检索结果-南通市图书馆

作者：付尧中南大学

学位级别：硕士

背景:最新流行病学研究显示,肺癌是全世界发病率及死亡率最高的恶性肿瘤,严重威胁人类的生命健康。非小细胞癌(Non-small Cell Lung Cancer,NSCLC)占肺癌总数的85%,是最常见的肺癌类型,现有的常规治疗难以控制晚期NSCLC的发展,因此临床... 详细信息

背景:最新流行病学研究显示,肺癌是全世界发病率及死亡率最高的恶性肿瘤,严重威胁人类的生命健康。非小细胞癌(Non-small Cell Lung Cancer,NSCLC)占肺癌总数的85%,是最常见的肺癌类型,现有的常规治疗难以控制晚期NSCLC的发展,因此临床迫切需要开发新的分子靶点以提高患者预后。活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)可以通过诱导肿瘤程序性死亡抑制癌症发生发展,且该机制已经被认为是靶向癌症治疗的核心——单克隆抗体和酪氨酸激酶抑制剂产生抗癌作用的主要机制,并解释了多种抗肿瘤药物及放化疗产生疗效的原理。氯离子细胞内通道(Chloride Intracellular Channel,clic)家族蛋白已被证明在胃癌、肝细胞癌、皮肤肿瘤等多种癌症中发挥不同作用。氯离子细胞内通道-5(clic5)由于其在线粒体内膜上的独特位置及其与ROS的潜在关联,提示其可能能够通过ROS影响NSCLC的恶性进展。然而,clic5对NSCLC的作用和机制目前尚不明确,亟待进一步研究,因此本研究旨在揭示clic5对NSCLC的作用及机制,为临床靶向治疗开发提供新的靶点。方法:在第一部分研究中,本研究首先使用TIMER 2.0在线工具分析了TCGA数据库在30余种肿瘤组织及癌旁组织中的表达差异。其次,为了验证NSCLC中clic5的表达水平,本研究随机抽取了72例于2014年1月到2018年12月期间在湘雅医院胸外科行肺癌根治术,病理诊断为NSCLC的患者的原发肿瘤及其癌旁正常组织样本,采用免疫组织化学方法分析对比clic5在NSCLC组织及癌旁组织中的表达差异。再次,采用NSCLC细胞系和正常支气管上皮细胞系验证clic5表达水平并为下一部分研究中的细胞选择提供依据。第二部分研究中,首先使用慢病毒感染技术构建稳定clic5高表达及其阴性对照的PC-9细胞系及A549细胞系,并采用荧光显微镜及Western Blot检测对其表达水平进行验证。在体外实验中,本研究使用Ed U、CCK-8、流式细胞检测技术检测clic5对细胞增殖和细胞周期分布的影响,使用Transwell及划痕愈合实验探索clic5对细胞迁移能力的影响。在体内试验中,本研究利用裸鼠通过皮下成瘤建立细胞株移植瘤模型,通过绘制小鼠生存曲线、观察肿瘤大小及成瘤率明确clic5在裸鼠体内对NSCLC进展的影响。第三部分研究中,本研究利用Dihydroethidium(DHE)荧光探针验证了稳定过表达clic5细胞株及阴性对照组中ROS的水平,使用N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)抑制ROS活性后,采用Ed U检测各组细胞株中细胞增殖能力,验证了ROS在clic5在调控NSCLC增殖能力中的关键作用。随后利用Western blot实验检测clic5影响NSCLC细胞中ROS相关信号通路的表达水平,以此推测clic5调控NSCLC细胞增殖能力的分子机制。结果:结果显示clic5在NSCLC患者肿瘤组织中的表达水平显著低于癌旁组织。此外,在A549和PC-9细胞系中过表达clic5显著抑制以上肿瘤细胞的增殖能力,并上调细胞中的ROS水平。NAC干预可抑制细胞中的ROS并逆转clic5过表达介导的增殖抑制效应。最后,机制探索显示,clic5可能通过增加ROS进而抑制Nrf2/p62通路从而抑制NSCLC细胞的增殖能力。结论:本研究验证了clic5在NSCLC患者的肿瘤组织中表达下调,通过细胞实验提示clic5可通过上调ROS抑制Nrf2/p62通路激活,进而抑制NSCLC细胞增殖,并结合动物实验,揭示了clic5过表达可抑制NSCLC进展,为NSCLC的靶向治疗开发提供了新的理论依据。

关键词：非小细胞肺癌 clic5 增殖 ROS Nrf2/p62通路

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小鼠胞内氯离子通道5基因启动子核心功能区域鉴定及转录调控分析

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中国农业大学学报 2012年第5期17卷 137-143页

作者：巨婷婷吕文涛于渤洋刘洋姜美华许玲赵泽平尹靖东中国农业大学动物科学技术学院北京100193

为研究胞内氯离子通道5基因(Chloride intracellular channel 5,clic5)广泛参与调节细胞内的各项生理活动与生化反应,并探讨该基因自身的表达调控机制,以小鼠基因组序列为模板,利用PCR技术扩增小鼠clic5基因5′上游调控序列,将其插入荧... 详细信息

为研究胞内氯离子通道5基因(Chloride intracellular channel 5,clic5)广泛参与调节细胞内的各项生理活动与生化反应,并探讨该基因自身的表达调控机制,以小鼠基因组序列为模板,利用PCR技术扩增小鼠clic5基因5′上游调控序列,将其插入荧光素酶报告基因表达载体(pGL3-Basic)中,同时采用5′侧翼区缺失的方法构建了7个缺失不同DNA片段的荧光素酶表达载体。重组质粒与海肾荧光素酶载体(phRL-TK)共同瞬时转染HEK-293细胞,经双荧光素酶报告基因活性分析后,确定clic5基因的核心启动子区。利用生物信息学方法预测其中转录因子结合位点及启动子区甲基化状况。结果表明,clic5基因启动子缺乏TATA盒,但含有典型的GC盒及其他潜在转录因子结合位点;双荧光素酶报告基因活性分析表明,clic5基因-329～+1、-624～+1、-917～+1和-2 230～+1区域的启动子活性较高,其中-624～+1区域的启动子活性最强。进一步分析表明,启动子区-624～-329存在负性调控元件,预测存在转录因子结合位点RXR heterodimer binding sites与GC-Box factorsSp1/GC,-420～-283范围内存在CpG岛位点。

关键词： clic5 表达调控启动子转录因子 CpG岛

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Early dynamic transcriptomic changes during preoperative radiotherapy in patients with rectal cancer: A feasibility study

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World Journal of Gastroenterology 2013年第21期19卷 3249-3254页

作者： Stephane Supiot Wilfried Gouraud Loc Campion Pascal Jezéquel Bruno Buecher Josiane Charrier Marie-Francoise Heymann Marc-Andre Mahé Emmanuel Rio Michel Chérel Department of Radiation Oncology Institut de Cancérologie de l'Ouest René Gauducheau44800 Nantes-St-HerblainFrance INSERM U892 Centre de Recherche en Cancérologie Nantes-AngersUniversity of Nantes44000 NantesFrance Centre Hospitalier Universitaire 44000 NantesFrance Department of Nuclear Medicine Institut de Cancérologie de l'Ouest René Gauducheau44800 Nantes-Saint HerblainFrance

AIM: To develop novel biomarkers of rectal radiotherapy, we measured gene expression profiles on biopsies taken before and during preoperative radiotherapy. METHODS: Six patients presenting with a locally advanced rectal cancer (T>T2, N0/Nx, M0) eligible for preoperative radiotherapy (45 Gy in 25 fractions) were selected in a pilot study. Six tumor and 3 normal tissues biopsies were taken before and during radiotherapy,after a dose of 7.2 Gy at a median time of 1 h following irradiation (0:27-2:12). Tumor or normal tissue purity was assessed by a pathologist prior to RNA extraction. Mean RNA content was 23 μg/biopsy (14-37) before radiotherapy and 22.7 μg/biopsy (12-35) during radiotherapy. After RNA amplification, biopsies were analysed with 54K HG-U133A Plus 2.0 Affymetrix expression micro-arrays. Data were normalized according to MAS5 algorithm. A gene expression ratio was calculated as: (gene expression during radiotherapy-gene expression before radiotherapy)/gene expression before radiotherapy. Were selected genes that showed a ratio higher than ± 0.5 in all 6 patients. RESULTS: Microarray analysis showed that preoperative radiotherapy significantly up-regulated 31 genes and down-regulated 6 genes. According to the Gene Ontology project classification, these genes are involved in protein metabolism (ADAMDEC1 ; AKAP7 ; CAPN5 ; clic5 ; CPE ; CREB3L1 ; NEDD4L ; RAB27A), ion transport (AKAP7 ; ATP2A3 ; CCL28 ; clic5 ; F2RL2 ; NEDD4L ; SLC6A8), transcription (AKAP7 ; CREB3L1 ; ISX ; PAB-PC1L ; TXNIP), signal transduction (CAPN5 ; F2RL2 ; RA- B27A ; TNFRSF11A), cell adhesion (ADAMDEC1 ; PXDN ; SPON1 ; S100A2), immune response (CCL28 ; PXDN ; TNFRSF11A) and apoptosis (ITM2C ; PDCD4 ; PVT1). Up-regulation of 3 genes (CCL28 ; clic5 ; PDCD4) was detected by 2 different probes and up-regulation of 2 genes (RAB27A ; TXNIP) by 3 probes. CONCLUSION: Micro-arrays can efficiently assess early transcriptomic changes during preoperative radiotherapy for rectal cancer, and may he

关键词： CCL28 clic5 PDCD4 RAB27A TXNIP Protein metabolism Cell adhesion Cell migration SPON1 Carboxypeptidase E

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