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clec-2和TPO相关性的研究进展

中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2021年第10期 371-372页

作者：吴迪罗伟青海大学附属医院青海西宁810000

钙离子依赖型凝集素样受体2( calcium-dependent lectin-like receptor 2,clec-2) 是近些年新发现的一类血小板表面受体,本质属于一种Ⅱ型跨膜受体。clec-2 的外源性和内源性配体分别为唾液酸样糖蛋白 Podoplanin和蛇毒蛋白 Rhodocytin... 详细信息

钙离子依赖型凝集素样受体2( calcium-dependent lectin-like receptor 2,clec-2) 是近些年新发现的一类血小板表面受体,本质属于一种Ⅱ型跨膜受体。clec-2 的外源性和内源性配体分别为唾液酸样糖蛋白 Podoplanin和蛇毒蛋白 Rhodocytin 。配体与受体相互作用后,会引起血小板活化聚集。研究表明 clec2 与TPO 呈正相关,clec-2 与TPO的相互作用对血小板聚集活化起着重要作用,也是MDS的新的分子机制和靶向治疗机制。因此,阻断两者的相互作用有可能成为治疗MDS的新靶点。

关键词：血小板 clec-2 TPO

真核表达质粒pcDNA3.1(+)-clec2的构建及其在CHO细胞中的表达

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真核表达质粒pcDNA3.1(+)-CLEC2的构建及其在CHO细胞中的表达

作者：陈欣欣昆明医学院

学位级别：硕士

人clec-2是一种C型凝集素样受体,它能通过结合到蛇毒蛋白rhodocytin上,引发一系列的信号传导,从而介导血小板的激活和聚集,clec-2是蛇毒蛋白rhodocytin的血小板表面受体。同是它也是人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的共同受体。所以研究clec... 详细信息

人clec-2是一种C型凝集素样受体,它能通过结合到蛇毒蛋白rhodocytin上,引发一系列的信号传导,从而介导血小板的激活和聚集,clec-2是蛇毒蛋白rhodocytin的血小板表面受体。同是它也是人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的共同受体。所以研究clec-2,可以指导设计抗血小板激活和聚集的药物,为心血管血栓性疾病的治疗,甚至为研究HIV的传播提供基础。目的:构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-clec2并检测其在真核细胞CHO内的表达水平。方法: 1.真核表达质粒pcDNA3.1(+)-clec2的构建:根据GenBank收录的clec-2的基因序列,应用Primer Premier 5.0软件设计PCR引物,并在每条引物5’端加上限制性酶切位点。用RNA提取试剂盒从人血小板中提取总RNA。用RT-PCR方法,扩增目的基因clec-2片段。然后用胶回收试剂盒纯化PCR产物。再用T4 DNA连接酶连接经HindⅢ和EcoRⅠ酶切的clec-2 PCR产物和用相同酶切过的pcDNA3.1(+)载体,构建pcDNA3.1(+)-clec2真核表达质粒,氨苄青霉素筛选阳性克隆,再经菌落PCR、酶切和测序进行鉴定。 2.重组质粒pcDNA3.1(+)-clec2转染CHO细胞:应用脂质体转染技术,将重组质粒pcDNA3.1(+)-clec2转染CHO细胞,48小时后用G418筛选30天,获得稳定表达的CHO细胞,用Western blot方法从蛋白质水平检测clec-2基因的表达。结果: 1.通过RT-PCR扩增获得clec-2目的基因片段。 2.成功构建pcDNA3.1(+)-clec2真核表达质粒,经PCR和HindⅢ、EcoRⅠ酶切鉴定证实其目的片段大小与预期的一致;经测序证实其基序列与GenBank公布的一致。 3.建立稳定表达clec-2的CHO细胞株,用Western blot在蛋白质水平检测clec-2基因的表达。结论: 1.成功构建pcDNA3.1(+)-clec2真核表达载体。 2.获得能稳定表达clec-2的CHO细胞株。 3.为下一步纯化clec-2蛋白和探讨其活性提供了实验基础。

关键词： clec-2 CHO细胞基因克隆真核表达

Emerging roles of podoplanin in vascular development and homeostasis

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Frontiers of Medicine 2015年第4期9卷 421-430页

作者： Yanfang Pan Lijun Xia Department of Non-Communicable Diseases Control and Prevention Zhejiang Provincial Center for Disease Control and Prevention Hangzhou 310051 China State Key Laboratory of Bio-organic and Natural Products Chemistry Shanghai Institute of Organic Chemistry Chinese Academy of Sciences Shanghai 200032 China Cardiovascular Biology Research Program Oklahoma Medical Research Foundation OK 73104 USA

Podoplanin （PDPN） is a mucin-type O-glycoprotein expressed in diverse cell types, such as lymphatic endothelial cells （LECs） in the vascular system and fibroblastic reticular cells （FRCs） in lymph nodes. PDPN on LECs or FRCs activates clec-2 in platelets, triggering platelet activation and/or aggregation through downstream signaling events, including activation of Syk kinase. This mechanism is required to initiate and maintain separation of blood and lymphatic vessels and to stabilize high endothelial venule integrity within lymph nodes. In the vascular system, normal expression of PDPN at the LEC surface requires transcriptional activation of Pdpn by Proxl and modification of PDPN with core 1-derived O-glycans. This review provides a comprehensive overview of the roles of PDPN in vascular development and lymphoid organ maintenance and discusses the mechanisms that regulate PDPN expression related to its function.

关键词： podoplanin clec-2 Proxl O-glycosylation lymphatic vascular development and maintenance lymphoid organ homeostasis

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平足蛋白生物学功能的研究进展与应用前景

肿瘤研究与临床 2016年第9期28卷 634-637页

作者：赵星鹏赵益明苏州大学附属第一医院止血与血栓实验室江苏省血液研究所 215006

平足蛋白（PDPN）是Ⅰ型唾黏蛋白样的跨膜糖蛋白，主要表达在淋巴管内皮上，它在炎症的发生发展、淋巴管的分化与形成、肺泡的成熟和维持、肾脏滤过屏障的完整性及血小板的聚集等方面中都起着一定作用。近年来越来越多的研究证明PDPN在... 详细信息

平足蛋白（PDPN）是Ⅰ型唾黏蛋白样的跨膜糖蛋白，主要表达在淋巴管内皮上，它在炎症的发生发展、淋巴管的分化与形成、肺泡的成熟和维持、肾脏滤过屏障的完整性及血小板的聚集等方面中都起着一定作用。近年来越来越多的研究证明PDPN在多种肿瘤细胞表面表达上调，且PDPN与血小板表面表达的C型凝集素样受体2（clec-2）间的相互作用在肿瘤的生长、迁徙与转移中有着重要作用，因此抗PDPN的功能性抗体为肿瘤患者的治疗提供了新的方向，文章针对PDPN功能的研究进展及应用前景进行综述。

关键词：平足蛋白血小板 clec-2 炎症淋巴管肿瘤

STEMI患者急诊PCI无复流的相关危险因素分析

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STEMI患者急诊PCI无复流的相关危险因素分析

作者：黄丹南华大学

学位级别：硕士

目的:探讨在急性ST段抬高型心肌梗死(acute ST segment elevation myocardial infarction,SETMI)患者行急诊冠状动脉介入术(percutaneous coronary intervention,PCI)发生无复流现象的相关危险因素,试图寻找一个高效快捷的预测因子用于指导临床。研究对象及方法:本研究对象为2017年06月1日至2018年05月31日于南华大学附属第一医院住院行冠脉造影及急诊PCI的STEMI患者并符合选入及排除标准患者共186例。按术中TIMI血流分级分为两组:正常复流组(138例)与无复流组(48例),比较两者之间的临床基本资料、实验室检查结果、及PCI结果。运用二元Logistic回归分析来探讨STEMI患者行急诊PCI术后无复流的相关危险因素。并使用应用受试者工作特征曲线(ROC曲线)来分析clec-2预测STEMI患者急诊PCI无复流的最佳临界值及其敏感度和特异度。结果:1.总共纳入186例STEMI患者,其中男性128例,女性58例;年龄在37～87岁之间,平均年龄64.17±9.95岁。根据有无复流分为正常复流组、无复流组二组。复流组共138人,其中男性96例、女性42例,年龄37～85岁,平均年龄63.76±8.32岁。无复流组共48人,其中男性32例、女性16例,年龄44～87岁,平均年龄64.35±10.64岁。两组之间的基本资料进行比较,性别、年龄、糖尿病、高血压、TC、TG、NE、NLR无统计学意义,而吸烟、HDL-C、LDL-C、WBC、PLR、PLT、LY、clec-2均存在统计学差异。2.二元logsitic分析提示无复流组吸烟(OR:1.799,95%CI为1.019-3.225,P=0.049)、clec-2(OR:1.045,95%CI为1.022-1.083,P=0.02)、PLR(OR:1.012,95%CI为1.001-1.023,P=0.035)、LDL-C(OR:1.375,95%CI为1.026-1.900,P=0.04)、LY(OR:1.382,95%CI为1.115-2.148,P=0.026)为无复流的相关危险预测因素,且OR值越大,相关性也就越强,且进一步多因素Logistic回归分析提示吸烟、LDL-C、LY、PLR、clec-2是无复流的独立预测因素。***曲线分析显示,clec-2预测急性ST段抬高型心肌梗死急诊PCI术发生无复流现象的曲线下面积(AUC)为0.782,可信区间为0.697-0.867,并依据约登指数得出最大值选取最佳截点为214.58,敏感性为0.634,特异度为0.815,Pclec-2值>214.58pg/mL时,发生无复流现象的敏感度为0.634,特异度为0.815,且对预测无复流现象发生的价值最大。结论:STEMI患者急诊PCI无复流相关独立危险因素包括:吸烟、LDL-C、LY、PLR、clec-2,且高clec-2值(>214.58pg/mL)可能是STEMI患者急诊PCI无复流的独立预测因子。

关键词： STEMI 无复流危险因素 clec-2

C型凝集素样受体2在急性髓系白血病中的表达及作用研究

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C型凝集素样受体2在急性髓系白血病中的表达及作用研究

作者：李学谦苏州大学

学位级别：硕士

背景及目的:急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia,AML)是一类常见的血液恶性肿瘤,其特征是骨髓和外周血中髓母细胞的异常扩增。膜蛋白C型凝集素样受体2(C-type lectin-like receptor 2,clec-2)属于C型凝集素超家族,是一类肿瘤调节蛋... 详细信息

背景及目的:急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia,AML)是一类常见的血液恶性肿瘤,其特征是骨髓和外周血中髓母细胞的异常扩增。膜蛋白C型凝集素样受体2(C-type lectin-like receptor 2,clec-2)属于C型凝集素超家族,是一类肿瘤调节蛋白。相关研究已证实clec-2及其配体在胰腺癌、肺癌等实体肿瘤中调控肿瘤转移及侵袭作用,同时clec-2可参与维持造血干细胞的正常分化,但其在血液系统肿瘤中的作用尚未明确。本研究前期通过对RNA-seq数据库的分析发现,在髓系白血病细胞中,clec-2表达水平较正常粒细胞降低,我们推测clec-2缺失可能影响造血干细胞正常分化及其向白血病细胞进展。为了探索clec-2在AML中的表达变化、作用机制及生物学效应,我们通过检测临床AML患者标本中clec-2的表达情况,验证高通量数据库结果。分析clec-2在AML不同亚型及其病程阶段的表达差异,探讨clec-2表达与AML患者临床表型的相关性。在体外调控clec-2基因表达水平,验证clec-2表达变化后对髓系白血病细胞株各项表型的影响,探讨clec-2在AML中的作用。方法:(1)在公共数据库Human Protein Atlas及CCLE获取正常造血细胞谱系及血液肿瘤细胞系RNA-seq数据,通过FDR多重假设检验及网状交错分析clec-2在AML细胞及正常造血细胞中的表达差异。(2)采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测58例初诊AML患者、同期健康志愿者(正常对照组)及初诊急性淋巴细胞白血病患者(疾病鉴别对照组)外周血单个核细胞中clec-2的表达差异。采用卡方检验分析clec-2表达水平与患者临床基本特征、分子亚型及治疗前后状态的相关性。ELISA法检测初诊AML患者血浆中clec-2的蛋白水平,分析血浆中clec-2的表达水平差异。(3)选用人髓系白血病细胞株MV4-11,通过慢病毒载体构建clec-2过表达的细胞模型(pCDH-clec-2),以慢病毒空载感染的MV4-11细胞作为阴性对照(pCDH-NC)。分别通过Western Blot及qRT-PCR在蛋白及基因水平上验证过表达模型是否构建成功。CCK-8法检测过表达clec-2对MV4-11细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测过表达clec-2对MV4-11细胞周期分布及凋亡情况的影响;通过KEGG数据库分析差异基因获取下游调控通路,并采用Western Blot验证该通路下游相应的蛋白表达情况。结果:(1)生物信息学分析结果显示,clec-2在AML细胞中的表达水平较正常粒细胞明显下降。(2)qRT-PCR结果显示,初诊AML患者中clec-2的表达显著低于正常对照组,急性淋巴细胞白血病患者与正常对照组间clec-2表达无明显差异;经治疗后完全缓解的AML患者clec-2表达水平较初诊时升高。对AML患者基本临床特征与clec-2表达水平的相关性分析显示,在clec-2低表达组中,年龄≥60岁的患者比例较clec-2高表达组显著升高;白细胞≥20×10^9/L的患者比例较clec-2高表达组显著升高。ELISA结果表明初诊AML患者组与正常对照相比,血浆中clec-2的表达水平明显降低。(3)在mRNA及蛋白水平上验证clec-2过表达的MV4-11细胞模型(pCDH-clec-2)构建成功。过表达clec-2可以显著抑制MV4-11细胞的增殖能力,处于G0/G1期的细胞比例有所升高。过表达clec-2后凋亡通路蛋白Bcl-2的表达下降,BAX蛋白的表达升高,促进MV4-11细胞的凋亡。Western Blot检测结果显示,过表达clec-2抑制磷酸化ERK蛋白的表达,因此MAPK/ERK通路可能参与其下游相关机制的调节。结论:(1)clec-2在初诊急性髓系白血病患者中低表达,化疗后完全缓解患者clec-2表达水平升高。(2)过表达clec-2可影响MV4-11细胞周期分布,抑制细胞增殖,促进其凋亡。

关键词：急性髓系白血病 clec-2 细胞增殖

干扰podoplanin的表达对人早孕期蜕膜基质细胞生物学功能影响的研究

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干扰podoplanin的表达对人早孕期蜕膜基质细胞生物学功能影响的研...

作者：侯艳丽苏州大学

学位级别：硕士

目的：探讨跨膜糖蛋白podoplanin在人早孕期母胎界面的表达及其对蜕膜基质细胞增殖及侵袭等生物学功能的影响。方法：收集正常早孕期蜕膜及绒毛组织，应用本实验室建立的胰酶消化、密度梯度离心法分离和培养蜕膜基质细胞（decidual ... 详细信息

目的：探讨跨膜糖蛋白podoplanin在人早孕期母胎界面的表达及其对蜕膜基质细胞增殖及侵袭等生物学功能的影响。方法：收集正常早孕期蜕膜及绒毛组织，应用本实验室建立的胰酶消化、密度梯度离心法分离和培养蜕膜基质细胞（decidual stromal cells，DSCs）和滋养细胞（trophoblasts，Tros）。采用免疫组织化学、免疫细胞化学以及流式细胞术分别检测podoplanin和及其受体C型凝集素样受体-2（C-type lectin-like receptor-2，clec-2）的表达水平和特点;并以siRNA干扰技术沉默蜕膜基质细胞podoplanin的表达，然后采用MTT比色法检测其活力、BrdU细胞增殖ELISA法检测其增殖能力、以流式细胞术分析其凋亡情况以及Transwell法分析podoplanin沉默后细胞侵袭能力的改变。结果：正常早孕蜕膜基质细胞和滋养细胞均表达podoplanin和clec-2，podoplanin在DSCs的表达水平显著高于Tros者，而clec-2在Tros和DSCs中表达水平均较低;采用siRNA干扰podoplanin在DSCs的表达后，在显著降低细胞活力并抑制细胞增殖和侵袭能力的同时，促进了该细胞的凋亡。结论：人早孕期母-胎界面均表达podoplanin及其受体clec-2，且podoplanin在蜕膜基质细胞的表达水平较高，提示podoplanin可能通过与内源性受体clec-2的相互作用参与调节DSCs的生物学功能并维持正常妊娠。Podoplanin可能在促进蜕膜基质细胞的增殖和侵袭、抑制其凋亡的信号通道中发挥着中介作用，这种作用有利于维持细胞自身的正常生物学功能和调节滋养细胞侵袭过程，从而最终有利于胎盘的形成和正常妊娠的维持。

关键词： podoplanin clec-2 蜕膜基质细胞增殖侵袭早孕期