再感染的预防与治疗

中华器官移植杂志 2005年第3期26卷 139-141页

作者：肖卫东彭承宏周光文吴伟顶沈柏用陈皓李宏为上海第二医科大学附属瑞金医院外科及器官移植中心上海200025

目的　探讨肝移植术后巨细胞病毒(cmv)再感染的预防、诊断及治疗。方法　回顾性分析44例原位肝移植患者的临床资料。结果　44 例中,术前43 例(97.7 %)有cmv潜伏性感染,其中6例(14.0 %)术后发生cmv再感染。6例cmv再感染患者的cmv pp65抗... 详细信息

目的　探讨肝移植术后巨细胞病毒(cmv)再感染的预防、诊断及治疗。方法　回顾性分析44例原位肝移植患者的临床资料。结果　44 例中,术前43 例(97.7 %)有cmv潜伏性感染,其中6例(14.0 %)术后发生cmv再感染。6例cmv再感染患者的cmv pp65抗原均为阳性,3例cmv IgM阳性,均为无临床症状的cmv活动性感染,其中5例治愈,无一例发展为cmv病,1 例因上消化道大出血死亡。43例中,仅有7例cmv再感染高危病例接受了抗cmv感染的预防性治疗,患者在生存期内未发生cmv再感染。结论　在我国,肝移植患者术前cmv潜伏性感染的发生率较高,测定cmv pp65抗原可以早期诊断cmv再感染;对cmv再感染的高危患者进行预防性治疗可以降低术后cmv再感染的发生率;对无临床症状的cmv再感染者进行及时、规范的治疗是防止cmv病发生的关键。

关键词：再感染 cmv 治疗术后患者肝移植术 pp65 结论中国目的

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cmv对百香果果实品质的影响及防控研究

CMV对百香果果实品质的影响及防控研究

作者：赵芷贵州大学

学位级别：硕士

黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,cmv）是百香果病毒病中的主要病原,为百香果的种植、培育和果实品质带来了严重影响,对百香果产业造成了巨大威胁。至今市面上还没有防效较高的抗cmv药剂,且目前未有它对果实品质具体影响的研究报道... 详细信息

黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,cmv）是百香果病毒病中的主要病原,为百香果的种植、培育和果实品质带来了严重影响,对百香果产业造成了巨大威胁。至今市面上还没有防效较高的抗cmv药剂,且目前未有它对果实品质具体影响的研究报道,导致百香果cmv的防控研究成为了一大难题。因此,本文先以百香果（紫香一号）幼苗为实验材料,建立室内cmv-百香果苗活体筛选模型;再通过室外田间防效实验,调查不同药剂处理的防治效果并测定果实品质,筛选出1-2种较好抗cmv药剂;进一步采用转录组测序和蛋白组学技术筛选出不同药剂处理组中的差异基因和差异蛋白及相关代谢通路,来探讨抗cmv药剂的作用机制。主要研究内容与结果如下:（1）室内cmv-百香果苗活体筛选对百香果苗喷药处理48 h后进行cmv农杆菌摩擦接种,通过普通PCR检测样本带毒率发现,CK组带毒率为91.7%,5%氨基寡糖素组为50%,30%毒氟磷组为66.67%,8%宁南霉素组为83.3%,20%盐酸·吗啉胍组为58.3%和5.9%辛菌·吗啉胍组为83.3%;相对防效分别为45.48%,27.3%,9.17%,36.43%和9.17%,5%氨基寡糖素组相对防效最高。进一步采用RT-q PCR技术检测cmv CP基因的表达量,结果表明CK组的cmv CP基因表达量最高,为2.34;5%氨基寡糖素组最低,为0.23。最后测定不同药剂处理组的叶绿素含量和防御酶活性发现,受到cmv感染后,CK组叶绿素含量和防御酶活性总体处于下降趋势,并且低于大部分处理组;5%氨基寡糖素处理能明显提高样本叶绿素含量和调节防御酶活性。（2）不同药剂田间防效试验及对百香果果实品质影响选用5%氨基寡糖素、30%毒氟磷、8%宁南霉素、20%盐酸·吗啉胍和5.9%辛菌·吗啉胍5种抗病毒药剂,进行田间防效试验发现,5%氨基寡糖素和20%盐酸·吗啉胍两组相对防效分别达到47.35%和44.45%,防治效果最佳。测定果实品质发现,药剂处理对外观品质无显著性影响;20%盐酸·吗啉胍和5%氨基寡糖素两种药剂能明显提高果实的抗氧化酶活性,提升抗病能力效果显著;其中,5%氨基寡糖素处理显著性提高了果实的可溶性固形物、可滴定酸、维生素C、氨基酸和有机酸含量,具有增强果实品质的作用。（3）百香果不同喷药处理组的转录组测序分析对防效较高的5%氨基寡糖素（COS）和20%盐酸·吗啉胍（Mor）两种药剂处理样本进行转录组RNA-seq,COS组与CK组相比,差异表达基因共有911个,557个上调,354个下调;Mor组与CK组相比,差异表达基因共有1149个,546个上调,603个下调。差异基因GO分类分析发现,COS组和Mor组的差异基因都参与了防御反应、氧化还原和蛋白磷酸化三个生物过程;都涉及到蛋白结合和ATP结合两个分子功能;其中,COS组中的差异基因还主要涉及到了激酶活性和蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性两个分子功能。对差异基因的KEGG通路富集分析发现,两个处理组主要富集到植物激素信号转导、MAPK信号通路-植物、植物病原体相互作用和苯丙素的生物合成等代谢通路,这些代谢通路与药剂抗病作用有关联。筛选代谢通路中的关键差异基因进行RT-q PCR验证,验证结果与转录组数据上下调情况一致,其中COS组和Mor组中的基因表达量均呈上调表达趋势,且与CK组差异显著,两种药剂处理能明显提高各差异基因表达量。（4）百香果不同喷药处理组的蛋白组学研究通过质谱鉴定不同处理样本的蛋白发现,CK组共鉴定到962个蛋白,240个特异性表达;COS处理组共鉴定到884个蛋白,193个特异性表达;Mor处理组共鉴定到862个蛋白,128个特异性表达;其中有694（54.81%）个共同的蛋白。对差异蛋白进行GO分析,发现COS组中的差异蛋白主要涉及了叶绿素结合分子功能,参与了光合作用:光系统I中的光收集生物过程,两个GO分类均与光合作用过程有关;Mor组与COS组两组集中在细胞组分上的差异蛋白最多,其中,COS组主要定位到叶绿体相关组分。对差异蛋白进行KEGG通路富集分析发现,共富集到257条代谢通路,主要富集在次级代谢物生物合成、光合作用生物中的碳固定、光合作用、植物激素信号转导、植物病原体互作、苯丙素生物合成和MAPK信号通路等代谢通路。采用转录组测序和蛋白组学数据联合分析发现,共同表达的psb A、atp F、CAB21蛋白主要作用于光合作用途径,其中psb A蛋白在两个处理组中呈上调表达,CAB21蛋白在两个处理组中呈下调表达,而atp F蛋白仅在COS组中呈上调表达,表明COS对光合作用机制有保护作用,并使百香果对cmv免疫。

关键词：百香果 cmv 药剂筛选果实品质转录组测序蛋白质组学

手足口病患儿EV71、CoxA16及EBV和cmv的检测与临床意义

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基础医学与临床 2014年第2期34卷 251-252页

作者：杜潘艳乔国昱赵丽梅王振荣河北省唐山市妇幼保健院检验科河北省唐山市协和医院检验科河北唐山063000

手足口病（handfootandmouthdisease，HFMD）是一种全球性的急性传染病，病原体以肠道病毒71型（enterovirus71，EV71）和柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus，CoxA16）为主。轻者预后良好，重症多合并神经系统疾病。

关键词：手足口病 CoxA16 EV71 临床意义柯萨奇病毒A组16型 cmv EBV 肠道病毒71型

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黄瓜cmv抗性相关基因的分子标记研究

黄瓜CMV抗性相关基因的分子标记研究

作者：黄焕焕西北农林科技大学

学位级别：硕士

黄瓜(Cucumis sativus L.)栽培地域广泛,因其果实清脆爽口,营养丰富,深受各国人民的喜爱。病毒病是黄瓜的一种严重病害,黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,cmv)是黄瓜病毒病的主要毒源,依靠蚜虫传播。采用化学药剂防治病毒病效果不明... 详细信息

黄瓜(Cucumis sativus L.)栽培地域广泛,因其果实清脆爽口,营养丰富,深受各国人民的喜爱。病毒病是黄瓜的一种严重病害,黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,cmv)是黄瓜病毒病的主要毒源,依靠蚜虫传播。采用化学药剂防治病毒病效果不明显,培育抗病品种是一种有效的防治途径。传统育种在抗病性转育的过程中,需要在人工接种后,根据表型用目测法进行抗病性鉴定,费时、费力、转育效率低,而且存在因鉴定的误差容易使目标性状丢失等问题。分子标记辅助选择(Maker-Assisted Selection, MAS)为在植物抗病性育种中目标性状的选择提供了一条快速有效的途径。本研究以天津科润黄瓜研究所育成的黄瓜感cmv自交系HZL04-1和抗cmv自交系F-3及其配制的F和其F后代群体为试材。用侵染我国黄瓜的cmv主导致病株系—cmv-重花叶株系对亲本、F和F的各个单株进行室内人工接种鉴定,根据鉴定结果采用BSA法选取不同F单株构成抗感组,应用AFLP、SRAP和SSR三种分子标记技术筛选与黄瓜cmv抗性相关基因相连锁的标记。主要结果如下: 1.在光照培养箱中对F、F后代群体进行黄瓜cmv的苗期接种鉴定,结果表明在该遗传群体中黄瓜对cmv的抗性不受细胞质遗传的影响,是由细胞核基因决定的,受单一隐性基因控制。 2.利用适合于黄瓜的分子标记体系,从1024对AFLP引物组合中筛选到298对在双亲间表现多态性的引物组合,从221对SRAP引物组合中筛选到122对在双亲间表现多态性的引物组合,从140对SSR引物组合中筛选到18对在双亲间表现多态性的引物组合。 3.通过BSA改良法,从F代分离群体中选用极端抗病和极端感病的单株各5株分别构成抗、感组。利用AFLP技术,从298对AFLP多态性引物组合中找到了一个与黄瓜cmv抗性相关基因相连锁的显性标记(E22/M88-204bp),该标记在抗病组和感病组间表现多态性,对所有F单株进行验证,结果显示:140个F单株中,表现抗病的31个单株中有3株发生了交换,扩增出与感病单株相同的带型;表现感病的109个单株中9株发生了交换,与抗病单株相同,在多态性位点未出现特异性片段。因此推测,所筛选到的标记与黄瓜cmv感病性基因相连锁,其连锁距离为8.57cM。 4.用煮沸法回收AFLP的标记片段,并进行了测序。根据测序结果设计一对特异性引物,将此AFLP标记转化为一个共显性SCAR标记。利用获得的SCAR标记对13份已知抗性的黄瓜材料进行了验证,验证结果与田间抗病性表现的吻合率84.6%,表明该标记可以用于黄瓜cmv的分子标记辅助育种。

关键词：黄瓜(Cucumis sativus L.) cmv AFLP SRAP SSR