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CCHCR1通过与Astrin的相互作用调控CEP72及MCPH蛋白的中心体定位并影响肿瘤的生长

CCHCR1通过与Astrin的相互作用调控CEP72及MCPH蛋白的中心体定位...

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作者：应镇光深圳大学

学位级别：硕士

目的:中心体是动物细胞内最重要的无膜细胞器之一,它调控了微管组织并且保证了有丝分裂的正确进行。CCHCR1（HCR）作为中心体与P小体相关蛋白与银屑病、斑秃等多种疾病密切相关。然而,CCHCR1在细胞内确切功能,特别是其在中心体上所发挥... 详细信息

目的:中心体是动物细胞内最重要的无膜细胞器之一,它调控了微管组织并且保证了有丝分裂的正确进行。CCHCR1（HCR）作为中心体与P小体相关蛋白与银屑病、斑秃等多种疾病密切相关。然而,CCHCR1在细胞内确切功能,特别是其在中心体上所发挥的作用及相关分子机制尚不清晰。本课题旨在研究CCHCR1在中心体上的招募机制,探索其对中心体功能的影响,以进一步揭示相关疾病的机制。方法:1)使用免疫共沉淀技术确认CCHCR、astrin、CEP72的相互作用;2)构建HCR与astrin的分段并使用免疫共沉淀技术确认相互作用的蛋白区段;3)使用免疫印迹技术检测蛋白质的表达;4)使用免疫荧光技术观察细胞内蛋白的定位情况;5)使用si RNA转染的方法耗竭细胞内相关蛋白的表达水平;6)使用胸苷阻滞的方法同步化细胞周期以对比纺锤体的结构形态;7)使用平板克隆方法对比细胞克隆形成率;8)构建移植瘤小鼠模型以对比目标蛋白敲低后对肿瘤大小的影响。结果:1)HCR与中心体发育及有丝分裂密切相关的蛋白astrin存在直接的相互作用以及共定位。2)HCR的表达受到Astrin的正向调控,并与Astrin共同调控中心体蛋白CEP72在中心体的定位。3)敲低HCR能够导致MCPH蛋白群从中心体上去定位。4)在具体的细胞功能上,敲低HCR导致中心粒复制及有丝分裂缺陷以及微管组织能力下降。5)HCR的耗竭同样也能够导致DNA损伤及减缓肿瘤生长的速度。结论:HCR作为中心体相关蛋白确保了中心体的复制,也保障了众多中心体相关功能的运行。对HCR的深入研究能够为未来的癌症治疗提供潜在的治疗靶点。

关键词： CCHCR1 Astrin CEP72 中心体有丝分裂 DNA损伤

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中心体调节基因相关遗传变异与胃癌关联及其机制研究

中心体调节基因相关遗传变异与胃癌关联及其机制研究

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作者：王锦晨南京医科大学

学位级别：硕士

【研究背景】胃癌(Gastric cancer,GC)是全球危害最严重的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率分列第五位和第三位。胃癌的发生和发展是环境因素与遗传因素共同参与的复杂过程,幽门螺旋杆菌感染、烟草暴露、新鲜果蔬摄入不足、腌渍食物的食用... 详细信息

【研究背景】胃癌(Gastric cancer,GC)是全球危害最严重的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率分列第五位和第三位。胃癌的发生和发展是环境因素与遗传因素共同参与的复杂过程,幽门螺旋杆菌感染、烟草暴露、新鲜果蔬摄入不足、腌渍食物的食用,是导致胃癌发病的主要环境因素。然而,处于相同环境暴露的不同个体胃癌发病的风险存在差异,疾病易感性的差异目前被认为是由个体间基因组遗传变异所决定。全基因组关联研究(Genome-wide association study,GWAS)作为一种效率较高的研究策略,被广泛地应用于包括胃癌在内的许多人类复杂疾病的遗传易感性的研究。2008年,GWAS研究首次被运用于探索胃癌遗传易感性,发现了染色体8q24.3区域与胃癌易感性之间的关联;至今已报道了10余个胃癌易感区域,包括染色体1q22,3q13.31,5p13.1,5q14.3,6p21.1,6p22.1,8q24.3,9q34.2,10q23.33,12q24.11-12和20q11.21区域。然而,GWAS鉴定的遗传位点仅解释了胃癌较小一部分遗传度,这种现象被称为“遗传度缺失”。遗传度缺失的一个可能的解释是GWAS研究中严格的全基因组显著性阈值(即P0.2),筛选出6个与胃癌发生风险相关且在4个GWAS数据库中异质性较小(ICEP72(P=7.30×10)和YWHAG(P=1.60×10)的m RNA表达水平。通过对所有与rs1697950和rs6465096存在高LD的遗传变异进行功能注释,结果提示位于基因组调控区的rs924607(与rs1697950:r=1.00)和rs2961037-rs29

关键词：中心体胃癌易感性遗传变异 CEP72 YWHAG

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中心体调节基因遗传变异与胃癌关联及其机制研究

中心体调节基因遗传变异与胃癌关联及其机制研究

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2019年中国肿瘤标志物学术大会暨第十三届肿瘤标志物青...

作者：王锦晨颜财旺倪静靳光付南京医科大学江苏省肿瘤个体化医学协同创新中心江苏省恶性肿瘤生物标志物与防治重点实验室

研究背景中心体作为细胞中微管聚合中心和纺锤体的核心成分,在控制细胞的分裂、极性、生长和迁移中起重要作用。近年来,中心体调节基因的遗传变异也已显示出与多种肿瘤风险相关。但是中心体调节基因的遗传变异在胃癌中的作用尚不明确。... 详细信息

研究背景中心体作为细胞中微管聚合中心和纺锤体的核心成分,在控制细胞的分裂、极性、生长和迁移中起重要作用。近年来,中心体调节基因的遗传变异也已显示出与多种肿瘤风险相关。但是中心体调节基因的遗传变异在胃癌中的作用尚不明确。研究方法本研究采用大样本病例对照研究设计。首先,在MSigDB数据库五个中心体调节通路中提取了136个候选基因,基于千人基因组计划汉族人群数据,纳入候选基因及其上下游10Kb内29392个单核苷酸多态性(SNP)作为候选;通过4项胃癌GWAS数据库,采用逐步logistic回归,鉴定候选基因独立效应位点;结合Genotype-Tissue Expression(GTEx)数据库,筛选与其靶基因表达显著相关的独立效应位点,并基于胃粘膜及胚胎胃组织的各类组蛋白CHIP-seq数据,对与独立关联遗传变异存在高度连锁不平衡(linkage disequilibrium,LD)关系的所有遗传位点进行功能注释,并通过双荧光素酶报告基因实验评价了候选功能性位点对所在区域转录活性的影响;对于候选基因,在胃癌细胞系中应用siRNA敲低易感基因,并通过细胞表型实验,探究易感基因在胃癌发生中的作用。研究结果我们发现两个独立的遗传变异:rs1697950位于5p13.33(P=1.07×10-4),rs6465096位于7q11.23(P=3.17×10-4)与胃癌风险显著相关。eQTL分析显示,其风险等位基因rs1697950-A和rs6465096-T分别增加CEP72和YWHAG(P=7.30×10-4,1.60×10-3)的表达水平。分别对与rs1697950和rs6465096存在高LD的所有遗传变异进行功能注释,结果提示rs924607、rs2961037-rs2961038可能是两个候选区域的潜在功能性位点。报告基因实验证实位于CEP72上游的rs924607所在区域具有启动子活性,而位于YWHAG下游的rs2961037-rs2961038所在区域具有增强子活动;通过siRNA分别敲降CEP72和YWHAG后,胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力显著降低,提示该基因在胃癌的发生中起到促癌基因的作用。研究结论本研究证实中心体调节基因的遗传变异可能通过调节CEP72和YWHAG的表达,在胃癌的发生中发挥重要作用。

关键词：中心体胃癌遗传变异 CEP72 YWHAG

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