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人chg-5胶质瘤细胞裸鼠原位移植模型的建立及其生物学特性分析

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第三军医大学学报 2003年第4期25卷 287-290页

作者：徐承平卞修武第三军医大学附属西南医院病理学研究所重庆400038

目的　建立人脑胶质瘤裸鼠脑内原位移植动物模型并探讨其生物学特性。方法　采用瘤细胞悬液接种法 ,将人脑chg 5胶质瘤细胞接种于裸鼠大脑实质内。分别于接种后 8、14、19、2 4和 3 0d处死动物并行病理检查、胶质纤维酸性蛋白免疫组化... 详细信息

目的　建立人脑胶质瘤裸鼠脑内原位移植动物模型并探讨其生物学特性。方法　采用瘤细胞悬液接种法 ,将人脑chg 5胶质瘤细胞接种于裸鼠大脑实质内。分别于接种后 8、14、19、2 4和 3 0d处死动物并行病理检查、胶质纤维酸性蛋白免疫组化、染色体核型分析及透射电镜检查。结果　肿瘤移植成瘤率为 10 0 % ,肿瘤生长稳定 ,肿瘤病理学检查符合人脑胶质瘤细胞的形态学特征和免疫表型。结论　本移植瘤模型能作为研究胶质瘤发生、生物学特性以及治疗研究的可靠动物模型。接种后

关键词： chg-5 胶质瘤细胞原位移植模型生物学特性中枢神经系统肿瘤

细胞死亡调控基因GRIM19重组腺病毒的构建及在恶性胶质瘤chg-5细胞中的表达

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第三军医大学学报 2008年第23期30卷 2194-2197页

作者：姚声涛黄轶曾昭淳唐文渊重庆医科大学附属第一医院神经外科重庆400016 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016 附属儿童医院临床分子医学中心重庆400014

目的构建细胞死亡调控基因GRIM19(genes associated with retinoid-IFN-induced mortality 19)重组腺病毒载体,观察GRIM19对病毒包装细胞是否具有细胞毒作用,并验证其对脑胶质瘤chg-5细胞的感染效率。方法采用PCR方法分别将GRIM19以及E... 详细信息

目的构建细胞死亡调控基因GRIM19(genes associated with retinoid-IFN-induced mortality 19)重组腺病毒载体,观察GRIM19对病毒包装细胞是否具有细胞毒作用,并验证其对脑胶质瘤chg-5细胞的感染效率。方法采用PCR方法分别将GRIM19以及EGFP基因亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV,在BJ5183(pAdeasy)菌内同源重组,筛选阳性克隆,酶切测序鉴定,线性化后转染293T细胞进行包装、扩增、纯化,PCR检测病毒上清,TCID50法测定病毒滴度并感染chg-5细胞后Western免疫印迹法验证GRIM19蛋白表达。结果连接重组后经酶切和测序法筛选出pAd-GRIM19;转染293T包装细胞,观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,细胞生长状态良好,未见明显细胞毒作用。Ad-GRIM19及Ad-EGFP初纯病毒经氯化铯梯度离心纯化最终获得约5×1010U/ml与8×1010U/ml滴度的重组病毒;将其体外感染胶质瘤chg-5细胞,均能达到90%左右的感染率,Western免疫印迹法表明Ad-GRIM19感染组GRIM19蛋白表达明显升高。结论成功构建了携带GRIM19基因的重组腺病毒,为体内外进一步研究GRIM19对脑胶质瘤的作用奠定了基础。

关键词： GRIM19 腺病毒胶质瘤细胞 chg-5

CpG ODN增加人脑胶质瘤细胞chg-5放射敏感性的实验研究

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CpG ODN增加人脑胶质瘤细胞CHG-5放射敏感性的实验研究

作者：颜伟第三军医大学

学位级别：硕士

目的:恶性肿瘤严重威胁人类的健康,发病率呈急剧上升的趋势。恶性胶质瘤,也称高分级胶质瘤(high-gradeglioma),是最常见的原发性脑恶性肿瘤。手术切除是首选的治疗方法,可脑恶性胶质瘤浸润性很强,手术切除率很低,术后几乎毫无例外地复... 详细信息

目的:恶性肿瘤严重威胁人类的健康,发病率呈急剧上升的趋势。恶性胶质瘤,也称高分级胶质瘤(high-gradeglioma),是最常见的原发性脑恶性肿瘤。手术切除是首选的治疗方法,可脑恶性胶质瘤浸润性很强,手术切除率很低,术后几乎毫无例外地复发。虽然新技术新方法不断涌现并应用于临床治疗,但是手术切除、放射和化学治疗仍然是肿瘤治疗的最基本手段。每年有超过70%的肿瘤病人接受放射治疗。然而,与几十年前相比,肿瘤的治愈率并没有明显的提高。影响肿瘤放疗疗效提高的重要原因是肿瘤细胞对放射线或抗癌药物产生了耐受性。为了提高肿瘤细胞对放射治疗的敏感性,上个世纪60年代英国的Adams教授提出亲电子理论,开始放射增敏剂研究,很多的科学家投身到放射增敏剂的研制中。采用分子生物学方法探讨肿瘤对射线产生耐受性和抗癌药物产生耐药性的原因,并针对性的设计、筛选高效低毒的肿瘤增敏药物,是目前研究的趋势;正是有了这些可以调控肿瘤细胞敏感性的化合物作为研究的“目标”,才能对复杂的肿瘤生物学尤其是涉及影响其放射及化学敏感性的生物学机制进行有效的研究。半个世纪过去了,增敏药物作为抗癌药物的一个分支,研究范围早已超出了最初提出的可以增强有机体对射线敏感性并用于肿瘤辅助治疗的概念,更多的增敏药物是通过克服肿瘤细胞对射线产生耐受性和抗癌药物产生耐药性,提高对肿瘤细胞的杀伤效果。本实验以新的免疫调节剂CpG ODN107研究对象,探讨CpG ODN107对chg-5细胞的放射增敏作用,并对CpG ODN107的增敏作用机制进行研究,为寻找高效、低毒的放射增敏药物奠定实验基础。方法:用不同浓度CpG ODN107(1、3、10、30μg/ml)处理chg-5细胞,然后经β射线(5 Gy)照射,①MTT法检测细胞的活力情况;②体外培养集落形成率与细胞划痕法观察细胞的集落形成和迁移能力;③ELISA法检测细胞TNF-α、IL-12、INF-γ的分泌水平;④电泳迁移率改变分析(EMSA)方法观察CpG ODN107与β射线诱导chg-5细胞AP-1活化的抑制作用;⑤Griess法检测细胞NO的含量;⑥建立裸鼠肿瘤种植模型,观察CpG ODN107与β射线对裸鼠种植瘤的抑制作用。结果:①CpG ODN107可抑制chg-5细胞活力,并呈一定量效关系;CpG ODN107联合β射线抑制chg-5细胞的活力作用更强,其中以10μg/ml CpG ODN107的作用最强;②CpG ODN107(10μg/ml)能抑制chg-5细胞增殖和迁移;③CpG ODN107可增加TNF-α、IL-12、INF-γ的分泌,在联合β射线照射后其作用更加显著;④CpG ODN107与β射线联合应用可抑制chg-5细胞AP-1的活化;⑤NO增强了对肿瘤细胞的杀伤;⑥CpG ODN107与β射线对荷瘤鼠皮下种植瘤的生长具有显著抑制作用。结论:CpG ODN107对chg-5有明显的放射增敏作用,并对裸鼠种植瘤具有显著抑制作用,其机制可能与CpG ODN107增强肿瘤细胞因子(IL-12、IFN-γ、TNF-α、NO等)的分泌、抑制chg-5细胞AP-1的活化有关。

关键词： CpG ODN LPS chg-5 放射增敏 AP-1 裸鼠

人恶性胶质瘤细胞系chg-5和SHG-44细胞骨架的比较研究

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第三军医大学学报 2001年第3期23卷 264-267页

作者：赵雯卞修武史景泉卢佳友陈自强第三军医大学附属西南医院病理学研究所重庆400038

目的　比较人恶性胶质瘤细胞系chg 5和SHG 44的细胞骨架系统成分 ,以进一步了解胶质瘤细胞骨架特征与其分化程度的关系。方法　利用免疫荧光细胞化学染色结合激光共聚焦显微镜观察两种细胞系微管、微丝、中间丝的含量及分布 ,并比较几... 详细信息

目的　比较人恶性胶质瘤细胞系chg 5和SHG 44的细胞骨架系统成分 ,以进一步了解胶质瘤细胞骨架特征与其分化程度的关系。方法　利用免疫荧光细胞化学染色结合激光共聚焦显微镜观察两种细胞系微管、微丝、中间丝的含量及分布 ,并比较几种常用固定剂和缓冲液对各骨架成分检测的影响。结果　除微管和微丝均被染色外 ,所有细胞均表达Vimentin(波形蛋白 ) ,而只有部分细胞呈胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)阳性。微管及中间丝在两种细胞胞质中的分布特征基本相似 ,但两种细胞微丝的定位、分布及荧光强度有一定差异。Vimentin型中间丝在SHG 44细胞中表达较强 ,而GFAP在chg 5细胞中表达较强。丙酮、75 %酒精和4%多聚甲醛对微管的固定效果较好 ;用醛类固定后中间丝 (尤其是Vimentin)染色极弱。结论　chg 5分化程度较SHG 44高。

关键词：胶质瘤细胞培养细胞骨架激光共聚焦显微术 chg-5 SHG-44

人脑胶质瘤细胞系chg-5的建立及其生物学特性的分析

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第三军医大学学报 1999年第12期21卷 880-883页

作者：陈自强卞修武辛榕殷育松第三军医大学基础医学部病理学教研室重庆400038

目的：建立一人脑胶质瘤细胞系并探讨其生物学特性。方法：取胶质瘤新鲜手术标本，经组织块法培养并克隆、建株，采用光镜、电镜、免疫组化、流式细胞术、染色体分析及异种移植瘤实验对细胞株生物学特性进行观察。结果：原位肿瘤、细胞... 详细信息

目的：建立一人脑胶质瘤细胞系并探讨其生物学特性。方法：取胶质瘤新鲜手术标本，经组织块法培养并克隆、建株，采用光镜、电镜、免疫组化、流式细胞术、染色体分析及异种移植瘤实验对细胞株生物学特性进行观察。结果：原位肿瘤、细胞株及移植瘤标本经电镜证实为星形细胞源性，免疫组化呈ＧＦＡＰ、Ｖｉｍｅｎｔｉｎ及ＶＥＧＦ阳性，异种移植成瘤率高。与ＳＨＧ－４４细胞比较，ＧＦＡＰ表达强，Ｖｉｍｅｎｔｉｎ表达弱。结论：ＣＨＧ－５为一恶性胶质瘤细胞系，且其生物学特性可能与ＳＨＧ－４４细胞有所不同。

关键词：胶质瘤细胞系体外培养 chg-5 细胞培养

Establishment of protein expression profile of malignant human glioma cell line chg-5 differentiation induced by Nordy and analysis of the differential proteome

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China Medical Abstracts 2007年第2期16卷 123-123页

作者：许建平 Inst Pathol Southwest Hosp 3rd Mil Med Univ Chongqing 400038

Identification of tumor invasion-related differentially expressed genes in different grades and all-trans retinoic acid-treated astrocytoma cell lines

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Neural Regeneration Research 2008年第11期3卷 1222-1228页

作者： Yi Zeng Zhong Yang Yangyun Han Chao You Department of Neurosurgery West China Hospital Sichuan University Chengdu 610041 Sichuan Province China Department of Neurosurgery Deyang People＇s Hospital Deyang 618000 Sichuan Province China Department of Neurobiology Third Military Medical University of Chinese PLA Chongqing 400038 China

BACKGROUND： Although several genetic aberrations and gene expressional changes have been shown to exist in tumors and different grades of astrocytomas, as well as in normal tissues, the gene profiling and genetic pathways associated with malignant transformation and progression remain unclear. OBJECTIVE： To identify differentially expressed genes related to tumor invasion from various grades and all-trans retinoic acid （ATRA）-treated astrocytoma cell lines by cDNA microarray. DESIGN, TIME AND SETTING： In vitro gene experiment was performed at the Department of Neurobiology, Third Military Medical University of Chinese PLA from January to October 2007. MATERIALS： Two different grades of astrocytoma cell lines chg-5 （WHO grade II ） and SHG-44 （WHO grade IV） were developed by our laboratory; a cell differentiation-inducing agent ATRA and a human cDNA microarray technology were used to determine differentially expressed genes （City University of Hong Kong）. METHODS： Total RNA was extracted using the Trizol test kit. Reverse transcription was performed using Superscript 11 reverse transcriptase. The cDNA product （target DNA） was marked with fluorochromes Cy3 （normal SHG-44） and Cy5 （chg-5 or ATRA-treated SHG-44）, followed by chip hybridization. MAIN OUTCOME MEASURES： Gene expression profiles of chg-5 vs. SHG-44 and ATRA-treated vs. normal SHG-44 were performed to identify differentially expressed genes. Several of these genes were randomly selected for Northern Blot analysis. The identification of genes that were similarly regulated （overlapping） was performed by comparing gene expression profiles between chg-5 and SHG-44 cells, and between SHG-44 cells with or without treatment with ATRA. RESULTS： No significant differences were observed between chg5 and SHG-44 cell line morphology. Under confocal microscopy, GFAP staining intensity of chg5 cells was greater than SHG-44 cells （t = 6.078 P = 0.004）. Growth curve analysis demonstrated that the speed of SHG-44 cell growth

关键词： all-trans retinoic acid astrocytoma cDNA microarray chg-5 invasion SHG-44

Screening of differentially expressed genes related to differentiation and proliferation by gene expression profiling of different grade astrocytoma cell lines

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Neural Regeneration Research 2008年第3期3卷 245-249页

作者： Yi Zeng Zhong Yang Yangyun Han Chao You Department of Neurosurgery West China Hospital Sichuan University Chengdu 610041 Sichuan Province China Department of Neurosurgery People＇s Hospital of Deyang City Deyang 618000 Sichuan Province China Department of Neurobiology the Third Military Medical University Chongqing 400038 China

BACKGROUND： The detection of differential gene expression in brain is possible by cDNA microarray technology, and the screening of differentially expressed genes might provide a biological basis for gene-targeted therapy for tumors. OBJECTIVE： To detect the differential expression of genes among astrocytoma SHG-44 （WHO grade Ⅳ）, chg-5 （WHO grade Ⅱ）, and ATRA-treated SHG-44 cell lines by cDNA microarray. DESIGN： Laboratory experiments in vitro. SETTING： Department of Neurobiology, the Third Military Medical University. MATERIALS： The experiment was performed at the Department of Neurobiology in the Third Military Medical University of the Chinese PLA from January to October 2007. The SHG-44 cell line （WHO grade Ⅳ） was established by Prof. Ziwei Du, and the chg-5 cell line （WHO grade Ⅱ） was set up by Prof. Xiuwu Bian from the Third Military Medical University of the Chinese PLA. The cDNA microarray containing 9182 known genes was prepared and provided by Dr. Yang Zhong at the City University of Hong Kong. METHODS： To screen differentially expressed genes from the gene expression profiles detected by cDNA microarray comparisons were made between chg-5 and SHG-44 cells and between SHG-44 cells with or without treatment with 10 μmol/L ATRA. Some differentially expressed genes were selected randomly for Northern Blot analysis to confirm the results of the microarray. The determination criteria for differential gene expression were as follows. ① The ratio of Cy5 signal to Cy3 was greater than 2.0 or less than 0.5. ② The results of the triplicate microarray hybridizations showed the same trend in three experiments. ③ A gene appeared at least two times on the triplicate microarray hybridizations, and the 3^rd value did not show a contradictory trend. A normalized ratio of Cy5 intensity to Cy3 greater than 2.0 or less than 0.5 was considered to represent up-regulated or down-regulated gene expression, respectively. MAIN OUTCOME MEASURES： The identification of genes that were

关键词： differentiation proliferation chg-5 SHG-44 astrocytoma cDNA microarray

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两种级别胶质瘤细胞系代谢基因的差异表达

中国神经精神疾病杂志 2009年第8期35卷 487-490页

作者：曾义杨忠游潮四川德阳市人民医院神经外科四川德阳618000 第三军医大学神经生物学教研室四川大学华西医院神经外科

目的基因的异常表达和功能调节在胶质瘤的进展过程中扮演着重要的作用。然而,导致胶质瘤由低级向高级进展的基因通路远未阐明。本实验拟从不同级别的胶质瘤细胞系筛选代谢相关的差异表达基因,为进一步研究胶质瘤进展的机制提供实验基础... 详细信息

目的基因的异常表达和功能调节在胶质瘤的进展过程中扮演着重要的作用。然而,导致胶质瘤由低级向高级进展的基因通路远未阐明。本实验拟从不同级别的胶质瘤细胞系筛选代谢相关的差异表达基因,为进一步研究胶质瘤进展的机制提供实验基础。方法以两株不同级别的胶质瘤细胞系(chg-5,WHOⅡ级;SHG-44,WHOⅣ级)和全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)为实验模型,运用cDNA微阵列技术进行研究。通过芯片杂交,分别检测chg-5以及全反式维甲酸诱导前后SHG-44的基因表达谱,筛选差异表达基因;随机选择数个差异基因进行Northern杂交实验,以验证cDNA微阵列的结果。结果本实验发现13个与胶质瘤进展密切相关的代谢基因存在差异表达,它们涉及细胞的糖类和核苷酸代谢。其中,TPI1,BPGM,ALDOA,AKR1B1,LDHA,ADSL,RRM1和NP表达上调,而UGT2B7,ACAT1,IMPDH2,PRPS1和PKM2表达下调。此外,有5个基因(TPI1,BPGM,ALDOA,LDHA和RRM1)在全反式维甲酸诱导的SHG-44细胞中也出现差异表达,提示这些基因不仅存在于不同级别的胶质瘤细胞系之间、而且存在于分化诱导处理的胶质瘤细胞之间。部分差异表达基因为Northern杂交实验所验证。结论利用cDNA微阵列技术首次发现有13个差异表达基因与胶质瘤细胞的代谢密切相关,它们可能在胶质瘤的恶性转化和进展中扮演着重要的作用。

关键词： chg-5 SHG-44 胶质瘤细胞系 cDNA微阵列