检索结果-南通市图书馆

作者：姚茜广西医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨clec4m对鼻咽癌细胞黏附、侵袭和迁移的影响,进一步了解clec4m与鼻咽癌淋巴结转移之间的关系。方法:1.通过Realtime-PCR检测本实验室常见鼻咽癌细胞株及人淋巴管内皮细胞株(human lymphatic endothelial cell,HLEC)中 clec4m ... 详细信息

目的:探讨clec4m对鼻咽癌细胞黏附、侵袭和迁移的影响,进一步了解clec4m与鼻咽癌淋巴结转移之间的关系。方法:1.通过Realtime-PCR检测本实验室常见鼻咽癌细胞株及人淋巴管内皮细胞株(human lymphatic endothelial cell,HLEC)中 clec4m 基因的表达情况。2.将HLEC细胞分别感染clec4m空载、颈段7个重复序列及9个重复序列的慢病毒,并通过琼脂糖凝胶电泳、Realtime-PCR、Western Blot等实验从分子水平和蛋白水平验证感染慢病毒后HLEC细胞中clec4m的过表达情况。3.将构建好的稳定过表达clec4m的HLEC细胞株与鼻咽癌细胞5-8F、6-10B共培养,通过小管形成实验和细胞洗脱实验验证clec4m对鼻咽癌细胞的黏附作用。此外,还将鼻咽癌细胞5-8F和6-10B分别与clec4m人重组蛋白共孵育,运用流式细胞术进一步验证clec4m与鼻咽癌细胞的黏附能力。4.通过Transwell细胞侵袭和迁移实验以及细胞划痕实验验证clec4m对鼻咽癌细胞5-8F和6-10B侵袭和迁移能力的影响。结果:***-PCR的结果显示在内参GAPDH的Ct值为16-17之间时本实验室常见鼻咽癌细胞株HK1、CNE1、CNE2、HONE1、5-8F、6-10B中clec4m的表达量无法测出,而HLEC细胞可低量表达clec4m。2.琼脂糖凝胶电泳、Realtime-PCR以及Western Blot的实验结果表明成功构建稳定过表达空载、7重复及9重复clec4m的HLEC细胞株(HLEC-clec4m-control、HLEC-clec4m-7、HLEC-clec4m-9)。3.小管形成实验可见HLEC细胞在基质胶表面呈管状生长,鼻咽癌细胞5-8F及6-10B黏附其上围绕HLEC也呈管状生长。4.细胞洗脱实验发现在接种鼻咽癌细胞1h后进行洗脱,各组之间即表现出明显差异,且黏附的鼻咽癌细胞数量具有时间依赖性。表现为5-8F细胞及6-10B细胞大部分黏附在过表达clec4m的HLEC细胞上,且在有HLEC细胞存在的条件下鼻咽癌细胞更难被洗脱;此外,HLEC-clec4m-7组和HLEC-clec4m-9组所黏附的鼻咽癌细胞数量较HLEC-clec4m-control组更多,且黏附的5-8F细胞数量明显高于6-10B细胞数量。***细胞侵袭和迁移实验表明HLEC-clec4m-7组和HLEC-clec4m-9组可明显促进鼻咽癌细胞5-8F、6-10B的侵袭和迁移,且对5-8F细胞的侵袭和迁移作用高于6-10B细胞;当用甘露糖处理HLEC-clec4m-7细胞后,其对5-8F细胞及6-10B细胞的侵袭和迁移作用稍降低。6.细胞划痕实验可见HLEC细胞表现出明显向5-8F细胞和6-10B细胞生长的趋势,且HLEC-clec4m-7组和HLEC-clec4m-9组的迁移能力明显高于HLEC-clec4m-control组;在加入甘露糖后,HLEC-clec4m-7细胞对5-8F细胞和6-10B细胞的迁移作用略微降低。结论:1.成功构建了稳定过表达空载、7重复及9重复clec4m的HLEC细胞株。***4m对鼻咽癌细胞的黏附、侵袭和迁移能力具有一定的促进作用,且此过程可被甘露糖抑制。***4m颈段重复序列之间的微小差异对鼻咽癌细胞黏附、侵袭及迁移的影响并不明确,仍需进一步讨论。***4m对鼻咽癌细胞具有黏附作用,可能在一定程度上通过诱导鼻咽癌细胞向淋巴结侵袭和迁移,从而促进鼻咽癌淋巴结转移。

关键词：鼻咽癌淋巴管内皮细胞 clec4m 细胞黏附侵袭迁移

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clec4m在肝细胞良恶性病变鉴别诊断的应用研究

CLEC4M在肝细胞良恶性病变鉴别诊断的应用研究

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作者：曾苑君湖南师范大学

学位级别：硕士

目的:探究clec4m（C型凝集素结构域家族4成员m）免疫组织化学染色在肝细胞性肝癌（HCC）、肝细胞腺瘤（HCA）、局灶性结节性增生（FNH）及肝硬化组织中的表达模式的差异,利用诊断试验四格表计算其在上述病变鉴别诊断中的敏感度与特异度... 详细信息

目的:探究clec4m（C型凝集素结构域家族4成员m）免疫组织化学染色在肝细胞性肝癌（HCC）、肝细胞腺瘤（HCA）、局灶性结节性增生（FNH）及肝硬化组织中的表达模式的差异,利用诊断试验四格表计算其在上述病变鉴别诊断中的敏感度与特异度,并与已知的两种指标GPC-3及GS-6做比较,从而探讨clec4m在鉴别诊断HCC、HCA、FNH及肝硬化组织中的意义。方法:回顾性分析不同病理组织学分级的HCC病例77例、HCA病例32例、FNH病例32例、肝硬化病例25例的临床病理资料及定期随访资料。将纳入研究的166例病变组织的石蜡标本分别切片,同时行HE及clec4m免疫组织化学染色,再结合已有病理资料中的GPC-3、GS-6染色结果,通过诊断试验分别计算clec4m、GPC-3和GS-6的敏感度和特异度,并进行统计学分析。结果:（1）对病变组织行clec4m免疫组织化学染色,发现clec4m在HCC、HCA、FNH及肝硬化组织中可以出现不同的染色模式。（1）clec4m的染色部位在正常肝组织中位于肝血窦内皮细胞（LSECs）的细胞质及细胞膜上,呈完整、连续的染色。（2）HCC组织表达模式为完全缺失或仅残留少量不规则的肿瘤血管内皮细胞质及细胞膜染色（“鸡爪状”染色）;（3）HCA中阳性信号定位在肿瘤细胞胞质内,呈“碎点状”染色;（4）FNH中的表达模式主要以围绕肝小叶中央静脉周围的LSECs细胞质及细胞膜染色为主,其余部位完全缺失,呈“地图状”;（5）在肝硬化组织中的表达与正常肝组织染色一致,当出现非典型增生结节时,可见非典型增生区染色部分缺失,呈“地图状”染色。（2）定义clec4m的染色模式为“完全缺失、鸡爪状染色、地图状染色、碎点状染色及无缺失”五种,其中表达模式为“完全缺失和鸡爪状染色”主要出现在HCC中,“碎点状染色”主要出现在HCA中。将所有病例的clec4m染色结果与GPC-3和GS-6的结果进行比较分析,发现“完全缺失和鸡爪状染色”、“碎点状染色”在鉴别诊断上述病变的特异度均高于GPC-3和GS-6,但敏感度均低于GPC-3和/或GS-6。（3）鉴别诊断高分化HCC与FNH及肝硬化组织时,“完全缺失和鸡爪状染色”的特异度高于GPC-3、GS-6,且敏感度高于GPC-3;在鉴别诊断HCA与高分化HCC时,“碎点状染色”的敏感度低于GPC-3及GS-6,但特异度高于GPC-3。（4）对clec4m的染色模式与患者的临床及病理资料（性别、年龄、肿瘤大小、有无肝硬化、Edmondson分级、mVI、卫星结节）进行相关性分析,发现clec4m的不同染色模式与患者的临床及病理资料均无显著关联。结论:（1）clec4m在对HCC、HCA、FNH及肝硬化组织的鉴别诊断中,其特异度高于GPC-3及GS-6,敏感度低于GPC-3和/或GS-6。（2）clec4m在对高分化HCC和HCA、FNH及肝硬化组织的鉴别诊断中,“完全缺失和鸡爪状染色”的特异度高于GPC-3和GS-6,且敏感度高于GPC-3;“碎点状染色”的敏感度低于GPC-3及GS-6,但特异度高于GPC-3。（3）clec4m可以作为HCC、HCA、FNH及肝硬化临床病理鉴别诊断的特异性指标之一,clec4m联合GPC-3及GS-6,可以提高鉴别诊断的特异性及敏感性,更为准确的鉴别上述肝细胞良恶性病变。

关键词： clec4m 肝细胞性肝癌肝细胞腺瘤肝局灶性结节性增生肝硬化

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clec4m介导HCV感染人PBDC实验研究

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肝脏 2013年第4期18卷 224-227页

作者：王媛媛聂青和高禄化第四军医大学唐都医院传染病科全军感染病诊疗中心西安710038

目的通过对表达clec4m的CD14细胞与HCV结合来证实clec4m是介导HCV感染的特异性受体。方法应用磁珠分选出健康人的CD14+细胞,检测表达clec4m后将细胞共分4组,阳性对照组:clec4m+HCV RNA+血清;干扰组:clec4m+鼠抗人clec4m抗体+HCV RNA+血... 详细信息

目的通过对表达clec4m的CD14细胞与HCV结合来证实clec4m是介导HCV感染的特异性受体。方法应用磁珠分选出健康人的CD14+细胞,检测表达clec4m后将细胞共分4组,阳性对照组:clec4m+HCV RNA+血清;干扰组:clec4m+鼠抗人clec4m抗体+HCV RNA+血清,每组均与收集到的3份HCV阳性患者血清作用,阴性对照组:clec4m+正常人血清;空白对照组:clec4m+5%DmEm。干扰组在加入3组HCV RNA+血清之前,先分别加入clec4m抗体进行干预,其余3组滴入同体积PBS。培养24h后利用RT-PCR检测细胞表面结合的HCV RNA含量,培养48h后用免疫荧光法检测细胞与病毒结合情况。结果流式结果表明分离出的CD14细胞中clec4m阳性率高达80%以上。RT-PCR结果显示干扰组HCV RNA含量明显低于阳性对照组。免疫荧光可直观看到阳性对照组有大量绿色荧光,而干扰组只有很少的部分,空白对照组和阴性对照组无荧光。结论表达clec4m的CD14细胞可以与HCV结合,而病毒的结合可以被clec4m抗体竞争性抑制。

关键词： clec4m CD14细胞树突状细胞外周血树突状细胞丙型肝炎病毒免疫荧光

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