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第十一届全国免疫学学术大会

作者：徐俊杰刘炬李汭桦宰晓东军事医学科学院生物工程研究所

目的:抗体分析是疫苗免疫效果评价的重要内容,而抗体在体内极其丰富的多样性制约了对其产生、变化规律及特征信息的获取。利用高通量测序对体内抗体组进行分析,即抗体组库技术,能够以较低成本获得大量抗体序列,通过数据分析可以考察抗... 详细信息

目的:抗体分析是疫苗免疫效果评价的重要内容,而抗体在体内极其丰富的多样性制约了对其产生、变化规律及特征信息的获取。利用高通量测序对体内抗体组进行分析,即抗体组库技术,能够以较低成本获得大量抗体序列,通过数据分析可以考察抗体表达频率,推测抗原特异性抗体的产生,特别是能够兼顾抗体组全貌与单个抗体分子特征。本研究尝试利用抗体组库技术分析志愿者接种疫苗后的抗体组变化,探讨将该技术用于评价疫苗免疫效应的可行性。方法:志愿者第0、28天接种炭疽疫苗,于免前、初免后第7、28、35天采集外周血单个核细胞,进行抗体组库建库和高通量测序。利用IMGT数据库注释抗体可变区基因,分别从抗体胚系基因使用、cdr3组成和体细胞高频突变等角度考察抗体的多样性,进一步从克隆水平分析cdr3与cdr1或cdr2的组合关系、cdr3克隆的动态变化以及cdr3克隆的收敛情况。结果:志愿者间及不同采血时间点使用频率最高的抗体胚系基因均为重链V基因的1、3、4家族、D基因的3家族、J基因的4家族,κ链V基因的1、3家族、J基因的1、2、4家族,λ链V基因的1、2、3家族、J基因的3家族。cdr3的平均长度,重链为43nt,κ链37nt,λ链31nt,且不同时间点及志愿者间均无统计学差异。不同时间点三种抗体链的突变率有所波动,但这种波动同免疫程序无明显关联。cdr3与cdr1/2的配对关系体现了抗原选择压力对抗体组的塑造,但是其波动同免疫程序也无明显关联。在初免及加免后的第7天,新出现的重链cdr3克隆所占比例均超过60%。重链cdr3克隆的收敛性与志愿者抗原特异性抗体的变化趋势一致。结论:本研究表明,胚系基因使用频率、cdr3组成属于抗体组库的固有特征;体细胞高频突变和cdr3与cdr1/2的配对关系体现抗原选择压力;cdr3的动态变化和重链cdr3克隆的收敛性反映机体对疫苗的响应,可以用来评价疫苗的免疫效应。

关键词：疫苗抗体组库高通量测序免疫效应 cdr3

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从一例慢性嗜酸粒细胞白血病发现克隆性增殖T淋巴细胞

从一例慢性嗜酸粒细胞白血病发现克隆性增殖T淋巴细胞

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第三届全国血液免疫学学术大会

作者：杨永红李惠芳朱平北京大学第一医院

目的:为了检测与慢性嗜酸性粒细胞性白血病(CEL)发病相关的T淋巴细胞克隆,利用TCR βν家族T淋巴细胞基因指纹图谱鉴定法,分析一例慢性嗜酸性粒细胞性白血病患者的外周血T细胞克隆变化,了解与CEL疾病相关的T细胞受体(TCR)β可变区主要... 详细信息

目的:为了检测与慢性嗜酸性粒细胞性白血病(CEL)发病相关的T淋巴细胞克隆,利用TCR βν家族T淋巴细胞基因指纹图谱鉴定法,分析一例慢性嗜酸性粒细胞性白血病患者的外周血T细胞克隆变化,了解与CEL疾病相关的T细胞受体(TCR)β可变区主要接触抗原的cdr3序列特征。

关键词：慢性嗜酸性粒细胞性白血病 T淋巴细胞受体(TCR) 基因指纹图谱 cdr3

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人免疫球蛋白重链可变区基因的特征分析

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聊城大学学报（自然科学版） 2019年第4期32卷 11-17页

作者：石彬马嘉欣涂文静吴皓明陈先恋遵义医科大学附属医院贵州遵义563000 遵义医科大学检验医学院贵州遵义563000

目的:分析五类免疫球蛋白重链可变区基因的特征.方法:收集IMGT/LIGM-DB数据库中人类五类Ig重链可变区的基因序列,利用IMGT/HighV-QUEST分析其基因取用、V区AA变化、cdr3氨基酸长度和构成以及连接多样性.结果:IgM、IgG和IgE均较多地取用I... 详细信息

目的:分析五类免疫球蛋白重链可变区基因的特征.方法:收集IMGT/LIGM-DB数据库中人类五类Ig重链可变区的基因序列,利用IMGT/HighV-QUEST分析其基因取用、V区AA变化、cdr3氨基酸长度和构成以及连接多样性.结果:IgM、IgG和IgE均较多地取用IGHJ4、IGHV1-69和IGHV5-51,且在IgM、IgG、IgA与IgE中可观察到几个相似的优势V-J配对.IgD具有较高的V区突变,主要体现在FR3区的高突变(AA变化值为7.2±2.4),而IgM的每个结构域的突变均明显低于其他类Ig.此外,IgD具有较高P插入发生率和插入核苷酸数明显多于其他四类Ig.结论:本研究从基因特征上描绘了人类五类Ig相互间的相似性与差异性,这些结果可为抗体工程领域提供重要参考数据.

关键词： Ig 重链可变区基因 cdr3 IMGT/LIGM-DB

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基于肝癌特异性γδTCR转染细胞系筛选γδT细胞识别抗原肽的实验研究

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湖北医药学院学报 2021年第2期40卷 114-117,F0002页

作者：蒋乐章徐刘航刘跃虎喻青青郗雪艳湖北医药学院第四临床学院湖北十堰442000 湖北医药学院第一临床学院湖北十堰442000 湖北医药学院生物医药研究院湖北十堰442000 湖北医药学院基础医学院湖北十堰442000

目的:利用肝癌特异性γδTCR转染细胞系筛选γδT细胞识别抗原肽。方法:收集肝癌患者外周血中的单个核细胞,测定其中的γ9和δ2的cdr3序列,根据序列分析获得优势的cdr3序列,嵌入到长的γ9δ2序列。分别构建到PREP7和PREP9载体中,转染***... 详细信息

目的:利用肝癌特异性γδTCR转染细胞系筛选γδT细胞识别抗原肽。方法:收集肝癌患者外周血中的单个核细胞,测定其中的γ9和δ2的cdr3序列,根据序列分析获得优势的cdr3序列,嵌入到长的γ9δ2序列。分别构建到PREP7和PREP9载体中,转染***-T3.5细胞,经过抗生素筛选,获得肝癌特异性γδTCR转染细胞。以此细胞为探针,筛选噬菌体十二肽库,获得γδT细胞识别抗原肽。结果:成功构建肝癌特异性γδTCR转染细胞,并筛选了可能的γδT细胞识别的肝癌特异性抗原肽。结论:本实验研究为筛选γδT细胞识别的肝癌特异性抗原奠定基础。

关键词：肝癌 cdr3 γδT细胞抗原肽

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通用人源抗体筛选、表达体系的构建

通用人源抗体筛选、表达体系的构建

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吉林省第五届科学技术学术年会

作者：张福强王斗斗马杰丛登立宿晓云吉林大学药学院

在已构建好的具有 Fc 段的完全人源抗狂犬病病毒抗体表达载体基础上,利用 PCR 介导的定点突变技术,在载体中引入可供 cdr3区进行自由替换的限制性酶切位点,构建通用表达载体。体外合成人源、鼠源抗乳腺癌 Her2抗体的 cdr3区,重组至构建... 详细信息

在已构建好的具有 Fc 段的完全人源抗狂犬病病毒抗体表达载体基础上,利用 PCR 介导的定点突变技术,在载体中引入可供 cdr3区进行自由替换的限制性酶切位点,构建通用表达载体。体外合成人源、鼠源抗乳腺癌 Her2抗体的 cdr3区,重组至构建的通用载体,在毕赤酵母表达体系中进行诱导表达。应用 ELISA 和 Western Blot 技术对亲本抗体和新抗体进行生物学及免疫学分析。结果成功构表达出具有抗原中和活性的抗体,而且鼠源抗体的活性要稍高于人源抗体。

关键词：通用载体 cdr3 功能性抗体

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